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肝素处理山羊精子体外获能的研究

生物工程学报 2004年第2期20卷 252-256页

作者：周佳勃吴延光刘丽清罗明玖常仲乐谭秀文刘娜谭景和山东农业大学动物科技学院泰安271018

系统研究了作用浓度、时间和温度以及输卵管上皮细胞和卵丘细胞对肝素处理山羊精子体外获能后的精子活力、质膜完整性、顶体完整率、获能比例及受精和卵裂的影响 ,为改善山羊精子体外获能效果和研究获能机理提供了必要的数据。主要实验... 详细信息

系统研究了作用浓度、时间和温度以及输卵管上皮细胞和卵丘细胞对肝素处理山羊精子体外获能后的精子活力、质膜完整性、顶体完整率、获能比例及受精和卵裂的影响 ,为改善山羊精子体外获能效果和研究获能机理提供了必要的数据。主要实验结果如下 :1 在获能液中添加 5、10、2 5、50和 10 0 μg mL肝素处理 45min时 ,添加 50和10 0 μg mL肝素精子获能比率最高 (分别为 55%和 56% ) ,但添加 10 0 μg mL肝素处理后顶体完整率明显 (P 获能的最佳肝素浓度为 50 μg mL。 2 随肝素作用时间 (0 ,10 ,2 0 ,3 0 ,45,60和 12 0min)的延长 ,获能精子比例逐渐提高。其中 ,肝素处理 45～ 12 0min各组的获能精子比例差异不显著 (P >0 0 5) ,处理12 0min组的精子活力和质膜完整率显著低于其它各组。说明 50 μg mL肝素处理精子获能的最佳时间是 45～ 60min。 3 在 42℃和 3 8 5℃下处理时 ,获能精子比例显著高于 15℃和 3 7℃ ,但 42℃处理后精子活力和顶体完整率显著低于其它温度。因此 ,3 8 5℃为山羊精子获能的最佳温度。 4 与输卵管上皮细胞共培养获能精子比例显著高于对照组和卵丘细胞组 ,但精子活力、质膜完整率和顶体完整率差异不显著。输卵管上皮组的受精率 (91 3 % )和卵?

关键词：肝素山羊精子体外获能体外受精质膜完整性顶体完整率卵裂

体外获能马鹿精子酪氨酸磷酸化蛋白的分布与表达

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体外获能马鹿精子酪氨酸磷酸化蛋白的分布与表达

作者：张士芳东北林业大学

学位级别：硕士

人及哺乳动物的受精过程是一系列的复杂事件。哺乳动物精子必须在雌性生殖道内经历成熟过程才能获得受精能力,这一现象称为获能(Capacitation)。精子获能是精卵结合的前提,许多因素参与调节精子获能,其中精子蛋白酪氨酸磷酸化是精子运... 详细信息

人及哺乳动物的受精过程是一系列的复杂事件。哺乳动物精子必须在雌性生殖道内经历成熟过程才能获得受精能力,这一现象称为获能(Capacitation)。精子获能是精卵结合的前提,许多因素参与调节精子获能,其中精子蛋白酪氨酸磷酸化是精子运动力、精子超激活运动、精子获能等多种生理生化过程的重要调控因素。精子获能的机理目前还不是十分清楚,但己知酪氨酸蛋白的磷酸化与精子获能相关,本研究的目的是研究酪氨酸磷酸化蛋白在马鹿精子获能过程中的变化。本研究以马鹿精子为研究对象,对体外获能过程中酪氨酸磷酸化的分布和表达规律进行了研究。采用上浮法TALP获能培养基诱导马鹿精子体外获能,以精子与金霉素(CTC)荧光结合类型为指标评价精子获能状态,用免疫荧光技术和Western blot方法检测酪氨酸磷酸化的蛋白在精子上的分布以及酪氨酸磷酸化水平的变化规律。结果显示：随着获能培养的进行,发生蛋白酪氨酸磷酸化的精子的比例增加,并且酪氨酸磷酸化分布由头部扩增至鞭毛,至获能后期几乎所有的精子上都出现酪氨酸磷酸化位点。Western blot在获能前检测到一种分子量为32kDa的酪氨酸磷酸化蛋白,获能后又检测到分子量为55kDa,37kDa,27kDa,80kDa和95kDa的磷酸化酪氨酸蛋白。酪氨酸磷酸化蛋白与马鹿精子获能具有一定的相关性。

关键词：马鹿精子体外获能酪氨酸磷酸化

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猪精子体外获能及异种穿卵的超微结构研究

中国农业科学 1991年第3期24卷 85-89+101-102页

作者：孟励秦鹏春陈大元石其贤东北农学院生物工程系中国科学院动物研究所北京杭州浙江省医科院计划生育研究所哈尔滨 150030

研究结果表明,猪精子头部长7.6微米,宽4.1微米。主要由核、顶体及顶体后区组成。顶体的内、外膜结构不同于质膜。颈部由中心粒和9条纵行分节的节柱组成。尾部全长49.4微米,其中,中段长11.4微米,线粒体较发达,约为52—55旋;主段中央是“... 详细信息

研究结果表明,猪精子头部长7.6微米,宽4.1微米。主要由核、顶体及顶体后区组成。顶体的内、外膜结构不同于质膜。颈部由中心粒和9条纵行分节的节柱组成。尾部全长49.4微米,其中,中段长11.4微米,线粒体较发达,约为52—55旋;主段中央是“9+2”的微管结构,其外方被9条致密纤维和纤维鞘包裹。体外获能前的猪精子群集成簇,运动缓慢。获能后运动方式发生变化,呈超激活运动特征。获能后的猪精子主要是以顶体外膜囊泡化的形式发生顶体反应。质膜是否参与囊泡化尚待进一步观察。顶体反应完成后,仅有顶体内膜包在精子核膜的外面。顶体内膜可与去透明带的金黄地鼠卵的细胞膜相融合,穿入卵内的精子核能在卵内去浓缩并发育成雄原核。本研究共分4批,对120枚金黄地鼠卵进行了观察,平均穿透率为84.8±10.2%。

关键词：猪精子体外获能囊泡化顶体反应

泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子体外获能、顶体反应及穿卵中的作用

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科学通报 2001年第18期46卷 1541-1546页

作者：王红梅宋长城段崇文石伟先李存玺陈大元王永潮中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京师范大学生命科学学院细胞研究所北京100875

采用能阻断泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)的抑制剂——ALLN, 抗泛素化蛋白的单克隆抗体—— UCP1和抗泛素的多克隆抗体—— anti-Ub处理精子或卵, 通过统计B型、AR型精子百分率的变化和形成原核的卵的百分率的变化, 研究部分阻断... 详细信息

采用能阻断泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)的抑制剂——ALLN, 抗泛素化蛋白的单克隆抗体—— UCP1和抗泛素的多克隆抗体—— anti-Ub处理精子或卵, 通过统计B型、AR型精子百分率的变化和形成原核的卵的百分率的变化, 研究部分阻断或完全阻断UPP通路对体外精子获能、顶体反应及穿卵的影响. 结果表明: UCP1, anti-Ub及ALLN对精子体外获能和顶体反应均无明显影响, 但对精子穿卵能力有显著抑制作用. 据此推测UPP可能参与精子体外穿卵过程.

关键词：泛素-蛋白水解酶复合体通路体外获能顶体反应体外穿卵能力小鼠精子体外受精

不同诱导剂对山羊精子体外获能和受精能力的影响

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华北农学报 2005年第6期20卷 46-50页

作者：叶华虎李福兵陈俊颖宋维平刘彦魏泓第三军医大学实验动物中心北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100072

比较不同获能诱导剂对山羊精子体外获能及受精能力的影响,优化山羊早期胚胎体外生产技术体系.山羊精子分别以不同浓度肝素、IA和EGS处理后,检查精子获能率、活力和体外存活时间,同时与体外成熟的卵母细胞受精,观察不同获能处理对精子受... 详细信息

比较不同获能诱导剂对山羊精子体外获能及受精能力的影响,优化山羊早期胚胎体外生产技术体系.山羊精子分别以不同浓度肝素、IA和EGS处理后,检查精子获能率、活力和体外存活时间,同时与体外成熟的卵母细胞受精,观察不同获能处理对精子受精能力的影响.在培养液中添加5,10,20 μg/mL肝素,都能促进精子获能,其中10μg/mL组的获能率达到55.6%,存活时间为18～19 h;低于此浓度,获能率显著降低,高于此浓度,获能率升高不显著,但精子存活时间和活力明显下降.0.1,0.4,0.7μmol/LIA都能提高精子获能率,其中0.4和0.7 μmol/L处理组精子获能率最高,分别为56.2%和53.6%,但两组中的精子活力和存活时间有明显差异.5%,10%和20%EGS都能提高精子活力,延长体外存活时间,但实验组的获能率最高不到20%.10%EGS获能组的受精率和卵裂率分别为27.9%和18.6%,显著低于10μg/mL肝素和0.4μmoL/LIA组,后两者的受精率相似,但IA组的卵裂率明显高于肝素组(52.0%VS 40.2%,P＜0.05).10μg/mL肝素和0.4 μmol/L IA都可诱导山羊精子高水平获能,并获得较好的受精能力,但IA表现出更强的促卵裂发生效应.

关键词：精子体外获能体外受精山羊

Boer山羊精子体外获能前后超微结构的研究

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河南农业大学学报 2005年第2期39卷 206-209页

作者：斛智莲刘建华岳文斌任有蛇史文清李慧锋郑江霞河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 中国农业大学动物科技学院北京100094

用S培养体系对Boer山羊精子进行体外获能试验,借助电子显微技术观察其获能前后超微结构的变化.结果表明,Boer山羊精子的超微结构与其它哺乳动物的类似,分头、颈、尾3部分。头部主要由细胞核构成,含有遗传信息;颈部脆弱,尾部易从此脱落;... 详细信息

用S培养体系对Boer山羊精子进行体外获能试验,借助电子显微技术观察其获能前后超微结构的变化.结果表明,Boer山羊精子的超微结构与其它哺乳动物的类似,分头、颈、尾3部分。头部主要由细胞核构成,含有遗传信息;颈部脆弱,尾部易从此脱落;尾部是精子运动的器官,由中段、主段和末段3部分组成.精子获能后,顶体质膜膨胀、断裂和丢失;顶体外膜囊泡化,进而顶体内膜裸露.

关键词： Boer山羊精子体外获能超微结构

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激光辐射对家兔精子体外获能的影响

应用激光 1989年第3期9卷 132-134页

作者：李金泉内蒙古农牧学院畜牧系

本文研究了激光辐射对家兔精子体外获能的影响,结果发现激光可促进家兔精子的体外获能和顶体反应。

关键词：激光辐射精子体外获能兔

β-谷甾醇、淫羊藿苷对猪精子体外获能效果的影响

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中国兽医学报 2010年第7期30卷 996-999页

作者：赵曌徐捷相荣科赵菊刘笑然吴波王占赫高建明北京农学院动物科学技术系北京102206

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果。以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(Chlortetr... 详细信息

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果。以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(Chlortetracycline,CTC)法结合体外受精检验体外获能效果。在mTBM+肝素中添加β-谷甾醇2(中剂量0.08mg/L)、淫羊藿苷2(中剂量17mg/L)的B型精子率(获能精子)显著高于对照组和其他剂量组(P获能精子)显著低于对照组和其他剂量组(P0.05),卵裂率和囊胚率均极显著高于对照组和其他剂量组(P体外获能效果。

关键词： β-谷甾醇淫羊藿苷体外获能猪精子

肝素浓度和作用时间对绵羊精子体外获能和体外受精的影响

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中国农学通报 2010年第21期26卷 21-24页

作者：刘烈琴罗桂河孟丹娜薛君忠郭勇倪和民北京农学院动物科学技术系北京102206 北京盛世富民清真食品有限责任公司北京102200

通过研究添加不同的浓度肝素(0、5、10、20、50μg/mL)及不同作用时间(0、30、45、60、90、120min)对绵羊精子体外获能、活力、存活时间和相应体外受精的影响,为改善绵羊精子体外获能效果及研究获能的机理提供一定的参考。在获能液中添... 详细信息

通过研究添加不同的浓度肝素(0、5、10、20、50μg/mL)及不同作用时间(0、30、45、60、90、120min)对绵羊精子体外获能、活力、存活时间和相应体外受精的影响,为改善绵羊精子体外获能效果及研究获能的机理提供一定的参考。在获能液中添加10μg/mL肝素作用45min时,其获能率最高,顶体反应率最低(40.92%和16.59%)(P获能效果均不如单独使用10μg/mL肝素。说明绵羊精子获能时肝素的适宜浓度是10μg/mL,作用时间是45min,咖啡因无协同肝素促进获能的作用。

关键词：绵羊精子体外获能肝素咖啡因体外受精