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基于自噬探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜保护的作用机制

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中药新药与临床药理 2024年第6期35卷 814-821页

作者：刘琴周赛男刘杰民蔺晓源湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵州省人民医院贵州贵阳550002

目的通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇溶液复合法建立溃疡性... 详细信息

目的通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇溶液复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型;模型复制成功后灌胃给药,每日1次,持续14 d。观察大鼠一般状况,计算疾病活动指数(DAI)评分;苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理形态;透射电镜观察结肠上皮细胞自噬情况;免疫荧光染色法、蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测结肠组织肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测自噬蛋白5(Atg5)、自噬蛋白7(Atg7)、泛素结合蛋白62(p62)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组一般情况较差,DAI评分明显升高(P肠组织出现明显的上皮细胞损伤,电镜下自噬体的数量明显减少;结肠组织Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白及Atg5、Atg7 mRNA表达明显降低(P健脾益肠散组大鼠一般情况明显恢复,DAI评分明显降低(P肠组织病理损伤有不同程度的改善,电镜下自噬体的数量明显增多;结肠组织Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白及Atg5、Atg7 mRNA表达明显升高(P健脾益肠散可通过上调自噬相关分子Beclin1、LC3、Atg5及Atg7的表达,下调p62的表达,增强自噬以达到保护溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜损伤的作用。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎自噬 Beclin1 LC3 Atg5 Atg7 p62 大鼠

健脾益肠散对TNF-α诱导的树突状细胞NLRP3炎症小体信号通路表达的影响

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中国中医药信息杂志 2024年

作者：蔺晓源陈龙彪罗沛文周赛男刘杰民湖南中医药大学第一附属医院贵州省人民医院

目的观察健脾益肠散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的树突状细胞（DCs）NLRP3炎症小体信号通路相关蛋白表达的影响，进一步探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法分离培养C57BL/6小鼠原代DCs，分为正常组、模型组、阴性对照组、阳... 详细信息

目的观察健脾益肠散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的树突状细胞（DCs）NLRP3炎症小体信号通路相关蛋白表达的影响，进一步探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法分离培养C57BL/6小鼠原代DCs，分为正常组、模型组、阴性对照组、阳性药组和中药组，TNF-α诱导构建DCs炎症微环境模型，各组分别予不同处理后，采用CCK-8法检测细胞增殖能力，免疫荧光、Western blot分别检测DCs中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达，Western blot、RT-PCR分别检测DCs中白细胞介素（IL）-1β、IL-18蛋白和m RNA表达。结果与正常组比较，模型组DCs增殖能力显著下降（P健脾益肠散能抑制TNF-α诱导的DCs炎性反应，其作用机制可能与调控NLRP3炎症小体信号通路NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β表达有关。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎树突状细胞 NLRP3炎症小体

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3信号通路IL-1β、IL-18表达的影响

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中国中医药信息杂志 2024年第1期31卷 117-121页

作者：蔺晓源李开楊管洁刘杰民湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵州中医药大学贵州贵阳550025 湖南中医药大学湖南长沙410208 贵州省人民医院贵州贵阳550002

目的探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠NLRP3信号通路白细胞介素(IL)-1β、IL-18表达的影响。方法从40只SD大鼠随机选取10只作为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖溶液7 d制备UC大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺... 详细信息

目的探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠NLRP3信号通路白细胞介素(IL)-1β、IL-18表达的影响。方法从40只SD大鼠随机选取10只作为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖溶液7 d制备UC大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散组,每组10只。健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组予相应药液灌胃,正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。观察大鼠一般状况,并进行疾病活动指数(DAI)评分,ELISA检测大鼠血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(Caspase-l)含量,免疫组化染色、Western blot和RT-PCR检测结肠组织IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠一般状况较差,DAI评分显著升高(P肠组织IL-1β、IL-18蛋白和mRNA表达均显著升高(P健脾益肠散组和柳氮磺嘧啶组大鼠一般状况明显好转,DAI评分显著降低(P肠组织IL-1β、IL-18蛋白和mRNA表达均明显降低(P健脾益肠散可抑制NLRP3信号通路IL-1β、IL-18表达,改善结肠免疫炎症损伤,发挥治疗UC作用。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎 NLRP3信号通路白细胞介素-1β 白细胞介素-18 大鼠

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第16期29卷 154-161页

作者：蔺晓源宁杭李开楊管洁王丽刘春宏刘杰民湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学长沙410208 贵州中医药大学贵阳550025 贵州省人民医院贵阳550002

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的影响。方法:从60只SD大鼠中随机取10只为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖(DSS)溶液7 d复制UC大鼠模型后,再随机分为模... 详细信息

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的影响。方法:从60只SD大鼠中随机取10只为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖(DSS)溶液7 d复制UC大鼠模型后,再随机分为模型组、柳氮磺吡啶(0.3 g·kg^(-1))组和健脾益肠散高、中、低剂量(54.4、27.2、13.6 g·kg^(-1))组,连续给药14 d。每日观察记录大鼠的一般状态,给药前后进行疾病活动指数(DAI)评分;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL^(-1)8)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理变化,免疫组化法、蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测结肠组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-l)的蛋白阳性表达、蛋白及mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的一般状态相对较差,DAI评分显著增高(P肠出现病理学改变,血清IL-1β、IL-18含量显著升高(P肠组织NLRP3、ASC、Caspase-l的蛋白阳性、蛋白及mRNA的表达均显著增强(P健脾益肠散各剂量组的一般状态明显好转,DAI评分明显减小(P肠NLRP3、Caspase-l的蛋白表达均明显减少(P健脾益肠散高、中剂量组血清IL-1β、IL-18含量、结肠ASC的蛋白表达及NLRP3、ASC、Caspase-l的mRNA表达均明显降低(P健脾益肠散高剂量组NLRP3、ASC、Caspase-l的蛋白阳性表达均显著减少(P健脾益肠散中剂量组ASC、Caspase-l的蛋白阳性表达均明显减少(P健脾益肠散低剂量组ASC的mRNA表达明显降低(P健脾益肠散能通过调节NLRP3炎症小体信号通路,减少结肠免疫炎症损伤发挥治疗UC的效应。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体大鼠

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织HSP70表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2017年第22期23卷 91-96页

作者：蔺晓源余星雷贵玥李志远古娟王敏刘杰民湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 贵阳中医学院贵阳550025 贵阳中医学院第一附属医院贵阳550001 贵州省人民医院贵阳550002

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织热休克蛋白70(HSP70)蛋白和mRNA表达的影响。方法:将健康SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为2组,正常组和造模组;造模组采用二硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;待复制模型成功后将... 详细信息

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织热休克蛋白70(HSP70)蛋白和mRNA表达的影响。方法:将健康SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为2组,正常组和造模组;造模组采用二硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;待复制模型成功后将造模组随机分为5组,分别为模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg^(-1))以及健脾益肠散高、中、低剂量组(204,136,68 g·kg^(-1)),每组10只;灌胃相应药物21 d后,观察各组大鼠的一般状态和结肠黏膜组织损伤情况,免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分别检测大鼠结肠组织中HSP70的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜损伤评分显著升高(P肠黏膜损伤评分均显著降低(P肠组织HSP70的蛋白和mRNA表达(P健脾益肠散高剂量组最为明显(P健脾益肠散可能通过促进HSP70的表达而达到对UC大鼠结肠黏膜的免疫保护,从而发挥治疗作用。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎热休克蛋白70 蛋白表达基因表达

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠血清TLR4及其蛋白表达的影响

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时珍国医国药 2014年第3期25卷 522-524页

作者：刘杰民蔺晓源王敏纪云西贵州省人民医院贵州贵阳550002 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵阳中医学院第一附属医院贵州贵阳550001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠Toll样受体4(TLR4)的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散高、中、低剂量组和柳氮磺吡啶组各10只;除正常组外,其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模... 详细信息

目的探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠Toll样受体4(TLR4)的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散高、中、低剂量组和柳氮磺吡啶组各10只;除正常组外,其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;给药21d后,观察各组大鼠给药前后的体质量变化,用酶联免疫吸附测定法、免疫组织化学法分别检测各组大鼠血清TLR4水平和结肠组织TLR4蛋白表达情况。结果模型组大鼠体质量增长明显低于正常组(P健脾益肠散高、中剂量组能明显促进UC大鼠体质量增长(P肠组织TLR4蛋白表达均明显高于正常组(P健脾益肠散高剂量组TLR4水平和高、中剂量组TLR4蛋白表达均较模型组降低,差异有统计学意义(P健脾益肠散高剂量组对TLR4的影响与柳氮磺吡啶组比较差异不显著(P>0.05),但明显优于低剂量组(P健脾益肠散对UC肠粘膜免疫的保护作用可能与降低TLR4水平及其蛋白表达有关。

关键词：溃疡性结肠炎健脾益肠散 Toll样受体4 大鼠

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠CD80、LFA-1表达的影响

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中华中医药学刊 2021年第12期39卷 114-116,I0037-I0039页

作者：刘杰民蔺晓源文中群伍娇曹海仙简法元王敏贵州省人民医院贵州贵阳550002 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵州中医药大学贵州贵阳550025

目的研究健脾益肠散对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠共刺激分子CD80、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组,采用TNBS溶... 详细信息

目的研究健脾益肠散对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠共刺激分子CD80、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组,采用TNBS溶液灌肠法建立UC大鼠模型,给药21 d后取材,免疫组织化学法检测结肠组织中CD80、LFA-1的蛋白阳性表达,RT-PCR法检测结肠组织中CD80、LFA-1的mRNA表达。结果模型组大鼠结肠组织中CD80的蛋白阳性和mRNA表达均明显增加,LFA-1的蛋白阳性和mRNA表达均明显减少,与正常组比较差异有统计学意义(P健脾益肠散高、中、低剂量均可不同程度地降低CD80的蛋白阳性和mRNA表达、升高LFA-1的蛋白阳性和mRNA表达,与模型组比较差异有统计学意义(P健脾益肠散高剂量组优于健脾益肠散中、低剂量组(P健脾益肠散对UC肠黏膜的免疫炎症抑制作用可能与调节结肠组织中CD80、LFA-1的表达有关。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎 CD80 淋巴细胞功能相关抗原-1

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠MyD88的影响

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中国实验方剂学杂志 2014年第12期20卷 141-145页

作者：刘杰民蔺晓源王敏纪云西贵州省人民医院消化内镜科贵阳550002 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 贵阳中医学院第一附属医院贵阳550001 广西中医药大学第一附属医院南宁530023

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠髓样分化因子88(MyD88)的影响。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg-1)及健脾益肠散高(204 g·kg-1)、中(136 g·kg-1)、低剂量(68 g·kg-1)组,每组10只;除正常... 详细信息

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠髓样分化因子88(MyD88)的影响。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg-1)及健脾益肠散高(204 g·kg-1)、中(136 g·kg-1)、低剂量(68 g·kg-1)组,每组10只;除正常组外,其余均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;灌胃给药21 d后,用ELISA、免疫组化、Western blot及RT-PCR法检测各组大鼠血清MyD88含量和结肠组织MyD88的表达。结果:模型组大鼠血清MyD88水平及结肠组织MyD88蛋白和mRNA表达均明显高于正常组(P健脾益肠散高、中剂量组血清MyD88含量和结肠MyD88蛋白及mRNA表达均较模型组降低,差异有统计学意义(P健脾益肠散低剂量组MyD88蛋白表达亦低于模型组(P健脾益肠散高剂量组对MyD88的影响与柳氮磺吡啶组比较差异不显著,但明显优于低剂量组(P健脾益肠散对UC肠黏膜免疫的保护作用可能与降低外周血MyD88水平及结肠组织MyD88的蛋白和基因表达有关。

关键词：溃疡性结肠炎健脾益肠散髓样分化因子88

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、NF-κBp65的影响

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中华中医药学刊 2015年第6期33卷 1296-1298,I0002页

作者：张文秀蔺晓源刘金国张瑜纪云西刘杰民贵阳医学院贵阳550004 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵阳中医学院贵阳550002 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023 贵州省人民医院消化内镜科贵阳550002

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TNF-α、NF-κBp65的影响。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组各10只;采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;给药21 d后,EL... 详细信息

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TNF-α、NF-κBp65的影响。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组各10只;采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;给药21 d后,ELISA法测定各组大鼠血清TNF-α水平、免疫组化法检测结肠组织NF-κBp65阳性表达。结果:模型组大鼠血清TNF-α水平和结肠组织NF-κBp65阳性表达均较正常组明显增加(P健脾益肠散高剂量组TNF-α水平和高、中剂量组NF-κBp65阳性表达均较模型组降低,差异有统计学意义(P健脾益肠散高剂量组上述指标的变化与柳氮磺吡啶组比较差异不显著(P>0.05),但明显优于其低剂量组(P健脾益肠散对UC肠粘膜免疫的保护作用可能与降低外周血TNF-α水平及结肠组织NF-κBp65的阳性表达有关。

关键词：溃疡性结肠炎健脾益肠散 TNF-α NF-κBp65 大鼠