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保肾通络方含药血清调节线粒体自噬对高糖诱导下足细胞氧化损伤的影响

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首都医科大学学报 2022年第5期43卷 687-693页

作者：王梦迪郭弋凡庞彦余刘羽飞赵文景首都医科大学附属北京中医医院肾病科北京100010 北京中医药大学北京100029

目的观察保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞氧化损伤的影响,并对保肾通络方的作用机制进行探讨。方法以体外培养的肾小球足细胞为研究对象,给予高浓度葡萄糖刺激,采用CCK-8法分析足细胞活力以确定最佳模型及给药浓度,分为正常对照... 详细信息

目的观察保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞氧化损伤的影响,并对保肾通络方的作用机制进行探讨。方法以体外培养的肾小球足细胞为研究对象,给予高浓度葡萄糖刺激,采用CCK-8法分析足细胞活力以确定最佳模型及给药浓度,分为正常对照组、高糖组、保肾通络方组,采用鬼笔环肽进行细胞骨架染色,Western blotting法检测足细胞裂孔膜蛋白nephrin,自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达,流式细胞术检测足细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位,免疫荧光共标LC3B及线粒体,观察各组足细胞内线粒体自噬泡的生成情况。结果30 mmol/L高糖干预48 h可显著降低足细胞活力(P保肾通络方含药血清可使高糖诱导的足细胞活力明显提升(P保肾通络方组足细胞骨架改善,ROS生成减少(P保肾通络方含药血清能够减轻高糖诱导的足细胞氧化损伤,其作用可能与改善足细胞线粒体自噬有关。

关键词：保肾通络方糖尿病肾脏疾病足细胞氧化损伤线粒体自噬

保肾通络方干预糖尿病肾脏疾病线粒体功能障碍的机制研究

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保肾通络方干预糖尿病肾脏疾病线粒体功能障碍的机制研究

作者：刘羽飞北京中医药大学

学位级别：硕士

目的以db/db糖尿病小鼠为研究对象,探索保肾通络方(BaoShenTongLuo formula,BSTL)干预糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)线粒体功能障碍的效应机制,为其治疗DKD提供科学依据。方法1.将雄性6周龄db/db小鼠随机分为模型组、保... 详细信息

目的以db/db糖尿病小鼠为研究对象,探索保肾通络方(BaoShenTongLuo formula,BSTL)干预糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)线粒体功能障碍的效应机制,为其治疗DKD提供科学依据。方法1.将雄性6周龄db/db小鼠随机分为模型组、保肾通络方组、卡格列净组,每组10只;同时设10只非糖尿病m/m小鼠为正常对照组。适应性喂养2周后开始灌胃。保肾通络方饮片水煎,每付煎2次后浓缩为生药1.66 g/mL。卡格列净片研粉溶于去离子水,浓度为1.30mg/mL。正常对照组和模型组灌胃生理盐水0.1 mL/g/d,保肾通络方组灌胃保肾通络方生药16.46 g/kg/d,卡格列净组灌胃卡格列净片12.86mg/kg/d。每天灌胃1次,持续12周。观察小鼠一般情况,每2周称体重、检测尾静脉随机血糖,每4周检测尿白蛋白肌酐比。2.给药12周后摘眼球取血,离心分离血清,称量肾重,固定或冻存肾组织。试剂盒检测血清肌酐、尿素氮、总胆固醇、甘油三酯、丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶。肾组织经HE染色、Masson染色和PAS染色后观察组织病理学改变。TUNEL染色观察细胞凋亡情况。免疫组织化学染色观察肾脏凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、足细胞蛋白Nephrin、线粒体生物合成相关蛋白PGC-1α的表达。Western Blot检测肾脏纤维化标志物α-SMA,抗凋亡蛋白BCL-2和凋亡相关蛋白BAX、CytC、Cleaved Caspase-3,足细胞Nephrin、Podocin,线粒体标志物COX Ⅳ,线粒体融合蛋白MFN-2、线粒体分裂蛋白DRP-1,线粒体生物合成相关蛋白PGC-1α、NRF-1、TFAM表达水平。qRT-PCR检测肾脏mtDNA相对拷贝量。试剂盒检测肾脏线粒体呼吸链复合体活力。结果1.药效学(1)体重和肾重体重比:与正常对照组相比,模型组体重显著升高(P肾重体重比显著降低(P肾重体重比有所升高,未达到统计学差异。(2)随机血糖:与正常对照组相比,模型组随机血糖显著升高(P肾组织病理:与正常对照组相比,模型组肾小球体积增大,基底膜增厚,系膜基质增生,肾小囊窄缩,毛细血管袢肥大,肾小管上皮细胞空泡变性,胶原纤维增生,糖原沉积增多。BSTL能够减轻上述病理改变。与正常对照组相比,模型组肾脏纤维化指标α-SMA表达水平显著升高(P肾组织凋亡:与正常对照组相比,模型组TUNEL染色阳性表达增加,BSTL干预后表达减少。与正常对照组相比,模型组肾脏抗凋亡蛋白BCL-2表达水平显著降低(P肾脏线粒体标志物COXⅣ蛋白表达水平显著降低(P肾脏线粒体呼吸链复合体Ⅱ和Ⅲ活力明显减弱(P<0.05)、Ⅰ和Ⅳ显著减弱(P<0.01),BSTL干预后呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活力明显增强(P<0.05),呼吸链复合体Ⅳ

关键词：保肾通络方糖尿病肾脏疾病线粒体功能障碍

保肾通络方抑制DN小鼠肾小球炎症和系膜基质增生减轻肾脏损伤机制研究

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天津中医药 2023年第11期40卷 1445-1450页

作者：崔方强王悦芬蔡朕孟元江心灿赵文景首都医科大学附属北京中医医院北京100010

[目的]探讨保肾通络方对于糖尿病肾病(DN)小鼠肾小球炎症及系膜基质增生的影响。[方法]KK-Ay小鼠高脂喂养4周建立DN小鼠模型。造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另外选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通... 详细信息

[目的]探讨保肾通络方对于糖尿病肾病(DN)小鼠肾小球炎症及系膜基质增生的影响。[方法]KK-Ay小鼠高脂喂养4周建立DN小鼠模型。造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另外选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组予保肾通络方灌胃,缬沙坦组予缬沙坦灌胃,模型组及正常对照组予等剂量的蒸馏水灌胃。连续灌胃12周。在灌胃0、4、8和12周收集24 h尿液检测尿蛋白水平。灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化检测各组小鼠肾小球Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)及纤连蛋白(FN)表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠肾小球CollagenⅣ及FN的mRNA表达水平,酶联免疫法检测各组小鼠肾组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。[结果]与正常对照组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;肾小球基质蛋白CollagenⅣ及FN蛋白和mRNA表达明显上调(P肾组织TNF-α和IL-6水平明显升高(P保肾通络方及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显降低(P肾小球系膜细胞增多及细胞外基质增生明显减轻;肾小球细胞外基质蛋白CollagenⅣ及FN蛋白和mRNA表达明显下调(P肾组织TNF-α和IL-6水平明显下降(P保肾通络方能够降低DN小鼠蛋白尿,改善肾功能,并且能够抑制肾小球炎症和系膜基质增生,减轻肾脏病理损伤。

关键词：保肾通络方糖尿病肾病细胞外基质 Ⅳ型胶原蛋白纤连蛋白炎性因子

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

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中国中西医结合肾病杂志 2024年第3期25卷 200-205,I0002,I0003页

作者：郭弋凡张宁刘羽飞庞彦余赵婧文崔方强刘梦超王梦迪赵文景北京中医药大学临床医学院北京100029 首都医科大学附属北京中医医院肾病科北京100010 中国中医科学院望京医院肾病内分泌科北京100102

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外... 详细信息

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P肾脏病理改善,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达减少(P保肾通络方含药血清能够恢复足细胞活力(P保肾通络方能够减轻KK-Ay小鼠及高糖诱导的足细胞凋亡,恢复促凋亡与抗凋亡失衡,抑制p53通路的激活,这可能是其发挥足细胞保护作用的潜在机制。

关键词：保肾通络方糖尿病肾脏疾病足细胞凋亡 p53

保肾通络方对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化的影响

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陕西中医 2024年第8期45卷 1011-1015,1025页

作者：崔方强江心灿王悦芬孟元蔡朕赵文景首都医科大学附属北京中医医院北京100010

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保... 详细信息

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药12周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白CollagenⅠ、FN及肾小管EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测。结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻。模型组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较模型组明显下调(均P肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(均P保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA蛋白及mRNA表达明显下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(均P保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管EMT。

关键词：糖尿病肾病保肾通络方益肾活血通络肾小管上皮细胞间充质转分化间质纤维化

保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠尿蛋白及尿Nephrin、Podocin排泄的影响

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环球中医药 2017年第12期10卷 1423-1427页

作者：唐珑王悦芬赵文景孙雪艳崔方强孟元赵静蔡朕王晖申子龙首都医科大学附属北京中医医院肾病科硕士研究生100010

目的观察不同剂量的保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠尿蛋白、尿Nephrin、尿Podocin排泄的影响,探讨本方对糖尿病肾病的作用机制及最佳剂量。方法将链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立的早期糖尿病肾病大鼠模型随机分为正常组、模型组及... 详细信息

目的观察不同剂量的保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠尿蛋白、尿Nephrin、尿Podocin排泄的影响,探讨本方对糖尿病肾病的作用机制及最佳剂量。方法将链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立的早期糖尿病肾病大鼠模型随机分为正常组、模型组及中药高、中、低剂量组。用药8周后,检测各组大鼠血糖、尿糖、尿白蛋白及尿Nephrin、Podocin的水平,并将尿Nephrin、Podocin的排泄浓度与尿白蛋白做相关性分析。结果药物干预8周后,中药各剂量组大鼠的血糖、尿糖、尿白蛋白水平较模型组有降低趋势,但组间差异无统计学意义(P>0.05);中药各剂量组大鼠尿Nephrin、Podocin排泄均低于模型组,其中中药中剂量组、中药高剂量组尿Nephrin排泄明显低于模型组(P0.05);Pearson相关分析显示尿Nephrin、尿Podocin排泄呈正相关(r=0.517,P保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠足细胞可能存在保护作用,其中对尿Nephrin排泄的影响可能先于尿白蛋白出现。

关键词：糖尿病肾病保肾通络方尿Nephrin 尿Podocin 足细胞

保肾通络方联合缬沙坦胶囊治疗糖尿病肾病临床研究

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长春中医药大学学报 2020年第4期36卷 699-702页

作者：云锐张世光孙良波北京朝阳糖尿病医院内分泌科北京100025 陕西省榆林市星元医院肾内科陕西榆林719000

目的探讨保肾通络方联合缬沙坦胶囊在治疗糖尿病肾病患者中的应用及对患者肾功能的影响。方法将200例糖尿病肾病患者随机分为观察组和对照组,各100例。2组均进行基础降糖、降压、降脂治疗,对照组予缬沙坦治疗,观察组联合保肾通络方治疗... 详细信息

目的探讨保肾通络方联合缬沙坦胶囊在治疗糖尿病肾病患者中的应用及对患者肾功能的影响。方法将200例糖尿病肾病患者随机分为观察组和对照组,各100例。2组均进行基础降糖、降压、降脂治疗,对照组予缬沙坦治疗,观察组联合保肾通络方治疗。连续治疗2个月后观察2组临床疗效、中医证候积分、炎性因子水平、肾功能指标、不良反应发生率。结果观察组总有效率为89.00%(89/100),高于对照组为77.00%(77/100)(P肾功能指标尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿蛋白排泄率(UAE)、β2-微球蛋白(β2-MG)水平均低于对照组(P0.05)。结论保肾通络方联合缬沙坦胶囊治疗糖尿病肾病患者,能够改善患者的各项症状,降低中医证候积分、炎性因子水平,改善患者的肾功能指标,且治疗安全性良好。

关键词：糖尿病肾病缬沙坦保肾通络方中医证候炎性因子肾功能不良反应发生率

保肾通络方对KK-Ay小鼠足细胞p38通路及凋亡的作用机制研究

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辽宁中医杂志 2020年第7期47卷 175-178,I0005页

作者：崔方强赵文景王悦芬孟元蔡朕陈广峰冯鹏首都医科大学附属北京中医医院北京100010 山东中医药大学附属医院山东济南250014 中日友好医院北京100029

目的探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠肾脏足细胞p38通路及凋亡的影响,进而阐明保肾通络方防治DN的分子机制。方法30只KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组和缬沙坦组分别... 详细信息

目的探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠肾脏足细胞p38通路及凋亡的影响,进而阐明保肾通络方防治DN的分子机制。方法30只KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组和缬沙坦组分别给予保肾通络方和缬沙坦灌胃,正常对照组和模型组予等剂量蒸馏水灌胃,实验周期为12周。结果与正常对照组相比,模型组足细胞p38通路显著激活,足细胞凋亡数目明显增加(P保肾通络方组及缬沙坦组小鼠足细胞p38通路激活被抑制,足细胞凋亡数目明显减少(P保肾通络方可以抑制DN小鼠足细胞p38通路激活,减轻足细胞凋亡,可能是其降低DN蛋白尿,延缓疾病进展的分子机制。

关键词：保肾通络方糖尿病肾病足细胞 p38通路凋亡

保肾通络方对糖尿病肾病Ⅲ～Ⅳ期患者临床疗效及足细胞损伤的影响

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环球中医药 2020年第1期13卷 153-156页

作者：孙雪艳赵文景刘志强沈存王悦芬王玉锋王亚伟首都医科大学附属北京中医医院肾病科

目的观察保肾通络方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)Ⅲ~Ⅳ期患者的临床疗效及足细胞损伤的影响,探讨保肾通络方治疗DN的作用机制。方法采用随机、双盲、安慰剂对照的试验设计方法,选取2015年1月至2017年6月首都医科大学附属北京... 详细信息

目的观察保肾通络方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)Ⅲ~Ⅳ期患者的临床疗效及足细胞损伤的影响,探讨保肾通络方治疗DN的作用机制。方法采用随机、双盲、安慰剂对照的试验设计方法,选取2015年1月至2017年6月首都医科大学附属北京中医医院肾病科门诊及住院收治的DNⅢ~Ⅳ期患者88例。通过软件SPSS 17.0产生随机数字将纳入患者随机分为治疗组和对照组,每组各44例。两组患者除基础治疗外,治疗组予保肾通络方颗粒,20 g/次,2次/日,对照组予保肾通络方安慰剂颗粒,20 g/次,2次/日,疗程均为3个月。观察2组患者治疗前后24小时尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、血白蛋白、尿液中Podocin、Nephrin、Podocalyxin排泄量的变化情况,并进行统计分析。结果与本组治疗前比较:治疗组24小时尿蛋白定量明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组治疗前后血肌酐相对稳定,差异无统计学意义(P>0.05),而对照组在治疗第2和3个月血肌酐升高,差异具有统计学意义(P保肾通络方对DNⅢ~Ⅳ期患者具有良好减少尿蛋白、稳定肾功能的临床疗效,其作用机制可能与减少足细胞损伤有关。

关键词：糖尿病肾病足细胞损伤保肾通络方益气养阴活血临床研究足细胞标志蛋白