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中华外科杂志 2013年第2期51卷 171-172页

作者：翟国君姚伟娟程贤铭韩金涛赵军李选董国祥北京大学第三医院介入血管外科北京100191 北京大学基础医学院血液流变中心河北省馆陶县人民医院外科

改善人工血管桥再内皮化对提高远期通畅率具有重要意义，目前对静脉人工血管桥再内皮化研究尚不多。近年发现，他汀类药物除具有良好的调脂作用外，还具有多效性的调脂外作用，

关键词：再内皮化血管桥促血管新生洛伐他汀人工静脉他汀类药物调脂外作用

骨桥蛋白通过促血管新生调节心肌梗死后左室重构

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上海医学 2005年第4期28卷 301-303页

作者：赵学钟才进吴宗贵 Mahipal Singh Krishna Singh 第二军医大学附属长征医院心内科上海200003 Department of Physiology College of Medicine East Tennessee State University USA

目的观察骨桥蛋白(OPN)转基因小鼠(OPN -/- )心肌梗死后心肌血管新生能力及其与左室重构的关系.方法采用OPN -/- 小鼠体外心肌内皮细胞管结构形成、体内心肌Matrigel植入及心肌梗死3种模型,以野生型小鼠(WT)作为对照.结果体外培养的OPN ... 详细信息

目的观察骨桥蛋白(OPN)转基因小鼠(OPN -/- )心肌梗死后心肌血管新生能力及其与左室重构的关系.方法采用OPN -/- 小鼠体外心肌内皮细胞管结构形成、体内心肌Matrigel植入及心肌梗死3种模型,以野生型小鼠(WT)作为对照.结果体外培养的OPN -/- 小鼠心肌血管内皮细胞在Matrigel的管结构生成显著减弱,可溶性OPN能明显改善OPN -/- 内皮细胞的管结构生成能力.在OPN -/- 小鼠心肌Matrigel植入模型,毛细血管样结构生成的体积明显降低.OPN -/- 小鼠心肌梗死后7和14 d,梗死区毛细血管密度和小动脉密度均明显降低.且在梗死后7～14 d,OPN -/- 小鼠小动脉的去血管化速率显著加快.OPN -/- 小鼠心肌梗死后,左室扩大及梗死区室壁变薄均较对照组显著.结论 OPN的促血管新生机制在心肌梗死后左室重构的调节中起重要作用.

关键词：后左室重构心肌梗死促血管新生 Matrigel 调节白通血管新生能力血管内皮细胞毛细血管密度血管新生机制结构生成小鼠心肌转基因小鼠骨桥蛋白体外培养生成能力左室扩大 OPN 小动脉梗死区死后野生型可溶性

血管紧张素Ⅱ对人脐血内皮祖细胞促血管新生因子HIF1a和VEGF基因表达的影响

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中国临床医学 2008年第4期15卷 441-444页

作者：白英楠沈雳周京敏邹云增复旦大学附属中山医院心内科上海市心血管病研究所上海200032

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对内皮祖细胞（EPC）促血管新生主要因子HIF1a、VEGF基因表达的影响以及AT1受体阻滞剂的干预效果。方法：分离人脐血单个核细胞，在VEGF和bFGF存在条件下培养7-8d得到EPC；随机分对照组、AngⅡ组（10^-6... 详细信息

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对内皮祖细胞（EPC）促血管新生主要因子HIF1a、VEGF基因表达的影响以及AT1受体阻滞剂的干预效果。方法：分离人脐血单个核细胞，在VEGF和bFGF存在条件下培养7-8d得到EPC；随机分对照组、AngⅡ组（10^-6mol·L^-1）、AngⅡ＋氯沙坦预处理组。半定量RT-PCR检测EPC内血管紧张素原（ATG）mRNA表达情况；血管紧张素受体AT1、AT2以及HIF1a、VEGFmRNA表达水平。结果：人脐血EPC表达AT1受体、AT2受体，不表达ATG。外源性AngⅡ作用后，EPC的AT1受体、AT2受体mRNA表达量较对照组显著增加（P〈0.05）；HIF1a、VEGF mRNA表达量较对照组显著降低（P〈0．05）。用氯沙坦预处理细胞后再用AngⅡ刺激，与单纯AngⅡ刺激组比较，HIF1a、VEGF mRNA表达明显增加。结论：RT-PCR结果显示，人脐血来源的EPC不表达血管紧张素原基因，因而不能产生内源性AngⅡ；外源性AngⅡ通过AT1／AT2受体下调EPC的促血管新生主要因子HIF1a和VEGF的表达，但详细机制尚需进一步研究。

关键词：内皮祖细胞血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ受体血管紧张素原促血管新生

EphB4-ephrinB2反向信号在血府逐瘀汤促血管新生中的作用研究

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EphB4-ephrinB2反向信号在血府逐瘀汤促血管新生中的作用研究

作者：张静思中国中医科学院

学位级别：硕士

血管生成是在原有血管结构的基础上,由不同信号参与并刺激内皮细胞增殖、迁移、粘附,甚至是诱导血管周围细胞核胞外基质重构的多步骤过程。内皮细胞受体酪氨酸激酶是调节血管新生的重要因素,其代表性家族成员血管内皮生长因子(VEGF)和... 详细信息

血管生成是在原有血管结构的基础上,由不同信号参与并刺激内皮细胞增殖、迁移、粘附,甚至是诱导血管周围细胞核胞外基质重构的多步骤过程。内皮细胞受体酪氨酸激酶是调节血管新生的重要因素,其代表性家族成员血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素(angiopoietins)对血管新生的作用已得到证实并逐渐应用于临床。Eph是已知受体酪氨酸激酶家族(RTKs)中最大的亚家族,不同于其他RTKs成员同可溶性配体连接的特点,Eph通过细胞接触的形式同跨膜配体ephrin特异性结合。而配体ephrin主要发挥调节细胞迁移和粘附的作用。Eph/ephrin之间互为配-受体,形成双向信号,参与体内多种生理过程的调节,研究较为广泛的是其在神经系统中的作用。此外,还有不少研究指出,Eph/ephrin在血管新生过程发挥重要调节作用,尤其是EphB4和ephrinB2在动静脉上的特异性分布以及配-受体相互作用形成的双向信号,不仅调节胚胎期血管的发育,而且继续影响出生后血管新生。本课题组前期研究表明,血府逐瘀汤具有较好的促血管新生作用,且促血管新生作用与药物浓度和作用时间呈倒U型关系,提示该药具有促血管适度生长的作用,有别于VEGF等的一味促血管生成,避免出现血管过度生长。EphB4/ephrinB2在调节血管生成方面得到越来越多的肯定,而课题组应用基因芯片技术观察血府逐瘀汤对多种调控血管生成的因子的影响,检测发现配体ephrinB2呈上调表达。血府逐瘀胶囊在保持了血府逐瘀汤原方配伍的基础上,对剂型稍做改变,服用更加方面,而且可控性强,是的实验结果更客观可信。本实验用胶囊剂,目的在于探索血府逐瘀汤如何通过EphB4/ephrinB2信号通路促血管新生继而发挥适度调控的作用。目的通过观察血府逐瘀含药血清不同浓度(1.25%,2.5%,5%)下对体外成血管的影响,筛选出药物促血管新生的最佳作用浓度和时间;并在最佳作用条件下研究药物对EphB4/ephrinB2反向信号的调控。从细胞效应、转录水平、蛋白活性水平探讨血府逐瘀汤在微血管内皮细胞中对靶信号的作用机制,从而为血府逐瘀汤适度调节血管新生和临床应用提供实验支持。方法1含药血清的制备将健康成年男性志愿者随机分为药物干预组和空白血清组。药物组每日按要求服用二倍剂量的血府逐瘀汤,七天为一个周期,最后一次服药2小时后每人左静脉采集血液50ml,高速离心制备成含药血清,56℃水浴30分钟灭活补体;随后在无菌操作下用微孔滤膜进行过滤,分装后置于-20℃冰箱备用。空白血清组不做任何干预,血清制备收集方法同药物血清。2实验分组将常规培养的人微血管内皮细胞(HMEC-1)随机分为6组：血清含量分别为1.25%、2.5%、5%的空白血清干预组和药物血清干预组,每组血清均按比例溶于含5%胎牛血清(FBS)的MCDB-131培养基中。3采用基质胶检测药物对HMEC-1体外成血管能力的影响不同血清含量的药物组和空白组分别干预24h、48h和72h,应用In Vitro Angiogenesis Assay试剂盒,37℃温箱培养4小时后倒置显微镜高倍视野下随机计数管腔形成数量,比较相同血清含量下药物组和空白组间的差异,并挑选出最佳药物浓度和作用时间。4实时定量PCR技术检测EphB4/ephrinB2表达用Trizol法提取总RNA,取纯度合格的RNA适量,反转录成cDNA。根据Genbank发布的基因序列,应用Primer5软件设计靶基因和β-actin的引物。然后采用SYBR Green试剂盒检测不同时间点基因表达情况,用2-△△CT相对定量法进行评价。5免疫印迹法检测EphB4/ephrinB2的表达和磷酸化表达提取全细胞蛋白,用BCA法检测蛋白含量确定上样量。电泳对提取样品进行SDS-PAGE分离,湿转法将蛋白印迹到0.45um孔径的PVDF膜上。非磷酸化抗体用5%脱脂奶粉封闭,磷酸化抗体用5%牛血清白蛋白(BSA)封闭,之后放入稀释后的一抗中4℃孵育过夜,次日室温孵育二抗,并用化学发光试剂检测条带,比较表达差异。6EphB4/ephrinB2反向信号在血府逐瘀含药血清促血管适度生长中的作用在空白血清组加入EphB4/fc作为反向信号激活剂组,在含药血清中加入PP2作为反向信号抑制剂组。各组选择不同的作用时间点和作用浓度,并应用体外成血管技术分别比较激活剂组、抑制剂组与含药血清组成血管能力的差异,对反向信号在血府逐瘀汤促血管适度生长的作用进行细胞效应评价。结果1、血清含量的差异影响细胞活性,以48小时体外成血管为例,1.25%和2.5%空白血清的血管生成能力明显弱于5%空白血

关键词：血府逐瘀汤促血管新生 EphB4 EphrinB2 反向信号

超声介导微泡靶向传输基因促血管新生的实验研究

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中华超声影像学杂志 2005年第5期14卷 381-384页

作者：周忠江侯玉清赖文岩李利吴平生刘伊丽南方医科大学南方医院心内科广州510515 南方医科大学南方医院惠侨科广州510515

目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,... 详细信息

目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,在超声场利用超声辐射向大鼠梗死心肌靶向传输VEGF165;2周后取材,逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)评价大鼠心肌中人源VEGF165mRNA表达,蛋白印迹杂交(WesternBlot)观察大鼠心肌VEGF165的蛋白表达,CD34免疫组化微血管密度(MVD)计数半定量法评价超声介导微泡靶向传输VEGF165促梗死心肌血管新生效果。结果①成功构建、克隆血管内皮生长基因VEGF165重组真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165,测序分析、酶切鉴定准确无误;②研制的脂质体微泡超微结构显示可粘附或包载DNA,粒度分析显示平均粒径促血管新生作用(MVD表示)仅次于VEGF165基因心肌注射组。结论超声介导微泡可向大鼠心肌靶向传输VEGF165基因并产生促血管新生效应。

关键词：促血管新生超声介导靶向传输基因微泡 VEGF165基因实验研究逆转录-聚合酶链式反应微血管密度(MVD) 人血管内皮生长因子心肌血管新生 pcDNA3 真核表达质粒分子生物学方法 “分子搭桥” 大鼠心肌 mRNA表达蛋白印迹杂交

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促血管新生治疗肢体慢性缺血性疾病

医学研究通讯 2000年第10期29卷 29-30页

作者：杨文涛金星张大伟山东中医药大学山东中医药大学附属医院 250011

肢体慢性缺血性疾病(或称为肢体慢性动脉闭塞性疾病,chrionic arterial occlusion,CAO)包括动脉硬化性闭塞症、血栓闭塞性脉管炎、多发性大动脉炎等多种疾病。肢体因动脉的狭窄、闭塞、而失去血液供应,出现发凉、麻木、间歇性跛行、甚... 详细信息

肢体慢性缺血性疾病(或称为肢体慢性动脉闭塞性疾病,chrionic arterial occlusion,CAO)包括动脉硬化性闭塞症、血栓闭塞性脉管炎、多发性大动脉炎等多种疾病。肢体因动脉的狭窄、闭塞、而失去血液供应,出现发凉、麻木、间歇性跛行、甚至肢端坏死等症状,患者往往不得不面对截肢的痛苦。本类疾病具有较高的致亡、致残率,倍受学者们的重视。

关键词：肢体慢性缺血性疾病促血管新生基因治疗 VEGF

血府逐瘀汤与VEGF体外促血管新生作用的比较研究

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血府逐瘀汤与VEGF体外促血管新生作用的比较研究

作者：陈斌玲福建中医药大学

学位级别：硕士

目的通过比较血府逐瘀汤和VEGF对人微血管内皮细胞(HMEC-1)参与血管新生的功能影响,从细胞行为方面探讨血府逐瘀汤对血管新生的调控作用,为下一步进行血府逐瘀汤异于VEGF促血管新生的机制研究奠定前期工作基础,进而为避免VEGF等西药促... 详细信息

目的通过比较血府逐瘀汤和VEGF对人微血管内皮细胞(HMEC-1)参与血管新生的功能影响,从细胞行为方面探讨血府逐瘀汤对血管新生的调控作用,为下一步进行血府逐瘀汤异于VEGF促血管新生的机制研究奠定前期工作基础,进而为避免VEGF等西药促血管新生治疗中的副作用以及血府逐瘀汤的临床应用提供现代的科学理论依据。方法将男性健康自愿者随机分成药物组和空白组,空白组不做任何处理,药物组每天服用5倍剂量血府逐瘀胶囊,连续服用7天后,进行空白血清和含药血清的采集和分离。将常规培养的人微血管内皮细胞(HMEC-1)随机分为11组：VEGF药物含量分别为1.25ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的VEGF干预组和0ng/ml的空白组,血清含量分别为1.25%、2.5%、5%的空白血清对照组和中药血清干预组。每组药物均溶于含5%FBS的MCDB-131培养基中,分别培养24h、48h和72h。利用MTT比色法和流式细胞周期测定法、Boyden迁移小室、黏附能力测定实验和体外成血管实验分别观察各组药物对内皮细胞的活性、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外成血管能力的影响。结果 1、血清含量的不同可影响细胞的活性以及增殖、迁移、黏附和体外成血管能力,实验设计上采用4个浓度的VEGF与空白组相比,同等血清量的含药血清组和空白血清组比较更为客观。 2、对细胞活性的影响方面,VEGF各浓度均有显著促进作用,且处理细胞24h即可起效,不仅发挥作用时间较血府逐瘀汤早,而且无高浓度血府逐瘀汤先抑制后促进的现象。 3、对细胞迁移的影响方面,VEGF和血府逐瘀汤均可显著促进细胞迁移,但VEGF诱导48h才表现出较强的促进作用,起效较血府逐瘀汤晚,且具有时间依赖性。 4、对细胞黏附的影响方面,所有浓度VEGF和血府逐瘀汤作用三个时间点均表现促进细胞黏附作用。 5、对细胞增殖的影响方面,所有浓度VEGF诱导三个时间点均有促进作用,且具有时间依赖性,而较高浓度的血府逐瘀汤含药血清却在诱导72h时表现出抑制作用。 6、对促血管形成方面,所有浓度VEGF诱导三个时间点均有促进作用,而血府逐瘀汤仅较低浓度作用较短时间有促进作用,VEGF表现较血府逐瘀汤持久。结论 1、VEGF和血府逐瘀汤均有显著的促血管新生作用,作用机制与其促细胞增殖、迁移和黏附等环节相关。 2、两种药物除了在影响细胞黏附方面的作用趋势完全一致以外,在细胞活性、增殖、迁移和成血管方面的作用均有差异,各浓度VEGF皆表现出促进作用,且促血管生成的作用更持久;而某些条件下血府逐瘀汤却表现出抑制作用,其促血管形成的作用较短暂。提示血府逐瘀汤对血管新生可能存在一定的调控作用,有别于VEGF一味地促血管新生的表现。

关键词：血府逐瘀汤促血管新生 VEGF HMEC-1

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促血管新生治疗的现状与展望

中国医学前沿杂志（电子版） 2010年第3期2卷 9-11页

作者：吴平生刘城陶宇南方医科大学南方医院心内科广州510515

目前,冠状动脉疾病(coronary artery disease, CAD)和外周动脉疾病(peripheral arterial disease, PAD)的治疗在药物、经皮介入及外科手术方面均取得了重大进展,但仍然有一部分患者需要探索新的治疗手段或者治疗策略。

关键词：促血管新生缺血性安慰剂临床试验空白剂冠状动脉疾病

人重组促红细胞生成素在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的促血管新生作用及机制

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临床和实验医学杂志 2019年第16期18卷 1710-1713页

作者：王建民薛梅杨青泰州市人民医院儿科江苏泰州225300 芜湖市中医院儿科安徽芜湖241000

目的探究人重组促红细胞生成素(rh-EPO)在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的促血管新生作用及机制。方法选取繁育的3日龄早产大鼠126只,随机分为rh-EPO组、缺血缺氧组以及对照组。对照组:不建立脑损伤模型,假手术后腹腔注射0.12 m... 详细信息

目的探究人重组促红细胞生成素(rh-EPO)在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的促血管新生作用及机制。方法选取繁育的3日龄早产大鼠126只,随机分为rh-EPO组、缺血缺氧组以及对照组。对照组:不建立脑损伤模型,假手术后腹腔注射0.12 ml/g生理盐水;缺血缺氧组:建立脑损伤模型,术后腹腔注射0.12 ml/g生理盐水;rh-EPO组:建立脑损伤模型,术后予5 U/g rh-EPO腹腔注射。三组术后第2天、第4天,应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学以及Western blot法测定微血管密度(MVD)、EphB4、CD34蛋白以及epbrinB2表达情况。结果术后2 d:未见微血管的形成;rh-EPO组的EphB4、CD34蛋白以及epbrinB2含量均较缺血缺氧组和对照组高,差异具有统计学意义(P促进早产大鼠血管新生的作用。

关键词：早产鼠脑室周围白质损伤人重组促红细胞生成素促血管新生

经络综合治疗硬化症促血管新生机制的探讨——附58例临床分析

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中国中医基础医学杂志 2003年第3期9卷 45-47页

作者：冯春燕北京急救中心急救科北京100031

目的 :探讨经络综合治疗在硬化症治疗中的促血管新生机制。方法 :天麻素注射液、复方丹参注射液、VitB12 注射液穴位注射治疗硬化症 5 8例。结果 :患者病情得到良好控制与改善 ,生活质量提高。结论 :经络综合治疗在硬化症治疗中疗效确... 详细信息

目的 :探讨经络综合治疗在硬化症治疗中的促血管新生机制。方法 :天麻素注射液、复方丹参注射液、VitB12 注射液穴位注射治疗硬化症 5 8例。结果 :患者病情得到良好控制与改善 ,生活质量提高。结论 :经络综合治疗在硬化症治疗中疗效确切 ,作用机制与促血管新生相关。

关键词：硬化症经络综合治疗促血管新生