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Semaphorin-3a在脂多糖诱导的急性肾损伤中的作用和机制

Semaphorin-3a在脂多糖诱导的急性肾损伤中的作用和机制

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作者：田小芳重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:信号素蛋白-3a(Semaphorin-3a)在急性肾损伤中扮演着重要的角色,并有可能作为一种早期诊断的生物标志物,我们的研究主要探讨Sema3a蛋白在脂多糖诱导的急性肾损伤的小鼠模型中的作用。方法:按剂量将脂多糖(LPS,10mg/kg)腹腔注射进... 详细信息

目的:信号素蛋白-3a(Semaphorin-3a)在急性肾损伤中扮演着重要的角色,并有可能作为一种早期诊断的生物标志物,我们的研究主要探讨Sema3a蛋白在脂多糖诱导的急性肾损伤的小鼠模型中的作用。方法:按剂量将脂多糖(LPS,10mg/kg)腹腔注射进入野生型(WT)的雄性C57BL/6小鼠建立急性肾损伤模型。采集外周血液用于检测肾功能,收集肾脏组织部分用于组织蛋白免疫印迹法(WB)分析,剩余肾脏组织石蜡包埋切片用于H&E染色的组织病理损伤分析和Sema3a、中性粒细胞(Ly6G)及巨噬细胞(F4/80)抗原的免疫组化分析。肾组织中的肾小管上皮细胞的凋亡通过TUNEL方法进行检测。此外,用LPS在体外刺激大鼠永生肾小管上皮细胞(NRK-52E),利用WB方法对细胞相关的炎症蛋白表达变化和凋亡蛋白表达变化进行检测。同时,炎症蛋白的表达变化同时也通过细胞免疫荧光进行检测,利用流式细胞术检测细胞凋亡的数量变化。结果:Sema3a在LPS诱导的急性肾损伤的肾脏组组中的表达增加,并且通过抑制Sema3a可以减轻LPS诱导的肾脏组织的炎症损伤和肾小管上皮细胞的凋亡。同时,体外研究也表明LPS刺激NRK-52E后Sema3a的表达同样也明显增加,抑制Sema3a后可以缓解LPS诱导的肾小管上皮细胞的炎症反应和凋亡损伤。此外,我们还发现Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)/核因子(NF)-κB/p65和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路分别参与了 Sema3a介导的小管上皮细胞的炎症反应和凋亡损伤过程。结论:这些结果表明Sema3a在LPS诱导的小鼠的急性肾损伤的肾脏组织中出现表达升高,预示着Sema3a可能在加剧肾小管上皮细胞的炎症反应和凋亡损伤中扮演着重要的角色。Rac1/NF-κB/p65和JNK信号通路也可能参与了 Sema3a介导的小管上皮细胞的炎症反应和凋亡损伤的过程。生物学针对Sema3a蛋白的手段一定程度上有可能成为脓毒症相关的肾损伤的早期阶段有效的治疗措施。

关键词：信号素蛋白-3a 脂多糖炎症凋亡核因子-κB Ras相关的C3肉毒素底物1 c-Jun氨基末端激酶

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