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人胚肝白蛋白mRNA的体外表达

中国医学科学院学报 1982年第6期 336-340页

作者：王申五吴冠芸沈岩徐晓石中国医学科学院基础医学研究所中国医学科学院基础医学研究所北京

从3～6个月引产胎儿肝脏中提取mRNA,在变性条件下经琼脂糖电泳,它分布在10～32S之间。在无细胞体外翻译体系中能得到5～10倍于内源的同位素参入活力。经抗人白蛋白抗体免疫沉淀体外翻译产物,其参入活力约占总参入活力的3％。将体外翻译... 详细信息

从3～6个月引产胎儿肝脏中提取mRNA,在变性条件下经琼脂糖电泳,它分布在10～32S之间。在无细胞体外翻译体系中能得到5～10倍于内源的同位素参入活力。经抗人白蛋白抗体免疫沉淀体外翻译产物,其参入活力约占总参入活力的3％。将体外翻译产物的免疫沉淀物经SDS-聚丙烯酰胺电泳,得到相当于人血清白蛋白的同位素标记的电泳区带。证明人胚肝mRNA可以在体外蛋白合成体系表达出人白蛋白。

关键词：人胚麦胚 mRNA 白蛋白基因体外表达

HCV干扰素敏感决定区“基因盒”的构建,体外表达及功能探讨

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世界华人消化杂志 2002年第8期10卷 892-896页

作者：李刚江元森 Jenny L Craigen Lynda Tussey Eric DA D'Souza Tony R Carroll 姚集鲁 Berwyn E Clarke 中山大学附属第三医院传染病科广东省广州市510630 VirologyUnit GlaxowellcomeMedicinesResearchCentreHertfordshireSG28ANUK.

目的:构建对干扰素敏感和不敏感的丙型肝炎患者的干扰素敏感决定区(ISDR)基因;在体外表达含ISDR的丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白,探讨表达的NS5A蛋白是否通过ISDR与干扰素诱导的RNA蛋白激酶(PKR)结合来影响干扰素的抗HCV作用.方法:采用合... 详细信息

目的:构建对干扰素敏感和不敏感的丙型肝炎患者的干扰素敏感决定区(ISDR)基因;在体外表达含ISDR的丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白,探讨表达的NS5A蛋白是否通过ISDR与干扰素诱导的RNA蛋白激酶(PKR)结合来影响干扰素的抗HCV作用.方法:采用合成寡核苷酸,PCR,分子克隆等方法构建ISDR基因“盒”,包括3个对干扰素敏感的丙肝患者ISDR及1个对干扰素耐受的丙肝患者ISDR,将含不同ISDR的NS5A基因克隆进原核表达载体PRSET,转染BL21(DE3)细胞后由IPTG诱导表达,获得蛋白过柱纯化及透析去掉高盐后,与经体外转录和翻译系统获得的PKR进行蛋白结合试验.结果:经测序证实获得4个不同ISDR基因,包括1个对干扰素不敏感基因和3个对干扰素敏感基因;体外表达的含ISDR的NS5A蛋白约58000,体外试验初步证实,无论对干扰素敏感或不敏感的ISDR均可与PKR结合.结论:体外构建的含不同ISDR的NS5A蛋白能在原核细胞系统中获得较好表达;研究显示,ISDR影响干扰素抗病毒作用可能不是由ISDR与PKR直接结合导致的.

关键词： HCV 干扰素敏感决定区丙型肝炎病毒基因构建体外表达 ISDR RNA蛋白激酶 PKR

抗4-1BB单克隆抗体诱导肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外表达IFN-γ

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中国比较医学杂志 2005年第2期15卷 67-70,i001页

作者：陈兴于继云程绍辉军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的　研究肾癌细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外经抗4 - 1BB(肿瘤坏死因子受体家族成员)单克隆抗体诱导刺激后IFN γ的表达水平。方法　以BCG和高聚生作为佐剂,用6 0 Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激小鼠腹股沟淋巴结,致敏后... 详细信息

目的　研究肾癌细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外经抗4 - 1BB(肿瘤坏死因子受体家族成员)单克隆抗体诱导刺激后IFN γ的表达水平。方法　以BCG和高聚生作为佐剂,用6 0 Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(肿瘤引流淋巴结tumor draininglymphnode,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL 2、抗CD3、抗CD2 8、抗4 1BB小鼠单克隆抗体激活,然后利用流式细胞术(FACS)检测细胞内IFN γ(干扰素Ⅱ型)的表达水平。结果　应用4 - 1BB单抗刺激的实验组有抗瘤活性的T细胞比例明显提高,其中T淋巴细胞分泌IFN γ的水平达到4 8.2 3% (P 体外刺激肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞后,T淋巴细胞内表达IFN γ水平提高。

关键词：腹股沟淋巴结单克隆抗体肿瘤细胞 T细胞小鼠致敏体外表达肿瘤坏死因子受体 ^60Co射线肿瘤引流淋巴结 IFN-γ水平肾癌细胞 tumor T淋巴细胞干扰素Ⅱ型流式细胞术细胞内表达家族成员 IL-2 联合使用抗CD3 CD28

HBV核心蛋白和B7.1分子嵌合质粒的构建及体外表达的初步研究

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肝脏 2001年第1期6卷 5-7页

作者：焦志勇郑昕张俊赵西平沈汉馨杨东亮郝连杰武汉同济医科大学同济医院临床免疫研究室 430030

目的　构建HBV核心蛋白和B7.1分子真核表达嵌合质粒 ,并检测其在体外的表达。方法　利用亚克隆技术 ,将HBV核心基因片段和B7.1基因片段构建至真核表达质粒 pcDNA3中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用间接免疫荧光法检测两种蛋... 详细信息

目的　构建HBV核心蛋白和B7.1分子真核表达嵌合质粒 ,并检测其在体外的表达。方法　利用亚克隆技术 ,将HBV核心基因片段和B7.1基因片段构建至真核表达质粒 pcDNA3中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用间接免疫荧光法检测两种蛋白的表达。结果　核酸序列测定证实实验所构建的质粒正确 ,嵌合质粒中所含的HBcAg和B7.1分子的核苷酸序列与HBVadr亚型标准株核心区及鼠B7.1分子的同源性分别为 98.18%和 99.89%。该嵌合质粒在体外转染细胞内可表达HBcAg和B7.1分子。结论　实验所构建的HBcAg/B7.1嵌合质粒能在体外同时表达HBcAg和B7.1分子。

关键词：乙型肝炎 DNA 疫苗 B7.1 嵌合质粒体外表达

人内皮细胞特异性分子-1表达载体的构建、体外表达及初步纯化

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安徽医科大学学报 2002年第6期37卷 415-418页

作者：张素梅王雪胡若磊朱华庆熊江霞周青桂淑玉汪渊安徽医科大学分子生物学实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

目的　探讨人内皮细胞特异性分子 1(hESM 1)表达载体的构建、体外表达及表达产物的初步纯化。方法　从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,用反转录 PCR扩增出hESM 1的cDNA。插入质粒 pET 2 8b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL 2 1,经IPT... 详细信息

目的　探讨人内皮细胞特异性分子 1(hESM 1)表达载体的构建、体外表达及表达产物的初步纯化。方法　从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,用反转录 PCR扩增出hESM 1的cDNA。插入质粒 pET 2 8b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL 2 1,经IPTG诱导表达 ,表达产物用电洗脱的方法初步纯化。结果　经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为含hESM 1的重组质粒 ,经SDS PAGE分析证实获得产物为分子量 2 3 80 8u的融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 4%。结论　成功构建了重组hESM 1表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究及临床应用奠定了良好基础。

关键词：聚合酶链反应内皮细胞特异性分子体外表达

靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP的构建和体外表达研究

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靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP的构建和体外表达研究

用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统的建立

2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：许庆安于飞樊明文贾荣郭继华武汉大学口腔生物医学工程教育部重点实验室

为了在小鼠体内研究靶向防龋质粒的靶向作用机制,构建以小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4, CTLA4)为引导的抗变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)葡糖基转移酶(glucosyltransferases,GTFs)的靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP,体外转染COS7细胞检测质粒编码的融合蛋白的表达。采集小鼠外周血,密度梯度离心分离单个核细胞,提取其总RNA。利用RT-PCR法扩增小鼠CTLA4基因的信号肽和胞外区并进行T-A亚克隆,获得携带小鼠CTLA4信号肽和胞外区基因的质粒pMCTLA。对pMCTLA进行双酶切,电泳回收小鼠CTLA4片段,将其连接到切去了人CTLA4片段的靶向防龋质粒pGJGLU/GFP中,获得编码小鼠CTLA4信号肽和胞外区、人Igγ1片段、变形链球菌GLU片段和绿色荧光蛋白的重组质粒pMGJGLU/GFP。将pMGJGLU/GFP转染COS7细胞,通过绿色荧光蛋白的自发荧光观察融合蛋白在胞内的表达,并用蛋白免疫印迹方法检测分泌到胞外的融合蛋白。通过RT-PCR获得了小鼠CTLA4的信号肽和胞外区基因,通过酶切、连接构建了小鼠靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP。pMGJGLU/GFP转染的COS7细胞能够表达绿色荧光蛋白,细胞培养上清中可以检测到分泌的融合蛋白。成功构建了小鼠靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP,pMGJGLU/GFP能够在体外正确表达。

关键词：靶向防龋齿质料构建体外表达

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国输血杂志 2018年第11期31卷 1240-1242页

作者：温机智魏玲王贞贾双双付涌水罗广平姬艳丽广州血液中心临床输血研究所广东广州510095

目的建立用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统。方法从Rh阴性献血者的外周血中分离单个核细胞,并从中进一步分离、培养有核红细胞,同时使用含有野生型RHD等位基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达质粒和包装质粒共转染HEK 293细胞... 详细信息

目的建立用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统。方法从Rh阴性献血者的外周血中分离单个核细胞,并从中进一步分离、培养有核红细胞,同时使用含有野生型RHD等位基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达质粒和包装质粒共转染HEK 293细胞包装慢病毒,收获包装病毒颗粒后感染体外培养的Rh D阴性有核红细胞,诱导有核红细胞分化,最后使用针对9种不同D抗原表位的15种单克隆抗体对红细胞Rh D抗原表位进行流式分析。结果用携带野生型RHD基因的慢病毒感染体外培养的Rh D阴性有核红细胞,成功表达了抗原表位完整的D抗原,Rh D阴性有核红细胞的感染效率为51. 7%。结论成功建立了用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统,可进一步应用于弱D、部分D和D放散型相关的RHD突变型等位基因的体外表达研究。

关键词： RHD等位基因有核红细胞慢病毒感染体外表达 D抗原表位

弓形虫致密颗粒蛋白GRA8真核重组表达质粒的体外表达分析

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湖南师范大学学报（医学版） 2006年第1期3卷 14-16,19页

作者：钟志宏袁仕善湖南师范大学医学院湖南长沙410006

目的:分析弓形虫致密颗粒蛋白GRA8真核表达质粒的体外表达。方法:大量提取纯化重组真核表达质粒pVAX1-GRA8,瞬时转染培养的vero E-6细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测GRA8在细胞中的表达。结果:从转染pVAX1-GRA8后的vero E-6细胞的RNA中扩增... 详细信息

目的:分析弓形虫致密颗粒蛋白GRA8真核表达质粒的体外表达。方法:大量提取纯化重组真核表达质粒pVAX1-GRA8,瞬时转染培养的vero E-6细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测GRA8在细胞中的表达。结果:从转染pVAX1-GRA8后的vero E-6细胞的RNA中扩增出GRA8的特异条带,转染细胞存在弓形虫感染血清识别的特异蛋白质条带。结论:真核表达质粒pVAX1-GRA8在vero E6细胞中获得表达。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白GRA8 真核表达质粒体外表达

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旋毛虫重组抗原的体外表达及其影响因素

热带病与寄生虫学 2005年第3期3卷 181-185页

作者：任道峰崔晶王中全郑州大学医学院寄生虫学教研室郑州450052

旋毛形线虫(Trichinella spiralis)简称旋毛虫,成虫和幼虫分别寄生于同一宿主的小肠和肌肉内.由旋毛虫引起的旋毛虫病(trichinellosis)是一种人兽共患寄生虫病,目前在我国及其他国家仍有爆发流行.由于旋毛虫病的病原学诊断比较困难,免... 详细信息

旋毛形线虫(Trichinella spiralis)简称旋毛虫,成虫和幼虫分别寄生于同一宿主的小肠和肌肉内.由旋毛虫引起的旋毛虫病(trichinellosis)是一种人兽共患寄生虫病,目前在我国及其他国家仍有爆发流行.由于旋毛虫病的病原学诊断比较困难,免疫诊断则显得尤为重要.但旋毛虫虫体抗原成份复杂,用于免疫诊断时常和其它寄生虫病发生交叉反应而出现假阳性.随着分子生物学技术的发展,基因重组抗原具有可大量制备,特异性好等优点而越来越受到了人们的重视[1-3].然而,表达载体的种类、目的基因的长度及诱导剂等诸多因素均可影响重组抗原的表达.

关键词：基因重组抗原旋毛虫病体外表达人兽共患寄生虫病分子生物学技术免疫诊断旋毛形线虫诊断比较爆发流行