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耐冷希瓦氏菌外膜蛋白的体外折叠研究

中国生物工程杂志 2016年第3期36卷 61-67页

作者：轩换玲李静罗锋代先祝西南大学资源环境学院生物能源与生物修复研究中心重庆400716

目的:旨在建立耐低温革兰氏阴性菌外膜蛋白体外折叠体系,为膜蛋白合成耐低温机制提供理论基础。方法:以包涵体的形式在大肠杆菌中过量表达了来源于耐低温希瓦氏菌的Omp A同源外膜蛋白Omp74的全蛋白质和N端跨膜结构域,纯化包涵体后,用高... 详细信息

目的:旨在建立耐低温革兰氏阴性菌外膜蛋白体外折叠体系,为膜蛋白合成耐低温机制提供理论基础。方法:以包涵体的形式在大肠杆菌中过量表达了来源于耐低温希瓦氏菌的Omp A同源外膜蛋白Omp74的全蛋白质和N端跨膜结构域,纯化包涵体后,用高浓度尿素或强阴离子表面活性剂溶液溶解包涵体,以非离子表面活性剂为折叠介质,建立该外膜蛋白的体外折叠体系,同时以大肠杆菌的Omp A作为对照进行了比较研究。结果:与Omp A相比,Omp74体外折叠受温度影响较小,低浓度的阴离子表面活性剂能促Omp74的折叠,但对Omp A的折叠没有影响;C端结构域抑制Omp74在表面活性剂中的折叠;Omp74在0.5%的月桂酰基麦芽糖苷(DDM)和0.4%的十二烷基肌氨酸钠的混合溶液中能达到接近100%的折叠效率。

关键词：耐冷菌外膜蛋白体外折叠表面活性剂

抗菌肽Plectasin的新型体外折叠方法与活性鉴定

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药物生物技术 2018年第4期25卷 316-318页

作者：阮进成叶跳菲荆许恩李锐徐学清陈新南方医科大学珠江医院呼吸内科广东广州510282 南方医科大学药学院广东省新药筛选重点实验室广东广州510515

在体外条件下,通过体外折叠体系折叠化学合成的Plectasin,经过HPLC纯化及圆二色谱仪(CD)进行结构鉴定。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),耐万古霉素肠球菌(VREF)及耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)为实验菌株,用微量肉汤稀释法测定Plectasin... 详细信息

在体外条件下,通过体外折叠体系折叠化学合成的Plectasin,经过HPLC纯化及圆二色谱仪(CD)进行结构鉴定。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),耐万古霉素肠球菌(VREF)及耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)为实验菌株,用微量肉汤稀释法测定Plectasin对耐药菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果:经体外折叠的Plectasin通过HPLC进行纯化,样品峰约在44.8 min出现,回收率约15%;圆二色谱鉴定显示,折叠后的Plectasin分子结构与折叠前不同,和天然构象类似;折叠活化的Plectasin对MRSA、VREF及PRSP的MIC分别为28,14,28μg/m L。通过体外折叠体系折叠化学合成的Plectasin抗菌肽,能使其获得与天然构象相当的抗菌活性。

关键词：抗菌肽Plectasin 化学合成体外折叠高效液相圆二色谱

感光受体外周蛋白结合蛋白对虫荧光素酶体外折叠的促进作用

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空军总医院学报 2003年第2期19卷 109-112页

作者：刘成刚朱美财占志王荫静李文刘亚宁空军总医院临床分子生物学中心北京100036

目的　探讨感光受体外周蛋白结合蛋白 (PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性 ,然后在 PBP、HSP70、HSP6 0存在下进行体外复性 ,用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示 PBP对虫荧光素酶的复... 详细信息

目的　探讨感光受体外周蛋白结合蛋白 (PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性 ,然后在 PBP、HSP70、HSP6 0存在下进行体外复性 ,用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示 PBP对虫荧光素酶的复性能力很低 ,当与 HSP70同时作用时 ,酶活力明显高于 PBP或 HSP70组 ,而 PBP与 HSP6 0组合对酶的复性能力较HSP6 0组未见有明显差异 ;当 PBP,HSP70 ,HSP6 0三者同时存在时 ,酶活力恢复率最高。去除复性缓冲液中的 ATP及其再生系统 ,酶活力的复性率明显下降。结果表明 PBP具有协助 HSP70 ,在 ATP依赖的情况下促进变性虫荧光素酶体外复性的分子伴侣功能。

关键词：感光受体外周蛋白结合蛋白虫荧光素酶体外折叠促进作用热休克蛋白质类突变

新型温敏型蛋白质体外折叠助剂:dextran-grafted-PNIPAAm

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新型温敏型蛋白质体外折叠助剂:dextran-grafted-PNIPAAm

第一届全国化学工程与生物化工年会

作者：卢滇楠刘志霞张敏莲刘铮清华大学化学工程系清华大学化学工程系清华大学化学工程系清华大学化学工程系

＜正＞合成新型温敏型高分子折叠助剂Dextran-grafted-PNIPAAm（DGP）,并将其应用于蛋白质体外折叠。采用铈铵盐引发自由聚合,在Dextran上接枝上PNIPAAm,利用红外光谱和元素分析方法测定了接枝率为10.5%。以溶菌酶为模拟体系,采用直接... 详细信息

＜正＞合成新型温敏型高分子折叠助剂Dextran-grafted-PNIPAAm（DGP）,并将其应用于蛋白质体外折叠。采用铈铵盐引发自由聚合,在Dextran上接枝上PNIPAAm,利用红外光谱和元素分析方法测定了接枝率为10.5%。以溶菌酶为模拟体系,采用直接稀释复性法研究了DGP辅助溶菌酶复性的可行性,结果表明DGP可以有效地防止溶菌酶在复性过

关键词：蛋白质体外折叠溶菌酶

来源： cnki会议评论

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仪器分析方法研究蛋白质体外折叠的进展

分析测试学报 1997年第6期16卷 76-81页

作者：童宇峰郁鉴源清华大学化学系北京100084

本文论述了蛋白质体外折叠问题的研究现状及几种常用的仪器分析方法在体外折叠问题研究中的应用，展望了今后的发展方向。

关键词：蛋白质折叠折叠起点体外折叠