检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达与纯化

中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 799-801页

作者：葛猛徐俊杰李冰董大勇宋小红郭强赵剑陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的　在大肠杆菌中表达炭疽菌保护性抗原受体结合区。方法　将大肠杆菌外膜蛋白A(OmpA)的信号肽序列融合到炭疽菌保护性抗原 (PA)受体结合区 ,即PA结构域 4 (PA D4 )基因的5′端 ,构建成分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中尝试PA D4的表达 ... 详细信息

目的　在大肠杆菌中表达炭疽菌保护性抗原受体结合区。方法　将大肠杆菌外膜蛋白A(OmpA)的信号肽序列融合到炭疽菌保护性抗原 (PA)受体结合区 ,即PA结构域 4 (PA D4 )基因的5′端 ,构建成分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中尝试PA D4的表达 ,并对重组蛋白进行纯化和鉴定。结果　重组PA D4以可溶形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。经过离子交换层析和凝胶过滤纯化 ,每升诱导培养物可获得约 10mgPA D4。蛋白N端测序表明PA D4与天然序列一致。免疫印迹试验显示PA D4可与抗PA血清结合。结论　在大肠杆菌中实现了PA D4的分泌型表达 ,为进一步评估其作为新型疫苗和潜在治疗药物的可能性打下基础。

关键词：受体结合保护性抗原 PA 炭疽菌表达与纯化大肠杆菌免疫印迹试验结构域信号肽序列离子交换层析

百日咳杆菌粘附素中针对支气管败血波氏杆菌的保护性抗原肽的筛选

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2010年第9期50卷 1239-1245页

作者：赵战勤王臣薛云丁轲张春杰程相朝李银聚刘一尘吴庭才河南科技大学动物科技学院动物病原微生物实验室洛阳471003 (河南科技大学医学技术与工程学院医学工程实验室洛阳471003

【目的】本研究通过百日咳杆菌黏附素（PRN）基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。【方法和结果】利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RⅠ和RⅡ区域多肽（双拷贝）的表达... 详细信息

【目的】本研究通过百日咳杆菌黏附素（PRN）基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。【方法和结果】利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RⅠ和RⅡ区域多肽（双拷贝）的表达,命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC、GST-2PRⅠ和GST-2PRⅡ。Westernblot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3LD50的支气管败血波氏杆菌（Bb）强毒株HH0809进行鼻腔攻击后,GST-2PRⅠ的保护率为66.7%（6/9）,其余4者的保护率均为100%（9/9）;当使用10LD50的HH0809攻击时,其保护率分别为77.8%（7/9）、33.3%（3/9）、66.7%（6/9）、10%（1/10）和60%（6/10）。在被动免疫保护试验中,当使用10LD50的HH0809进行腹腔攻击时,GST-2PRⅠ抗血清对小鼠的保护率为20%（2/10）,其余4者的保护率均为100%（10/10）;但经天然PRN吸附后的5种兔抗血清均无任何保护力（0/5）。【结论】本研究表明PRN的N端和C端表达多肽均具有较强的针对Bb的保护力,且C端强于N端;而C端RⅡ区域的保护力也显著强于N端RⅠ区域。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素保护性抗原

重组A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原的制备及初步免疫保护作用研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第1期20卷 63-65页

作者：林明辉荫俊邢洪光侯晓军王慧宋伟昆明总医院检验科昆明650032 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

诱导表达重组工程菌pBV cpa4 0 8后 ,将表达菌体超声破碎 ,上清经 80 %饱和硫酸铵一次沉淀 ,经透析 ,上凝胶过滤层析柱进行分离纯化 ,薄层凝胶扫描结果显示 ,纯化的蛋白纯度达 95 %以上 ;用纯化蛋白免疫昆明小鼠 ,以 1 0MLD1 0 0 腹腔... 详细信息

诱导表达重组工程菌pBV cpa4 0 8后 ,将表达菌体超声破碎 ,上清经 80 %饱和硫酸铵一次沉淀 ,经透析 ,上凝胶过滤层析柱进行分离纯化 ,薄层凝胶扫描结果显示 ,纯化的蛋白纯度达 95 %以上 ;用纯化蛋白免疫昆明小鼠 ,以 1 0MLD1 0 0 腹腔进行攻击 ,被免疫小鼠获得了 10 0 %的保护。

关键词： a毒素保护性抗原免疫保护作用产气荚膜梭菌重组表达

针对炭疽保护性抗原不同结构域的中和性单克隆抗体的筛选和鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2005年第6期45卷 947-951页

作者：徐俊杰张军刘树玲吕天敬陈薇李冠霖葛猛郭强军事医学科学院微生物流行病研究所

炭疽保护性抗原(PA)是炭疽毒素的重要组分,同时也是现有炭疽疫苗的主要有效成分,在炭疽杆菌的致病与免疫中发挥关键作用。以重组PA为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,结合炭疽毒素敏感细胞的毒性中和试验,大量筛选抗PA单克隆抗体,获得了... 详细信息

炭疽保护性抗原(PA)是炭疽毒素的重要组分,同时也是现有炭疽疫苗的主要有效成分,在炭疽杆菌的致病与免疫中发挥关键作用。以重组PA为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,结合炭疽毒素敏感细胞的毒性中和试验,大量筛选抗PA单克隆抗体,获得了9株炭疽毒素中和性单抗。进一步分析表明这些单抗以IgG1亚类为主,分别识别PA3个结构域的4个不同中和表位区。针对结构域2的4株单抗识别同一表位区,其中3株单抗的中和活性强于抗PA多抗;针对结构域4的4株单抗识别两个不同表位区;另有1株单抗识别位于结构域3的表位。实验结果提示PA具有多个中和表位,分别位于其不同结构域,其中结构域2、4包含主要中和表位。实验中获得的针对不同表位的中和性单抗为深入研究PA的免疫保护机理提供了工具,也为研制针对炭疽毒素的被动免疫制剂和治疗药物打下基础。

关键词：炭疽杆菌炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体中和表位

A型肉毒毒素保护性抗原的基因修饰及高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第4期20卷 544-547页

作者：王慧荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因... 详细信息

在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中 ,扩增小的突变基因 ,克隆入pGEM T载体进行测序 ,并以pBV2 2 0为表达载体构建重组表达质粒 ,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明 ,重组表达产物占全菌蛋白的 4 0 % ,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达。

关键词： A型肉毒毒素保护性抗原基因修饰高效表达

重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第5期20卷 652-655页

作者：徐俊杰董大勇宋小红葛猛李冠霖付玲庄汉澜陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,... 详细信息

构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。

关键词：炭疽杆菌炭疽毒素保护性抗原表达纯化分泌型表达质粒大肠杆菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

C型产气荚膜梭菌保护性抗原的免疫原性

中国生物制品学杂志 2008年第3期21卷 201-203页

作者：韩学波曾瑾王玉炯蔡琴宁夏大学生命科学学院

目的研究C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1抗原的免疫原性。方法在对重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1进行优化表达的基础上,制备包涵体粗提物、全细胞培养物及全细胞乳糖诱导培养物3种抗原,对ICR小鼠进... 详细信息

目的研究C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1抗原的免疫原性。方法在对重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1进行优化表达的基础上,制备包涵体粗提物、全细胞培养物及全细胞乳糖诱导培养物3种抗原,对ICR小鼠进行攻毒保护试验。结果重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1能够表达α-β2-β1融合蛋白,该融合蛋白能够有效刺激免疫小鼠产生特异性抗体,达到保护的目的。结论已获得具有一定免疫原性的重组工程菌,可作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。

关键词：产气荚膜梭菌保护性抗原融合蛋白免疫原性

无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原基因序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2009年第3期22卷 259-262页

作者：王雅英王丽婵徐颖华张庶民中国药品生物制品检定所血清室北京100050

目的对我国无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原的基因序列进行分析。方法分别用PCR扩增CS菌株的PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3基因,克隆至pGEM-TEasy vector中,进行序列测定及分析,并确定其基因型。结果获得了CS菌株PT、FHA、PRN... 详细信息

目的对我国无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原的基因序列进行分析。方法分别用PCR扩增CS菌株的PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3基因,克隆至pGEM-TEasy vector中,进行序列测定及分析,并确定其基因型。结果获得了CS菌株PT、FHA、PRN、FIM2和FIM35段基因克隆,其核苷酸和氨基酸序列与GenBank中收录的相应百日咳杆菌的同源性均在90%以上,种系进化树分析结果与鲍特菌属进化结果一致。CS的基因型为:PTS1属于ptxS1B型,PTS3属于ptxS3A型,FHA属于FHA1型,PRN属于PRN1型,FIM2属于FIM2-1型,FIM3属于FIM3A型。结论本研究为更好地对我国无细胞百日咳疫苗进行质量控制和百日咳杆菌的基因漂移研究奠定了基础。

关键词：无细胞百日咳疫苗 CS菌株保护性抗原基因序列

用单克隆抗体作Q热立克次体保护性抗原的分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 1989年第5期9卷 313-317页

作者：俞树荣温博海第三军医大学微生物学教研室，重庆

本文选择Ⅰ相Q热立克次体单克隆抗体（McAbⅠ）1-4B5及Ⅱ相单克隆抗体（McAb Ⅱ）2-2E5作中和试验及被动保护试验证明，McAbⅠ1-4B5具有明显的抗Q热立克次体感染的作用。不仅1-4B5的中和指数可达2000，而且在BALB/c小鼠腹腔接种3.2×10 ... 详细信息

本文选择Ⅰ相Q热立克次体单克隆抗体（McAbⅠ）1-4B5及Ⅱ相单克隆抗体（McAb Ⅱ）2-2E5作中和试验及被动保护试验证明，McAbⅠ1-4B5具有明显的抗Q热立克次体感染的作用。不仅1-4B5的中和指数可达2000，而且在BALB/c小鼠腹腔接种3.2×10 3 MID 50 纯化活立克次体前后给以总量为600µg的1-4B5可完全保护小鼠不被感染；McAb Ⅱ2-2E5则不能中和立克次体毒性及抵御感染的发生。免疫扩散及免疫印迹试验出现保护性McAb Ⅰ针对Q热立克次体LPS的阳性反应。由Ⅰ相立克次体分离的LPS及全细胞可溶性抗原经SDS-PAGE后，仅McAbI能与低分子量（性，而无保护作用的McAb Ⅱ则否。LPS抗原经蛋白酶K及KIO 4 处理后的反应性表明其决定簇为多糖性质。这些结果提示，Q热立克次体LPS的低分子量多糖组分可能是它重要的保护性抗原。

关键词： Q热立克次体保护性抗原 LPS