检索结果-南通市图书馆

生物学通报 2001年第7期36卷 7-8页

作者：王艳萍辽宁教育学院生物劳技研训部沈阳110032

扼要介绍了继世界首例体细胞克隆羊诞生后 ,哺乳动物体细胞核移植技术在最近 3年内取得的研究进展。

关键词：克隆哺乳动物体细胞核移植

不同融合液对延边黄牛体细胞核移植效率的影响

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安徽农业科学 2008年第4期36卷 1454-1456页

作者：李晓霞刁云飞李钟淑方南洙金长松延边大学农学院吉林龙井133400 吉林省龙井市智新镇畜牧兽医站吉林龙井133400

[目的]探寻适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液。[方法]用延边黄牛颗粒细胞为供体细胞。试验1,比较3种浓度(0.25、0.280、.30 mol/L)3种融合液(蔗糖、D-山梨醇、甘露醇)对核移植胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。试验2,比较3种0.28... 详细信息

[目的]探寻适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液。[方法]用延边黄牛颗粒细胞为供体细胞。试验1,比较3种浓度(0.25、0.280、.30 mol/L)3种融合液(蔗糖、D-山梨醇、甘露醇)对核移植胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。试验2,比较3种0.28 mol/L融合液对核移植效率的影响。[结果]3种浓度的蔗糖、D-山梨醇、甘露醇融合液的融合率和卵裂率差异均不显著,但0.28 mol/L融合液处理的重组胚后期发育相对较好。3组融合液融合率(88.44%、86.83%、86.85%)差异不显著,蔗糖、甘露醇融合液卵裂率(87.98%、86.06%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(78.64%);蔗糖、甘露醇融合液囊胚发育率(22.16%、19.91%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(10.14%)。[结论]适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液为0.28 mol/L蔗糖融合液。

关键词：延边黄牛体细胞核移植融合液重组胚体外发育

牦牛体细胞核移植电融合参数和重构胚胎培养方法的优化

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黑龙江畜牧兽医 2018年第7期 191-194,254页

作者：王森孙永刚李瑞哲马志杰陈生梅徐惊涛青海大学畜牧兽医科学院

为了探索牦牛体细胞核移植胚胎培养方法和体系,试验采用不同的脉冲电压和脉冲时间对牦牛重构胚胎进行融合,采用不同的培养方法对牦牛核移植重构胚胎进行培养,从而优化牦牛体细胞核移植胚胎的培养体系。结果表明：牦牛核移植重构胚胎采用... 详细信息

为了探索牦牛体细胞核移植胚胎培养方法和体系,试验采用不同的脉冲电压和脉冲时间对牦牛重构胚胎进行融合,采用不同的培养方法对牦牛核移植重构胚胎进行培养,从而优化牦牛体细胞核移植胚胎的培养体系。结果表明：牦牛核移植重构胚胎采用16 V、20μs、2次脉冲融合率最高,为（80.8±3.8）%。采用mSOF培养液、G1/G2培养液、输卵管上皮细胞共培养三种培养体系对牦牛体细胞克隆胚胎的卵裂率影响差异不显著（P〉0.05）,但是G1/G2培养液的囊胚率为（20.0±2.4）%,与输卵管上皮细胞共培养的囊胚率[（19.4±2.3）%]相比差异不显著（P〉0.05）,显著高于mSOF培养液的囊胚率[（13.7±3.8）%]（P〈0.05）。

关键词：牦牛体细胞核移植电融合胚胎培养优化

细胞松弛素B对延边黄牛体细胞核移植效率的影响

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河南农业科学 2009年第4期38卷 123-126页

作者：宋君博林涛胡艳明李钟淑方南洙延边大学农学院吉林龙井133400

探讨融合液、激活液中添加细胞松弛素B(CCB)对延边黄牛体细胞核移植效率的影响,以摸索适合延边黄牛体细胞核移植的电融合、激活条件。结果表明,融合液中添加7.5μg/mL CCB组的桑葚胚及囊胚发育率显著高于其他3组;激活液中添加5.0μg/mL... 详细信息

探讨融合液、激活液中添加细胞松弛素B(CCB)对延边黄牛体细胞核移植效率的影响,以摸索适合延边黄牛体细胞核移植的电融合、激活条件。结果表明,融合液中添加7.5μg/mL CCB组的桑葚胚及囊胚发育率显著高于其他3组;激活液中添加5.0μg/mL的CCB组的卵裂率、桑葚胚及囊胚发育率显著高于其他3组;融合液、激活液中同时添加CCB的囊胚发育率高于单独添加组,但是差异不显著。

关键词：细胞松弛素B 体细胞核移植融合液激活液延边黄牛

荧光辅助去核在延边黄牛体细胞核移植中的应用

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荧光辅助去核在延边黄牛体细胞核移植中的应用

作者：于莹延边大学

学位级别：硕士

本研究采用延边黄牛耳皮肤成纤维细胞作为供核细胞,探讨使用荧光(UV)辅助去核法对延边黄牛体细胞克隆效率的影响。探寻一种寻求一种操作简单、相对无损伤、去核效率高的去核方法,从而为体细胞核移植效率的提高打下基础,为产业化生产提... 详细信息

本研究采用延边黄牛耳皮肤成纤维细胞作为供核细胞,探讨使用荧光(UV)辅助去核法对延边黄牛体细胞克隆效率的影响。探寻一种寻求一种操作简单、相对无损伤、去核效率高的去核方法,从而为体细胞核移植效率的提高打下基础,为产业化生产提供理论依据。试验结果:1、比较5μg/mLHoechst333420 min、10 min、20 min、30 min,40 min对延边黄牛卵母细胞的染色效率。结果显示在染色效率上20 min、30 min、40 min的染色效率明显高于0 min和10 min。2、荧光辅助去核法与挤压去核法对卵母细胞去核率进行比较。在去核准确率上,荧光辅助去核法达到了100%的去核率,挤压去核法显著低于荧光辅助去核法。3、比较在10s、15s、20s、25s、30s的UV操作时间里卵裂率和囊胚发育率情况。结果显示:在卵裂率上UV照射时间10s组、15s组、20s组、25s组无差别,要优于UV照射时间为30s组。在囊胚发育率上10s组、15s组、20s组最高,25s组次之,30s组的囊胚发育率最低。4、本试验比较荧光辅助去核法与挤压去核法对重组胚发育率的影响。同时以孤雌发育组为对照组,结果表明,5组卵裂率差异均不显著,但囊胚发育率上,对照组(孤雌发育组)最高,20 min染色去核组、30 min染色去核组和40 min染色去核组无明显差异,但明显高于挤压法去核组。5、本实验是卵母细胞经过5μg/mLHoechst33342 20 min的染色后,在UV照射小于20s下操作比较带下注核法和胞浆内注核法对卵母细胞卵裂率和囊胚发育率的影响。结果显示:带下注射法要优于胞浆内注核法。

关键词：延边黄牛体细胞核移植荧光染色去核

PEG11基因在自然繁殖牛和体细胞核移植牛中印记及DNA甲基化分析

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PEG11基因在自然繁殖牛和体细胞核移植牛中印记及DNA甲基化分析

作者：石运娇河北农业大学

学位级别：硕士

体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer，SCNT)，又称体细胞克隆技术，在医疗、农业及畜牧业等诸多领域有重要的应用价值。尽管体细胞核移植已经在多种哺乳动物中获得成功，但克隆效率仍然很低，只有2-5%的成活率，即使是存... 详细信息

体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer，SCNT)，又称体细胞克隆技术，在医疗、农业及畜牧业等诸多领域有重要的应用价值。尽管体细胞核移植已经在多种哺乳动物中获得成功，但克隆效率仍然很低，只有2-5%的成活率，即使是存活下来的克隆动物也多伴有器官发育异常，这些制约了体细胞核移植技术的广泛应用。在体细胞核移植过程中，体细胞核放弃已有的高度分化的体细胞模式，进行重编程形成全能性的胚胎模式，此过程称为表观重编程。目前认为，供体核的不完全重编程导致在发育过程中有重要作用的基因异常表达或没有表达是克隆效率低下的主要原因。基因组印记是由表观修饰导致的基因表达具有亲本特异性，而DNA甲基化是调控基因组印记的一种主要表观修饰方式。我们选择在胚胎和胚盘发育中有重要作用的DLK1-DIO3印记域的PEG11印记基因进行研究。通过PCR-SSCP方法在PEG11基因894nt位置找到一个SNP位点(A/G)，用于等位基因特异基因表达和DNA甲基化状态分析。结果发现，在自然繁殖牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪7个组织中均表达，并且表现为单等位基因(G)。为了确定基因内DNA甲基化是否调控基因的印记表达，应用亚硫酸盐方法分析了在该基因内部的54个CG位点的等位基因特异的甲基化状态。结果显示，两条亲本链(A-链和G-链)均表现为高度甲基化(>96%)，并且链间甲基化水平无显著差异(P>0.05)，说明所分析位置的甲基化没有参与调控PEG11基因。分析PEG11基因体细胞核移植牛组织中的表达发现，PEG11基因在心、肝、脾、肾、肌肉和脂肪6个组织中都是单等位基因表达(G)，但是肺脏中发生印记紊乱。我们对表现为双等位基因表达(A/G)的肺脏进行等位基因特异的甲基化状态分析，在体细胞核移植牛中也呈现高甲基化状态，与自然繁殖牛无显著差异(P>0.05)，且两条链间无显著差异(P>0.05)，结果进一步证明PEG11基因内部的DNA甲基化没有调控印记基因的表达。尽管DNA甲基化对印记表达没有调控作用，但是PEG11基因双等位基因紊乱表达也可能是造成体细胞核移植牛肺脏发育异常的原因之一。

关键词：体细胞核移植牛 PEG11 等位基因特异DNA甲基化印记状态

Gtl2基因在体细胞核移植牛中的印记状态研究

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Gtl2基因在体细胞核移植牛中的印记状态研究

作者：王建春河北农业大学

学位级别：硕士

体细胞核移植技术(SCNT)在医学研究、畜牧业生产和拯救濒危动物方面有重要的应用价值,而核移植效率低是制约其应用的主要因素。目前认为:供体核的不完全重编程导致在发育过程中有重要作用的基因没有表达或异常表达是体细胞核移植效率低... 详细信息

体细胞核移植技术(SCNT)在医学研究、畜牧业生产和拯救濒危动物方面有重要的应用价值,而核移植效率低是制约其应用的主要因素。目前认为:供体核的不完全重编程导致在发育过程中有重要作用的基因没有表达或异常表达是体细胞核移植效率低的主要原因。大多数印记基因在调控胚胎生长和出生后的发育中起重要作用,体细胞核移植动物表现出的发育异常很可能与印记基因表达紊乱有关,但是在体细胞核移植牛中,由于缺少牛印记基因序列以及多态性信息,对印记基因表达的研究较少。Gtl2基因是在人和鼠中已被鉴定的印记基因,它作为一种RNA调解分子调控目的mRNA的转录,在胚胎发育过程中起着重要作用。为了探讨造成体细胞核移植动物新生死亡以及器官发育异常的可能分子机理,我们分析了Gtl2基因在自然繁殖牛和新生死亡的体细胞核移植牛心、肝、脾、肺、肾、大脑6个组织中的表达情况。印记基因表达状态的分析是基于印记基因为单等位基因表达,所以必须首先在亲本等位基因上找到单核苷酸多态性(SNP),即基因组中单个核苷酸突变引起的DNA序列多态性,包括单碱基的转换、颠换、插入及缺失等形式。单链构象多态性(SSCP)技术以其可重复性好、快速、简单的特点成为寻找SNP最常用的方法之一,本研究应用PCR-SSCP方法对牛Gtl2基因的多态性进行分析。首先,根据已发表的羊Gtl2基因(AY017220,AY017221,AY017222)与牛的基因序列(XM872590)进行同源性分析,设计3对扩增产物在100 bp～300 bp范围的PCR引物以获得最佳的SSCP结果。进而,应用PCR-SSCP技术分析牛Gtl2基因多态性,并通过测序鉴定自然繁殖牛和体细胞核移植牛中的杂合子。最后,利用RT-PCR-SSCP技术对Gtl2基因在杂合子牛的6个组织中的表达状态进行分析,并通过测序对表达结果进行验证。研究结果表明:Gtl2基因在自然繁殖牛被检测的6个组织中均表现为单等位基因表达,在体细胞核移植牛的心和肝中也表现为单等位基因表达,而在体细胞核移植牛的大脑、脾、肺、肾4个组织中表现出双等位基因表达。由此可以得出:Gtl2基因表达紊乱有可能是造成体细胞核移植牛器官发育异常和新生死亡的原因之一。

关键词：牛 Gtl2 基因组印记体细胞核移植

TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育及转基因eGFP表达的影响

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TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育及转基因eGFP表...

作者：黄波东北农业大学

学位级别：硕士

通过体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术路线已经成功获得多种哺乳动物转基因及非转基因克隆个体。然而,各物种的克隆效率仍不尽人意。近来有研究表明,表观遗传重编程(epigenetic reprogramming)在SCNT获得的克隆胚... 详细信息

通过体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术路线已经成功获得多种哺乳动物转基因及非转基因克隆个体。然而,各物种的克隆效率仍不尽人意。近来有研究表明,表观遗传重编程(epigenetic reprogramming)在SCNT获得的克隆胚胎的发育过程中扮演着重要角色;人们认为重编程紊乱导致了大多数克隆胚胎的不正常发育。研究证明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)如曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)等的处理能显著增强多个物种SCNT胚胎的发育能力。为改善猪克隆胚胎的发育能力,本实验尝试优化了TSA处理参数,并检测了TSA对胚胎发育及转基因eGFP表达的影响。实验取得如下结果:对猪胎儿成纤维细胞构建的克隆胚胎分别采用0、20、40、60、80、100nM的TSA在激活后处理12h,结果显示40nM处理组的囊胚率为35.65±9.58%,显著高于其它各处理组及对照组的囊胚率(13.00±3.02%)(P细胞期的胚胎数显著高于对照组(P细胞期发生的合子基因激活(zygotic gene activation, ZGA)事件。40nM TSA处理重构胚12h和24h后,两处理组重构胚的囊胚发育率分别为16.32±1.51%和14.93±4.91%,二者差异不显著(P>0.05)。结果表明40nM TSA处理12h或24h均可提高猪SCNT胚胎体外发育能力。以猪骨髓间充质干细胞(PMSCs)、成纤维细胞(PFFs)和卵丘细胞(Cumulus)为核供体的重构胚分别以40nM的TSA在激活后处理12h,结果显示不同核供体来源的重构胚在TSA处理后的囊胚发育率分别为17.39±14.64%、12.65±4.82%和2.90±5.02%,与对照组相比均有所提高,但组间差异不显著(P>0.05)。将eGFP转基因成纤维细胞为核供体的猪重构胚分别采用0、20、40、60、80、100、120和140nM的TSA在激活后处理12h,结果显示TSA处理后组间的囊胚发育率差异不显著(P>0.05)。结果表明TSA可以提高不同供核细胞构建的重构胚的体外发育能力。以人包皮成纤维细胞为核供体猪卵母细胞为核受体的人猪异种核移植(human-porcine interspecies nuclear transfer, hp-ISNT)囊胚发育率为1.07±1.27%,显著低于孤雌组的囊胚发育率(21.06±5.92%)(P细胞胚胎发育率为62.84±18.57%,显著低于孤雌组(87.13±4.42%)(P细胞期的ZGA事件不完全发生有关。40nM TSA处理hp-ISNT重构胚24h,结果显示TSA处理组与对照组间异种重构胚的体外发育率无显著差异(分别为0.74±1.47%和1.07±1.27%)(P>0.05)。结果表明TSA不能显著改善hp-ISNT胚胎的体外发育能力。5nM TSA对供体细胞进行24h处理后,由其构建的重构胚的囊胚发育率为7.84±5.31%,显著低于对照组(对胚胎及细胞均不进行TSA处理)(P体细胞以5nM TSA处理24h,重构胚以40nM TSA处理24h后,重构胚的囊胚发育率为48.96±10.17%,显著高于对照组(P核移植胚胎的体外发育能力。对eGFP转基因体细胞核移植胚胎的eGFP基因表达进行荧光检测发现,第一细胞周期内的2h和12h明显可以观测到细胞核附近存在大量的eGFP蛋白。当胚胎发育至2～4-细胞期时细胞核区的eGFP蛋白丰度较1-细胞胚胎的低。随着胚胎发育至囊胚期,细胞核区的eGFP蛋白表达量较4-细胞胚胎有所增加。应用RT-PCR检测手段,我们对比了TSA对克隆胚胎eGFP基因表达的影响。当TSA对供体细胞进行处理(G2组)后,结果显示重构胚eGFP基因的mRNA表达水平较对照组(G1组)高(P体细胞与核移植胚胎均以TSA进行处理(G3组)后,1-细胞胚胎eGFP表达量与G2组无显著差异(P>0.05),但随着胚胎不断地发育,eGFP表达量逐渐下降至对照G1组水平。结果表明TSA可以改变转基因eGFP的表达水平。

关键词： TSA 体细胞核移植体外发育猪

利用多态微卫星标记进行体细胞核移植山羊的遗传鉴定

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山东农业大学学报（自然科学版） 2010年第2期41卷 234-238页

作者：王玉兰国成张宁波尚友国殷子惠谭景和姜运良山东农业大学山东省动物生殖与育种生物技术重点实验室山东泰安271018

微卫星广泛用于体细胞核移植动物的遗传同一性鉴定。本研究选取36个微卫星位点,首先以2只无亲缘关系的鲁北白山羊个体对这些位点进行PCR扩增和多态性分析,筛选出10个高度多态的位点;然后对3只体细胞核移植山羊进行各位点的基因型分析。... 详细信息

微卫星广泛用于体细胞核移植动物的遗传同一性鉴定。本研究选取36个微卫星位点,首先以2只无亲缘关系的鲁北白山羊个体对这些位点进行PCR扩增和多态性分析,筛选出10个高度多态的位点;然后对3只体细胞核移植山羊进行各位点的基因型分析。结果表明,每只核移植山羊与其供核细胞的基因型完全相同,而与受体母羊的基因型在多数位点上均不同(克隆羊C1、C2和F与其受体母羊的基因型在10个位点中分别有9、10和10个位点不同),证明这3只体细胞核移植山羊均由体细胞克隆而来,与受体母羊无遗传关系。

关键词：体细胞核移植山羊微卫星

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对牛羊体细胞核移植影响的研究进展

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中国畜牧杂志 2020年第7期56卷 18-22页

作者：李飒房晓欢张效生张金龙孙树春李俊杰河北农业大学动物科技学院河北保定071000 天津市畜牧兽医研究所天津300381 河北省牛羊胚胎技术创新中心河北保定071000

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)是一类蛋白酶抑制剂,通过干扰组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的功能从而在染色体重塑、基因表达调控等方面发挥重要作用。近年来,关于HDACi促进供体细胞及体细胞核移植重构胚重编程的相关研究受到越来越多的关... 详细信息

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)是一类蛋白酶抑制剂,通过干扰组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的功能从而在染色体重塑、基因表达调控等方面发挥重要作用。近年来,关于HDACi促进供体细胞及体细胞核移植重构胚重编程的相关研究受到越来越多的关注。本文主要综述了HDACi对牛羊体细胞核移植的影响,旨在为提高牛羊体细胞克隆胚胎的生产效率提供参考。

关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂体细胞核移植牛羊