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食品科学 2019年第11期40卷 139-145页

作者：何萍萍韦敬柳乙姜泽东朱艳冰倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通... 详细信息

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通过酸水解法和双氧水氧化降解法制备泡叶藻聚糖低分子质量降解片段,利用超滤法和Sephadex G-50凝胶柱层析分离纯化得到4个泡叶藻聚糖低分子质量片段:HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2;采用对氨基苯甲酸乙酯柱前衍生样品后进行高效液相色谱及化学方法分析其单糖组成和化学组成;采用高效分子排阻色谱法测定其重均分子质量;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型分析HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2的体外免疫诱导活性。结果:泡叶藻聚糖低分子质量片段的组成特征表明HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2均为杂多糖,且单糖组成存在较大差异,其重均分子质量分别为4.80、4.20、5.30、2.30 kDa。免疫活性分析细胞模型结果表明,HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F2在所测定质量浓度范围(0~200μg/mL)内能明显诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),而H2O2-F1诱导RAW264.7细胞释放NO和TNF-α的活性明显低于HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2。结论:泡叶藻聚糖低分子质量降解片段(HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2)具有明显的免疫诱导活性,其中HCl-F1和H2O2-F2的免疫诱导活性明显高于泡叶藻聚糖。结合其化学组成分析的结果,提示泡叶藻聚糖低分子质量降解片段的免疫诱导活性是由单糖组成和硫酸根质量分数共同决定的。

关键词：泡叶藻聚糖低分子质量降解片段分离纯化化学组成体外免疫诱导活性

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红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究

红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究

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作者：蔡薇集美大学

学位级别：硕士

红毛藻(Bangia fusco-purpure)在福建、广东沿海分布较广,近年来经过规模化的栽培,福建省莆田市南日岛镇已成为主要产地之一。红毛藻藻体富含多种天然活性物质,其中多糖类物质是其发挥生理活性的主要成分之一。本文对红毛藻多糖进行提... 详细信息

红毛藻(Bangia fusco-purpure)在福建、广东沿海分布较广,近年来经过规模化的栽培,福建省莆田市南日岛镇已成为主要产地之一。红毛藻藻体富含多种天然活性物质,其中多糖类物质是其发挥生理活性的主要成分之一。本文对红毛藻多糖进行提取、分离和纯化,通过对红毛藻多糖的基本组成进行分析和研究红毛藻多糖的体外免疫调节活性和抑菌活性,明确红毛藻多糖的基本组成特征和阐明红毛藻的食药用活性机理。1、通过Dowex柱层析和Sephadex G 75柱层析对红毛藻粗多糖进行初步纯化获得多糖BFP,进一步通过DEAE Cellulose 52柱层析对BFP进行分级纯化,得到三个多糖组分F1、F2和F3,其得率分别为40.8%、26.0%和6.8%。2、单糖组成和化学成分分析结果表明,以葡萄糖的摩尔数为1换算,BFP主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸组成,并含有少量岩藻糖、木糖和阿拉伯糖,其单糖组成摩尔比为1.02:1.00:11.23:1.14:0.34:0.35:0.16,硫酸基团含量为10.34%,蛋白质含量为0.31%;F1主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,其单糖组成摩尔比为0.62:1.00:1.43:0.51:0.50,硫酸基团和蛋白质含量分别为2.73%和0.15%;F2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其摩尔比为1.38:1.00:1.15:1.12,硫酸基团和蛋白质含量分别为3.09%和0.15%;F3的主要单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸,其摩尔比为1.99:1.00:0.53:2.92:0.29,硫酸基团和蛋白质含量分别为2.20%和2.19%。3、利用小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型,研究了红毛藻多糖BFP、F1、F2、F3的免疫调节活性。结果表明BFP、F1、F2、F3均能显著诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-?,且F1和F2显示较强的诱导活性,表明红毛藻多糖BFP及其多糖组分F1、F2、F3具有强效的免疫诱导活性。4、利用MAPK信号通路抑制剂和NF-?B信号通路抑制剂研究了红毛藻多糖诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-?的作用机制。由结果推断红毛藻多糖BFP分别通过激活NF-?B、JNK MAPK、Erk MAPK和NF-?B、Erk MAPK、p38 MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞释放NO和分泌TNF-?;F1分别通过激活NF-?B、JNK MAPK和JNK、Erk MAPK、p38 MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞释放NO和分泌TNF-?;而F2和F3作用机制相似,分别通过激活细胞的NF-?B、JNK MAPK和NF-?B、JNK MAPK、Erk MAPK信号通路诱导其释放NO和分泌TNF-?。5、通过营养肉汤微量稀释法评价了红毛藻多糖BFP、F1、F2和F3对5种常见食源性致病菌(大肠埃希氏菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium、副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus、单核细胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes)的体外直接抑菌活性。结果表明,在测定浓度000?g/m L范围内,多糖BFP在浓度达到125?g/m L时对***具有显著抑菌活性,并呈现多糖浓度依赖性,在浓度达到500?g/mL时对***呈现抑菌活性;多糖组分F1在浓度达到125?g/mL时对***表现出显著抑菌活性,并呈现多糖浓度依赖性;多糖组分F2在浓度达到125?g/m L时对***具有显著抑菌活性,其活性随着多糖浓度增加而升高。本论文研究的结果可为红毛藻和红毛藻多糖作为功能食品和天然抗菌剂在食品工业中的开发和应用提供科学依据。

关键词：红毛藻多糖分级纯化体外免疫诱导活性信号传导通路食源性致病菌体外抑菌活性

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响应面法优化仙茅多糖酶解工艺及体外免疫活性

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江苏农业科学 2020年第8期48卷 229-237页

作者：杨玲陈阳杨小生杨娟贵州大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550014 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550014

采用葡聚糖酶对仙茅多糖XMP-1进行酶解,并利用响应面法对酶解工艺进行合理优化。在单因素试验的基础上,采用星点设计模拟葡聚糖酶酶添加量、酶解温度、时间、pH值等4个因素对还原糖生成量综合影响的模型,得到最佳工艺条件,并验证模型的... 详细信息

采用葡聚糖酶对仙茅多糖XMP-1进行酶解,并利用响应面法对酶解工艺进行合理优化。在单因素试验的基础上,采用星点设计模拟葡聚糖酶酶添加量、酶解温度、时间、pH值等4个因素对还原糖生成量综合影响的模型,得到最佳工艺条件,并验证模型的可靠性。通过小鼠巨噬细胞(RAW264.7)分析XMP-11~12 h酶解得到的12批产物的体外免疫活性。结果表明,最佳酶解工艺为酶添加量为56%,温度为52℃,酶解时间为12 h,pH值为6.0,此时还原糖生成量为0.2010 mg/mL。优化结果可靠,与预测值的相对误差小于5%。不同时间段酶解产物对细胞无明显毒害作用,均能诱导RAW264.7细胞活化,释放TNF-α和NO,其中酶解5 h的效果最好。该研究可为仙茅多糖酶降解片段的制备提供理论基础,也可为仙茅多糖在食品领域进一步开发和应用提供科学依据。

关键词：仙茅多糖葡聚糖酶酶解工艺响应曲面法体外免疫诱导活性

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