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依普拉芬对大鼠成骨细胞增殖分化及一氧化氮合成的影响

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中国老年学杂志 2007年第5期27卷 426-428页

作者：葛保健刘江涛王永清夏仁云徐州医学院附属医院骨科江苏徐州221002 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科

目的研究依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化以及一氧化氮（nitric oxide,NO）合成的影响。方法体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶（ALP）活性及钙化结节以及培... 详细信息

目的研究依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化以及一氧化氮（nitric oxide,NO）合成的影响。方法体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶（ALP）活性及钙化结节以及培养基中NO浓度。结果与阴性对照组相比,依普拉芬可增加成骨细胞数量（P〈0.01）,提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成,增加培养液中NO浓度（P〈0.01）。其中,依普拉芬浓度在10-8-10-5mol/L之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以促进体外培养成骨细胞的增殖、分化的作用,这种作用可能是通过增加细胞内NO合成进行调控的。

关键词：依普拉芬成骨细胞增殖分化骨质疏松一氧化氮

依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第1期36卷 71-74页

作者：葛保健王永清刘江涛夏仁云华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的研究依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的细胞作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞，取第2代细胞，培养液中分别加入不同浓度的依普拉芬，72h... 详细信息

目的研究依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的细胞作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞，取第2代细胞，培养液中分别加入不同浓度的依普拉芬，72h后，测定各组细胞培养液中的NO浓度，RT—PCR方法检测各组细胞中eNOSmRNA的表达。结果与阴性对照组相比，各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞培养液中的NO浓度并促进eNOSmRNA的表达（均P〈0．01）。其中10^-8～10^-5mol／L浓度之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以增加成骨细胞NO合成，但进eNOSmRNA的表达，从而发挥其促进成骨作用。

关键词：依普拉芬成骨细胞骨质疏松一氧化氮一氧化氮合酶

高效液相色谱法测定血清中依普拉芬浓度及在人体的药代动力学研究

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药学学报 1997年第6期32卷 470-472页

作者：马晓红许逸刘天培南京医科大学基础医学院药理教研室

高效液相色谱法测定血清中依普拉芬浓度及在人体的药代动力学研究马晓红许逸刘天培（南京医科大学基础医学院药理教研室，南京２１００２９）依普拉芬（ｉｐｒｉｆｌａｖｏｎｅ，７异丙氧基异黄酮）为一合成的异黄酮衍生物，是新型治... 详细信息

高效液相色谱法测定血清中依普拉芬浓度及在人体的药代动力学研究马晓红许逸刘天培（南京医科大学基础医学院药理教研室，南京２１００２９）依普拉芬（ｉｐｒｉｆｌａｖｏｎｅ，７异丙氧基异黄酮）为一合成的异黄酮衍生物，是新型治疗骨质疏松药物。它主要通过抑制骨吸...

关键词：依普拉芬血药浓度药代动力学高效液相色谱

依普拉芬及1,25-二羟维生素D3对鸡胚胫骨成骨细胞增殖及钙通道TRPV6表达的影响

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依普拉芬及1,25-二羟维生素D3对鸡胚胫骨成骨细胞增殖及钙通道TRP...

作者：李成南京农业大学

学位级别：硕士

新型上皮性钙通道成员的TRPV5/TRPV6表现为对钙离子具有高度选择性,对钙离子代谢及骨代谢有着非常重要的作用。近来研究表明,雌激素、1,25二羟维生素D3、PTH.饮食钙和药物都可调节TRPV5/TRPV6的表达。研究显示,TRPV5主要存在于’肾,TRPV... 详细信息

新型上皮性钙通道成员的TRPV5/TRPV6表现为对钙离子具有高度选择性,对钙离子代谢及骨代谢有着非常重要的作用。近来研究表明,雌激素、1,25二羟维生素D3、PTH.饮食钙和药物都可调节TRPV5/TRPV6的表达。研究显示,TRPV5主要存在于’肾,TRPV6主要存在于小肠,两者在骨组织主要存在于成骨细胞。目前,国外研究已证明在肾TRPV5、在小肠TRPV6通道通过钙的重吸收作用调节正常细胞内、外的钙水平;已发现大鼠BMSCs来源的成骨细胞诱导分化过程中TRPV5和TRPV6钙离子通道的表达,与颅骨来源的成骨细胞内TRPV5和TRPV6的表达情况一样。但是,针对鸡胚胫骨成骨细胞内TRPV6的表达情况以及与骨质疏松的关系的研究尚未见文献报道。鸡胚胫骨来源的成骨细胞为研究成骨细胞在骨形成中的作用提供了最佳的体外试验模型。采用酶消化和组织块移行生长相结合的方法获取成骨细胞。应用倒置相差显微镜观察、噻唑蓝(MTT)比色法、碱性磷酸酶染色(ALP)、钙化结节染色、姬姆萨染色从形态学、生物学上对细胞进行鉴定。鉴定结果显示,鸡胚胫骨成骨细胞具有典型成骨细胞的形态特征、ALP活性等功能,符合细胞的生长特性,并可在体外发生钙化。本试验取鸡胚胫骨来源的成骨细胞,进行植物雌激素依普拉芬或1,25二羟维生素D3的干预,应用MTT法、RT-PCR以及流式细胞仪技术检测成骨细胞的增殖活性、成骨相关性细胞因子的表达和TRPV6的表达以及细胞内钙离子浓度。结果表明,依普拉芬和1,25二羟维生素D3均可促进鸡胚胫骨成骨细胞的增殖,并且增殖作用明显(P依普拉芬和1,25二羟维生素D3均可显著地促进细胞内碱性磷酸酶的分泌(P依普拉芬在10-8mol·L-1时极显著地促进TRPV6mRNA的表达(P依普拉芬对PMCAlb mRNA的表达水平出现抑制作用,在10-6mol·L-1时出现极显著地抑制(P依普拉芬在10-8mo1·L-1时极显著地影响细胞内钙离子浓度(P依普拉芬或1,25二羟维生素D3对鸡胚胫骨成骨细胞的增殖、ALP活性具有一定的影响,与TRPV6mRNA、PMCA1b mRNA、 ALP mRNA的表达水平具有相关性,并且对细胞内钙离子浓度也具有影响作用。

关键词：胫骨成骨细胞依普拉芬 1,25二羟维生素D3 TRPV6 PMCA1b ALP Ca2+

依普拉芬对体外鸡胚小肠上皮细胞新型钙离子通道表达的影响

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依普拉芬对体外鸡胚小肠上皮细胞新型钙离子通道表达的影响

作者：王磊南京农业大学

学位级别：硕士

试验I、鸡胚小肠上皮细胞培养与鉴定目的：培养鸡胚小肠上皮细胞。方法：从18日龄鸡胚中取一段十二指肠段,用组织块培养法和以50μg·mL-1嗜热菌蛋白酶与0.2μg·mL-1胶原酶I型联合消化获取的肠隐窝,在37.5℃、5% CO2的条件下,用含5%胎... 详细信息

试验I、鸡胚小肠上皮细胞培养与鉴定目的：培养鸡胚小肠上皮细胞。方法：从18日龄鸡胚中取一段十二指肠段,用组织块培养法和以50μg·mL-1嗜热菌蛋白酶与0.2μg·mL-1胶原酶I型联合消化获取的肠隐窝,在37.5℃、5% CO2的条件下,用含5%胎牛血清的完全培养基培养小肠上皮细胞。用差速消化法和差速贴壁法,进一步纯化、传代。采用形态学观察、Giemsa染色和免疫化学染色法进行小肠上皮细胞鉴定。结果：组织块培养法和酶联合消化培养法都可以得到鸡胚小肠上皮细胞,纯化后纯度理想。结论：鸡胚小肠上皮细胞培养成功,培养的细胞纯度理想,为下一步研究提供了实验材料。试验Ⅱ、依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞生长的影响目的：在建立鸡胚小肠上皮细胞体外培养方法的基础上,研究依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞增殖、分化和代谢功能的影响。方法：取生长状态良好的第二代小肠上皮细胞接种于96孔板,添加含1%FBS的DMEM对照组和含不同浓度的依普拉芬实验组,72 h后分别用MTT法、PNPP法测定小肠上皮细胞增殖率和小肠上皮细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性。结果：(1)与对照组相比,10-6 mol·L-1,10-7 mol·L-1和10-8 mol·L-的依普拉芬均显著促进小肠上皮细胞增殖(P依普拉芬显著抑制小肠上皮细胞的增殖(P依普拉芬极显著促进小肠上皮细胞ALP活性(P依普拉芬显著抑制小肠上皮细胞内ALP活性(P依普拉芬能显著促进小肠上皮细胞的增殖;使小肠上皮细胞内的ALP显著增加;但依普拉芬浓度越大,其上皮细胞则呈现明显的抑制作用。试验Ⅲ、依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞钙离子通道基因表达的影响目的：在建立鸡胚小肠上皮细胞体外培养方法的基础上,研究TRPV6在小肠上皮细胞上表达的定位以及依普拉芬对TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达的影响。方法：免疫细胞化学方法研究TRPV6表达定位;用含10-6mol·L-1、10-7mol·L-1、10-8mol·L-1、10-9mol·L-1和10-10mol·L-1不同浓度的依普拉芬以及含1% FBS的DMEM对照组处理第二代鸡胚小肠上皮细胞72 h后,用RT-PCR方法检测其TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达量变化。结果：(1) TRPV6表达定位于鸡胚小肠上皮细胞胞膜上;(2)与对照组相比,10-6 mol·L-1,10-7 mo·L-1、10-8 mol·L-1依普拉芬显著上调PMCA1b和CaBP-D28k mRNA的表达(P依普拉芬作用下TRPV6的表达出现明显上升(P依普拉芬能够显著上调TRPV6 mRNA表达(P依普拉芬能显著上调小肠上皮细胞TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达量。

关键词：鸡胚小肠上皮细胞依普拉芬新型钙离子通道表达

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依普拉芬对老年女性骨密度影响的临床观察

南方医科大学学报 1999年第S1期24卷 81-82页

作者：郎江南蔡德鸿郎江红第一军医大学珠江医院广州510282 江西医学院一附院南昌330006

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依普拉芬在兔下颌骨牵张成骨中作用的研究

依普拉芬在兔下颌骨牵张成骨中作用的研究

作者：柳星光辽宁医学院

学位级别：硕士

目的利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴，观察牵张成骨过程中依普拉芬的作用，并探讨其可能的作用机制。方法 40只健康日本大耳白兔，体重2.0±0.25kg，随机分成实验组和对照组，每组各20只，每组又分别分为1天组、1周组、2周组和4周... 详细信息

目的利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴，观察牵张成骨过程中依普拉芬的作用，并探讨其可能的作用机制。方法 40只健康日本大耳白兔，体重2.0±0.25kg，随机分成实验组和对照组，每组各20只，每组又分别分为1天组、1周组、2周组和4周组，每组5只。适应性饲养一周后，建立牵张成骨模型，术后经过4天的间歇期，（即第5天）开始垂直增高兔下颌牙槽嵴，2次/天，0.5mm/次，牵张四天共4mm。实验组在建立牵张成骨模型后即给予基础饲料+依普拉芬，对照组只给予基础饲料。术后于不同时间分别行大体观察、X线观察、组织学观察及免疫学观察并进行平均灰度值的测定，测量血清钙（Ga）及碱性磷酸酶（ALP）含量，应用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析。结果 X线及组织学显示牵张固定后4周牵张间隙基本被新形成的骨组织所充填。实验组术后不同时间段的骨代谢、生成和血清钙及ALP含量均高于对照组，且两组间数值差异有统计学意义（P依普拉芬可以产生达到良好的骨再生，加速牵张过程中新骨的生成，缩短骨愈合时间的作用。

关键词：依普拉芬牵张成骨骨愈合

依普拉芬在笼养蛋鸡体内的药物动力学及残留分析

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依普拉芬在笼养蛋鸡体内的药物动力学及残留分析

作者：胡丹南京农业大学

学位级别：硕士

依普拉芬(Ipriflavone，IP，7-异丙氧基异黄酮)，人工合成的异黄酮衍生物，属于植物雌激素，具有雌激素样作用，是一种能有效预防和治疗骨质疏松症的新型药物。依普拉芬在人和动物体内能产生多种代谢产物：MⅠ-MⅦ，动物体内主要的代谢... 详细信息

依普拉芬(Ipriflavone，IP，7-异丙氧基异黄酮)，人工合成的异黄酮衍生物，属于植物雌激素，具有雌激素样作用，是一种能有效预防和治疗骨质疏松症的新型药物。依普拉芬在人和动物体内能产生多种代谢产物：MⅠ-MⅦ，动物体内主要的代谢产物是7-羟基异黄酮(MⅠ)。本文建立了依普拉芬(IP)及其主要代谢产物7-羟基异黄酮(MⅠ)在鸡体内的检测方法，改良的反相高压液相色谱法观察了依普拉芬在蛋鸡体内的吸收、分布、代谢、消除情况，系统的研究其在蛋鸡体内的药代动力学规律，得出相关的药代动力学主要参数;确定IP在蛋鸡体内的标志残留物和残留靶组织;对IP在蛋鸡组织及鸡蛋中的残留进行了初步的分析，为制定休药期，提供残留监控技术提供理论依据。实验研究分为两大部分：试验Ⅰ 依普拉芬在笼养蛋鸡体内的药物动力学研究 12羽58周龄ISA笼养蛋鸡，每只鸡灌服3mg的IP，给药后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、9.0、12.0、24.0、48.0h于鸡的翅静脉采血，用高压液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)检测各个时段血液中IP的含量，研究IP在笼养蛋鸡体内的药代动力学规律，阐明IP在蛋鸡体内的主要代谢途径，大致的分布情况，吸收和排泄程度及速度：确定IP在蛋鸡体内的标志残留物和残留靶组织。结果表明：口服灌药，血浆的药时数据符合口服吸收二室模型，其主要药代动力学参数：半衰期(T)3.10h，达峰时间(Tmax)2.82h，达峰浓度(Cmax)11.91ng/mL，t(ka)1.10h，速率常数k0.04，k0.19，药时曲线下面级(AUC)8594.58 ng/mL。试验Ⅱ 依普拉芬在蛋鸡组织及鸡蛋中的残留分析 60羽58周龄ISA笼养蛋鸡，随机分成三组，A组40只，为组织残留检测组;B组10只，为蛋残留检测组;C组10只，为对照组。基础日粮预饲一周后，在A组、B组的基础日粮中添加25ppm依普拉芬，C组继续饲喂基础日粮，实验为期12周。研究依普拉芬在蛋鸡组织及鸡蛋中的残留分析，确定IP在蛋鸡体内的休药期。结果表明：停药后，组织内药物残留的含量逐渐降低，代谢速度顺序为肾＞肝＞肌肉。用

关键词：蛋鸡依普拉芬药物动力学残留高压液相色谱法

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高效液相色谱法测定人体中依普拉芬血药浓度

中国医院药学杂志 1997年第5期17卷 213-214页

作者：曾珍王自正马晓红刘天培南京市第一医院南京医科大学临床药理研究所

以反相高效液相色谱法测定血清中依普拉芬的浓度，血清样品用乙腈直接提取。色谱条件为：分析柱使用ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１８柱（１０μｍ），４．６×１５０ｍｍ；流动相甲醇∶水＝７１∶２９（Ｖ／Ｖ）；检测波长为ＵＶ２４５ｎｍ... 详细信息

以反相高效液相色谱法测定血清中依普拉芬的浓度，血清样品用乙腈直接提取。色谱条件为：分析柱使用ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１８柱（１０μｍ），４．６×１５０ｍｍ；流动相甲醇∶水＝７１∶２９（Ｖ／Ｖ）；检测波长为ＵＶ２４５ｎｍ；本法的最低检测限为３ｎｇ／ｍｌ，线性范围８～４００ｎｇ／ｍｌ，回收率为８４．７％。并对８名受试者口服４００ｍｇ依普拉芬后的药物动力学与生物利用度进行了研究，结果表明：依普拉芬为口服吸收二室模型，主要药动学参数为Ｔ１／２９．０～１２．０ｈ，Ｔｍａｘ２．４～２．５ｈ，Ｃｍａｘ分别为６６．５～６６．８ｎｇ／ｍｌ。国产依普拉芬相对于进口依普拉芬的生物利用度为１００．２％。

关键词：依普拉芬高效液相色谱药物动力学血药浓度