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具野稻细胞质的胞质型雄性不育系的体细胞克隆变异 Ⅰ.IR66707A及IR69700A体细胞克隆变异的类型

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热带亚热带植物学报 2002年第2期10卷 152-160页

作者：马镇荣凌定厚王昌虎刘卫中国科学院华南植物研究所广东广州510650

水稻雄性不育系IR66707A及IR69700A来自国际水稻所（IRRI）,它们的不育性只能被保持而不能被恢复,属于胞质型雄性不育。以这两个不育系以及它们与正常品种的杂种F1为供体,经离体培养,共获得了136个体细胞克隆。在R1代中发现了三个类型... 详细信息

水稻雄性不育系IR66707A及IR69700A来自国际水稻所（IRRI）,它们的不育性只能被保持而不能被恢复,属于胞质型雄性不育。以这两个不育系以及它们与正常品种的杂种F1为供体,经离体培养,共获得了136个体细胞克隆。在R1代中发现了三个类型的突变或变异,即:可育突变、雄性不育和雌雄性均不育的变异。第一类型的可育突变有两例,其R2的可育与不可育（出现分离）之比为3:1,证实为显性单基因突变。第二类型的雄性不育又可分为两种:第一种是不育性可被恢复的,与供体不育系完全不同,其中一部分克隆的不育性不能被保持但可因环境的改变而转换为可育,另一部分克隆的不育性不受环境因素的影响（不具转换能力）,但其不育性既可恢复又可不完全保持（即F1的育性尚有分离）。第二种是不育性不能被恢复,与供体相似。育性不具转换能力的突变可望培育成为核质互作型雄性不育系,而育性可转换的突变则可望培育成为两系杂交稻中的两用核不育系。

关键词：体细胞克隆变异胞质型雄性不育水稻

紫菜基因工程抗性压的筛选及体细胞克隆变异的初步研究

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紫菜基因工程抗性压的筛选及体细胞克隆变异的初步研究

作者：薛兆亮上海海洋大学

学位级别：硕士

紫菜是世界上经济价值最高的人工栽培海藻之一，其产量约占大型经济海藻总产量的一半，也是我国重要的人工栽培海藻之一。同时，由于紫菜藻体形态结构简单，细胞的发育和分化易于调控，因而被认为是藻类基础遗传学研究的模式生物。随着... 详细信息

紫菜是世界上经济价值最高的人工栽培海藻之一，其产量约占大型经济海藻总产量的一半，也是我国重要的人工栽培海藻之一。同时，由于紫菜藻体形态结构简单，细胞的发育和分化易于调控，因而被认为是藻类基础遗传学研究的模式生物。随着分子生物学技术的飞跃发展，紫菜基因工程的研究进入了一个新的时代。通过紫菜基因工程的研究，不仅可以突破传统育种方法的局限性，加速紫菜产业的快速发展，而且也有利于紫菜基础遗传学的进步。合适抗性压的筛选是紫菜基因工程研究的首要前提。本文首先对坛紫菜体细胞抗生素敏感进行测试，发现氯霉素具有较好的致死效果，氨苄青霉素和卡那霉素具有不同程度的抑制体细胞生长和发育的作用;随后为解决了以紫菜体细胞为研究对象时，受体细胞分化类型干扰而无法定量分析的问题，我们又系统地探讨了抗生素对条斑紫菜壳孢子细胞生长及发育的影响，试验结果表明：在选用的三种抗生素中，氨苄青霉素对条斑紫菜壳孢子的生长和发育具有一定的抑制作用，主要表现在延缓细胞分裂速度和导致色素体发育不正常。在培养第7d，80%以上的壳孢子萌发体分裂细胞个数不超过15个，在培养第11d，各浓度下壳孢子萌发体的平均长度都低于对照组，而且这种作用随着浓度提高变得愈加明显;卡那霉素对壳孢子细胞的分裂具有促进作用，在培养第7d，分裂细胞＞20的壳孢子萌发体个数比对照组多1倍，在培养第11d，壳孢子萌发体的平均长度达到350μm，是对照组的1.6倍，即使在低浓度下(100μg/mL)，卡那霉素的促进作用也十分明显;而氯霉素对壳孢子细胞具有强烈的杀伤作用，90%以上的壳孢子萌发体在分裂2个细胞时就开始死亡，＞100μg/mL浓度时，培养7d，壳孢子全部死亡。在低浓度下(50μg/mL)培养11d后也基本全部死亡，因此氯霉素有望成为紫菜基因工程理想的选择压力。相比高等植物和一些模式微藻，紫菜的基础学研究还很薄弱。为拓展坛紫菜基础遗传学的研究方法，我们构建了合适于坛紫菜的AFLP分析体系，实验结果表明：用膜吸附法提取的紫菜基因组DNA适合AFLP分析;EcoR I或者Pst I与Mse I的内切酶组最佳;酶切时间控制在2h最为适合;选用1+2选择性碱基数量获得的图谱条带分布均匀、饱满，有利于紫菜的遗传分析。我们通过体细胞克隆技术选育了一些具有优良性状的品系，且发现其性状可以通过有性繁殖得到稳定遗传。为了对藻类体细胞克隆变异进行分子水平的探讨，我们通过AFLP技术对坛紫菜薄叶型品系黑毛菜(HMC)的各代选育群体及其F1代进行了遗传结构分析，研究发现，HMC体细胞再生体的表型改变伴随着较高水平的DNA多态性，并且随着选育代数的增加，其DNA多态性水平呈下降趋势。在其F1进行验证，显示了与体细胞再生群体类似的DNA多态性水平，说明由体细胞克隆变异造成的DNA多态性可以通过有性繁殖的方式遗传到子代。另外，我们还观察到体细胞克隆变异中出现了类似高等植物中的性状逆转现象，这与其分子水平的检测结果是一致的，证明通过AFLP技术我们可以更加详细得了解坛紫菜体细胞克隆变异过程。颜色变异体在紫菜育种和基础遗传学研究中都具有重要的地位。我们在坛紫菜红色体细胞再生变异体上，分离得到一种二次红色变异体，此变异体为单个体细胞的变异，与红色变异体颜色呈现的铁锈红色相比，二次变异体藻体的红色更加鲜艳。对两者的活体吸收光谱和主要光合色素含量进行测定，结果显示：二次变异体的活体吸收光谱第1，2个吸收峰值高于红色变异体，而藻蓝蛋白的吸收峰降低;同时发现，两者的叶绿素a和藻红蛋白含量没有显著差异，而二次变异体的藻蓝蛋白含量比红色变异体低了30%，由此推测红色变异体的二次颜色变异可能与其β-胡萝卜素的变化以及藻蓝蛋白含量降低有关;随后利用构建的AFLP体系对两者作分子遗传学分析，在48对引物组合中筛选出28对有多态性扩增的引物，共扩增获得1627个条带，其中差异位点84，多态性比例为5.16%，表明两者在基因型上保持了高度的同源性，并从差异片段中筛选到一条可能与其颜色变异有关的嘌呤生物合成基因的同源片段，利用该片段获得了ZP-R和ZP-RR各自的品系特异性分子特征，这不仅证明了该体系的可靠性和稳定性，也为深入研究坛紫菜颜色变异的形成开辟了新的途径。

关键词：紫菜壳孢子抗生素体细胞克隆变异 AFLP

玉米自交系亲本及其杂交种的体细胞克隆变异研究

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玉米自交系亲本及其杂交种的体细胞克隆变异研究

作者：于晓明东北师范大学

学位级别：硕士

体细胞克隆变异是植物组织培养中经常发生的现象,被视为可用于作物遗传改良的一种重要的新变异来源。本试验选择了3个优良玉米自交系并配制了2个相互杂交组合,然后以这些材料的幼胚为外植体建立了一套玉米组织培养和再生体系,并利用AFLP... 详细信息

体细胞克隆变异是植物组织培养中经常发生的现象,被视为可用于作物遗传改良的一种重要的新变异来源。本试验选择了3个优良玉米自交系并配制了2个相互杂交组合,然后以这些材料的幼胚为外植体建立了一套玉米组织培养和再生体系,并利用AFLP和MSAP分子标记技术研究了自交系亲本及其杂交种在体细胞克隆过程中的序列变异和DNA甲基化变异的情况,旨在从分子水平上探讨玉米体细胞克隆变异的机制,进而为玉米遗传改良探讨新的途径和方法。本文研究主要得到以下结果:1.基因型对玉米幼胚愈伤组织的诱导影响很大。杂种诱导能力明显强于自交系,而杂种中正反交对愈伤组织的诱导则没有明显的影响。2.玉米自交系亲本及其杂交种在体细胞克隆过程中存在遗传变异和基于DNA甲基化水平和模式改变的表观遗传变异。杂交种的正反交之间甲基化模式的变异没有明显差异。3.在不同的杂交组合中,玉米体细胞克隆序列变异情况无明显差别。与愈伤组织比较,再生苗表现出的变异较少。4.通过MSAP分析,发现在幼胚诱导愈伤组织,愈伤组织分化成再生苗的过程中,多数材料CCGG位点内侧C完全甲基化水平和外侧C半甲基化水平及总的甲基化水平有先降低后升高后降低的趋势,但也有一些基因型的材料这个趋势不明显。甲基化变异模式以去甲基化为主(0.9%-9.2%),超甲基化变异较少(0.6%-3.6%)。5.两个杂交组合的AFLP与MSAP之间均存在极显著的相关性,表明组织培养过程中表观遗传变异和遗传变异之间可能存在某种内在的密切联系,6.对AFLP和MSAP检测到的变异的DNA片段经过测序和同源性分析,结果表明玉米体细胞克隆变异发生在已知功能基因、转座子区、EST序列和一些未知功能序列中。

关键词：玉米自交系杂交种组织培养体细胞克隆变异 DNA甲基化 AFLP MSAP

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体细胞克隆变异的利用

生物技术通报 1990年第5期6卷 10-10页

作者：李思经

采用离体选择组织培养产生的体细胞克隆变异体以改良作物和观赏植物已投入了大量的研究时间和努力.现在看来,对体细胞克隆变异体进行温室或田间选择可能与离体选择同样有效或甚至更为有效. 在1989年1月召开的国际植物生物技术网络第三... 详细信息

采用离体选择组织培养产生的体细胞克隆变异体以改良作物和观赏植物已投入了大量的研究时间和努力.现在看来,对体细胞克隆变异体进行温室或田间选择可能与离体选择同样有效或甚至更为有效. 在1989年1月召开的国际植物生物技术网络第三次会议上,科学家G.E.

关键词：克隆变异体体细胞克隆变异田间选择组织培养愈伤组织植物生物技术菊花叶酸性土壤田间试验培养物

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转基因白桦的遗传变异分析

中国生物工程杂志 2005年第1期25卷 59-64页

作者：詹亚光曾凡锁李彩华东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 石家庄市农业科学研究院石家庄050041

应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5％,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3％),且变异以非整倍体占多数。同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平... 详细信息

应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5％,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3％),且变异以非整倍体占多数。同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平的变异情况,结果显示DNA多态性指数为31.67,并与其它转基因植物的变异情况作了比较研究。最后分析、讨论了产生变异的原因:(1)组织培养过程中产生突变;(2)外源基因的整合及重排时宿主基因组的插入位点及相邻基因转录表达的干扰;(3)应用抗生素和除草剂等筛选转基因植株时促进了转基因植株的变异程度。并提出减少转基因植物体细胞克隆变异的建议。

关键词：转基因白桦遗传变异农杆菌染色体变异频率体细胞克隆变异多态性指数

通过体外诱导突变及筛选来改良果树作物特性的研究进展(英文)

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西北植物学报 2005年第10期25卷 2124-2133页

作者： R.K Tiwari 潘有福 Mala Trivedi Maneesh Mishra R.Chandra 兰州大学生命科学学院细胞研究所兰州730000 Biotechnology laboratory Central Institute of Subtropical Horticulture

突变会导致栽培作物一个或多个特殊性状的改变,以突变为基础的植物品质的改良,会使果树业的发展获得极大的促进。传统诱导突变的方法应用于果树作物,常受限于外植体来源,并且耗费大量的时间及场地。体细胞变异结合物理化学诱变法可被视... 详细信息

突变会导致栽培作物一个或多个特殊性状的改变,以突变为基础的植物品质的改良,会使果树业的发展获得极大的促进。传统诱导突变的方法应用于果树作物,常受限于外植体来源,并且耗费大量的时间及场地。体细胞变异结合物理化学诱变法可被视作改良果树作物的一种手段,并且在一些果树作物中获得了成功。这使我们有理由认为体外诱导变异是改良果树作物的品质及其抗逆性的一种很有效的潜在途径。本文讨论了大量的与果树培育有关的突变诱导、变异体筛选、大田评估方法等综合使用的实例及研究进展。

关键词：体细胞克隆变异生物与非生物胁迫转化离体选择

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培育菊花品种的新途径

安徽科技学院学报 1990年第1期16卷 22-23页

作者：丁为群仲正林

菊花Dendranthema morifolinm(Ramat)Tzvel。是我国的传统名花,原产于我国。现代我国栽培的菊花,是由东北至华北的野黄菊和华北至华南的小红菊,经过长期的天然种间杂交和人工选择培育成的。现代菊花在遗传组成上是高度的杂合体。

关键词：小红菊传统名花体细胞克隆变异黄菊杂合体遗传表现愈伤组织异株变异植株组织培养

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离体诱变及其选择

生物技术通报 1989年第7期5卷 8-9页

作者：李思经

*** 等人报道,电离辐射处理方法可以促进离体愈伤组织的生长,也可提高有利的变异。1988年8月在加拿大多伦多举行的第十六届国际遗传学会上,来自越南、中国和美国的科学家们讨论了该离体诱变的应用。在河内的农业遗传中心,*** 及其同事发... 详细信息

*** 等人报道,电离辐射处理方法可以促进离体愈伤组织的生长,也可提高有利的变异。1988年8月在加拿大多伦多举行的第十六届国际遗传学会上,来自越南、中国和美国的科学家们讨论了该离体诱变的应用。在河内的农业遗传中心,*** 及其同事发现,在低剂量下,γ辐射和化学诱变剂都能促进从培养的水稻小孢子中诱导出愈伤组织。

关键词：愈伤组织遗传学会化学诱变剂电离辐射 γ辐射花药培养小孢子体细胞克隆变异组织培养杀配子剂

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优良细胞悬浮培养物的一步生产

生物技术通报 1989年第9期5卷 15-16页

作者：李思经

英国研究人员 *** 及其同事研制了一种从愈伤组织快速生产优良植物细胞悬浮培养物的方法。生产这种悬浮培养物的传统方法需要对起始愈伤组织进行一系列液体培养基亚培养过程。这可能要花几个星期才能进行大范围体细胞克隆变异。新方法... 详细信息

英国研究人员 *** 及其同事研制了一种从愈伤组织快速生产优良植物细胞悬浮培养物的方法。生产这种悬浮培养物的传统方法需要对起始愈伤组织进行一系列液体培养基亚培养过程。这可能要花几个星期才能进行大范围体细胞克隆变异。新方法是先在 Waring 搅拌器中均质化愈伤组织,然后在 Erlenmeyer 瓶中培养。

关键词：细胞悬浮培养愈伤组织体细胞克隆变异液体培养基亚花几培养物长春花绿薄荷黎豆