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Paenibacillus ***-11在动物体内定植及对其生产性能与雏鸡抗体水平的影响

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Paenibacillus ***-11在动物体内定植及对其生产性能与雏鸡抗体水...

作者：徐亚丽西南大学

学位级别：硕士

类芽孢杆菌属自成立至今只有十几年时间,在农作物病害防治、环境污染治理等方面的研究还处于起步阶段,发展空间相当广阔。研究表明：一些类芽孢杆菌如P. macerans、P. polymyxa和P. azoctoria经常被认为是植物根际优势微生物,对植物具... 详细信息

类芽孢杆菌属自成立至今只有十几年时间,在农作物病害防治、环境污染治理等方面的研究还处于起步阶段,发展空间相当广阔。研究表明：一些类芽孢杆菌如P. macerans、P. polymyxa和P. azoctoria经常被认为是植物根际优势微生物,对植物具有促生作用和抑制植物病害的作用。植物内生菌Paenibacillus sp. Aloe-11是本实验室从中华芦荟中分离到的一株内生菌,目前已对该菌进行了全基因组测序。通过对其基因组的生物信息学分析表明和初步试验表明,该菌多种生物特性与多粘类芽孢杆菌相似,对人或动植物没有表现出致病性,还可产生多种生物活性物质,如酶、植物激素、抗菌物质以及絮凝剂等。本实验将Paenibacillus sp. Aloe-11应用于动物,初步研究该菌对动物摄入饲料粗纤维利用率,β-1,3-1,4葡聚糖酶基因原核表达,在动物（小鼠,雏鸡）肠道的定植,以及对生产性能与雏鸡抗体水平的影响。研究方法和结果如下： *** sp. Aloe-11对动物摄入粗纤维利用率以及β-1,3-1,4葡聚糖酶基因原核表达研究。（i）试验选用70只15-18g昆明小鼠,随机分为两组。试验组为饲喂基础日粮加灌服Paenibacillus sp. Aloe-11活菌,对照组为饲喂基础日粮。菌体发酵液活菌含量为2.2×108/mL,每日灌服发酵液1mL,连续灌服14天,在灌服期间的第3、7、14天分别测定小鼠粪便粗纤维含量;在断喂后的第3、7、10、14天测定小鼠粪便粗纤维含量。结果显示,试验组对饲料中粗纤维分解率最高达45.67%,对照组平均为7.14%,两者相差38.45%,有极显著差异（P＜0.01）。（ii）选取部分纤维素基因（β-1,3-1,4葡聚糖酶基因）进行克隆,原核表达,酶活检测。结果显示,β-1，3-1,4葡聚糖酶基因原核表达量低,酶活为79U/mL。 *** sp. Aloe-11在动物肠道内定植。（i）试验选取15-18g昆明小鼠,7日龄雏鸡各30只,每日以Paenibacillus sp. Aloe-112.2×108/mL活菌,灌服小鼠1mL菌液,按雏鸡需水量,菌液与水1：3比例混合饲喂雏鸡。（ii）连续饲喂（灌服）14天,然后断喂。在饲喂期间的第7、14天与断喂Paenibacillus sp. Aloe-11后第3天、7天、14天、21天时,检测小鼠和雏鸡各肠段黏膜表面Paenibacillus sp. Aloe-11数量。结果发现Paenibacillus sp. Aloe-11在小鼠与雏鸡的十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠均有定植,在回肠,结肠,盲肠定植的细菌数较十二指肠,空肠的多。这可能是由于后者靠近胃部,PH较低,不适合细菌存活。小鼠和雏鸡试验均显示,定植时间在14-21天之间。（iii）Paenibacillus sp. Aloe-11对雏鸡肠道菌群的影响。在7、14、21、28日龄即饲喂期间的第7、14天与断喂Paenibacillus sp. Aloe-11后第7天时,检测小鼠和雏鸡各肠段内容物中需氧菌,厌氧菌,乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌数量。结果显示,试验组的需氧菌,厌氧菌,大肠杆菌数量比对照组少,而乳酸杆菌、双歧杆菌多。表明Paenibacillus sp. Aloe-11能够调节肠道菌群,抑制有害菌群的生殖,促进益生菌的生殖。 *** sp. Aloe-11对雏鸡生产性能的影响。（i）将小鼠与7日龄雏鸡随机分为两组Paenibacillus sp. Aloe-11发酵液饲喂组、空白对照组。小鼠每组35只,雏鸡每组100只。（ii）在7、14、21、28、35、42、49日龄早上8时小鼠与雏鸡各组分别个体空腹称重,计算平均日增重和平均周增重。结果显示,小鼠平均日增重,平均周增重无显著差异,小鼠最终体重无显著差异;雏鸡在35日龄时,试验组的平均日增重大于对照组。但两者最终体重无显著差异。 4. Paenibacillus sp. Aloe-11对雏鸡抗体水平的影响（i）实验选取175只5日龄雏鸡,雏鸡随机分为五组：Paenibacillus sp. Aloe-11发酵液饲喂组（A组）、Paenibacillus sp. Aloe-11发酵液饲喂＋新城疫免疫组（B组）、乙醇沉淀发酵液（乙醇处理提取多糖）＋新城疫共同免疫组（C组）、高温灭活发酵液＋新城疫共同免疫组（D组）、新城疫免疫组（E组）。（ii）雏鸡7日龄首免,首免后20天进行二免,二免时采血。二免后20d后再次采血,采用间接血凝抑制试验反应测定抗体情况,比较各组处理的免疫效果。结果显示,在一免、二免后20天,试验组与对照差异显著。但

关键词： Paenibacillus sp.Aloe-11 体内定植生产性能免疫功能

骨髓间充质干细胞在小肠黏膜损伤小鼠体内的定植

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世界华人消化杂志 2010年第29期18卷 3129-3133页

作者：吴巍芸陈其奎南方医科大学珠江医院消化内科广东省广州市510282 中山大学附属第二医院消化内科广东省广州市510120

目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植于小肠放射性损伤的小鼠体内后的定植情况.方法:体外培养扩增♂昆明小鼠MSCs,然后采用性别交叉移植的方法,即移植组:经尾静脉注射雄性小鼠MSCs进入小肠放射性损伤的雌... 详细信息

目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植于小肠放射性损伤的小鼠体内后的定植情况.方法:体外培养扩增♂昆明小鼠MSCs,然后采用性别交叉移植的方法,即移植组:经尾静脉注射雄性小鼠MSCs进入小肠放射性损伤的雌性小鼠体内;对照组:注射等量无菌生理盐水.分别于第1、2、4周通过原位杂交检测Y染色体观察MSCs的定植情况.结果:移植组小鼠于移植后第1周即可检出Y染色体阳性荧光细胞的存在,呈零星散在分布,且多位于隐窝周围的黏膜下层,阳性率为19.48%±5.01%;第2周荧光细胞明显增多,阳性率为30.86%±12.14%,差异显著(P0.05).结论:MSCs移植于小肠放射性损伤的小鼠体内后可以在小肠定植,且主要定植于黏膜下层.

关键词：骨髓间充质干细胞体内定植小肠黏膜下层

双荧光探针分子两步标记益生菌在肠道原位活性分析研究

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药学学报 2022年第5期57卷 1402-1410页

作者：陈荧李琳陈国平李佩谢智勇廖琼峰广州中医药大学中药学院广东广州510006 中山大学药学院(深圳) 广东广州510006

有效补充益生菌可有益肠道健康,但是益生菌在肠道原位活性的分析却鲜有报道。本研究通过将异硫氰酸荧光素(FITC)和5(6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯[5(6)-TAMRA-SE]分别与D-赖氨酸进行偶联,获得了两种颜色的荧光D-氨基酸(fluorescent ... 详细信息

有效补充益生菌可有益肠道健康,但是益生菌在肠道原位活性的分析却鲜有报道。本研究通过将异硫氰酸荧光素(FITC)和5(6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯[5(6)-TAMRA-SE]分别与D-赖氨酸进行偶联,获得了两种颜色的荧光D-氨基酸(fluorescent D-amino acids, FDAAs)探针:绿色探针(fluorescein-D-lysine, FDL)和红色探针(TAMRA-D-lysine, TDL),并尝试对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus, LA)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei, LC)和韦荣球菌(Veillonella atypica, VA) 3种益生菌进行了体外标记。随后将FDAAs应用到小鼠肠道菌群标记,建立方法考察了3种常用益生菌口服定植存活情况。所有动物实验方案经由广州中医药大学动物伦理委员会审查通过。结果表明,合成的两种FDAAs可以无毒且完全对3种益生菌进行体外标记;通过FDAAs两步标记口服益生菌可知,LA存活率较高为92.30%±1.67%, LC和VA的存活率相近,分别为84.13%±4.06%、82.27%±2.43%。本研究可通过快速比较不同益生菌在体内定植存活率的变化,为益生菌在肠道原位定植活性提供理论支撑,同时对临床益生菌合理用药具有指导作用。

关键词：荧光D-氨基酸益生菌肠道菌群荧光成像体内定植

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植物乳杆菌促进黑腹果蝇生长发育

昆虫学报 2017年第5期60卷 544-552页

作者：李玉娟苏琬真胡坤坤李鹏程刘威姚红山西医科大学微生物与免疫学教研室太原030001 山西医科大学汾阳学院医学检验系山西汾阳032200 湖北大学生命科学学院武汉430062 第四军医大学唐都医院呼吸与危重症医学科西安710038 山西医科大学汾阳学院科技中心山西汾阳032200

【目的】检测乳酸菌对果蝇发育历期的影响,进一步探讨其对果蝇促生长的分子机制。【方法】利用选择性培养基MRS从黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内分离乳酸菌,利用革兰氏染色、生化方法及16S rRNA基因进行鉴定;通过体内定植和世代... 详细信息

【目的】检测乳酸菌对果蝇发育历期的影响,进一步探讨其对果蝇促生长的分子机制。【方法】利用选择性培养基MRS从黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内分离乳酸菌,利用革兰氏染色、生化方法及16S rRNA基因进行鉴定;通过体内定植和世代传递实验验证该菌是黑腹果蝇的共生菌;采用悉生模型检测乳酸菌对黑腹果蝇发育的促生长作用;利用实时定量PCR技术检测黑腹果蝇体内促前胸腺激素基因PTTH和胰岛素通路相关基因InR的表达水平;利用葡萄糖试剂盒检测血淋巴液葡萄糖浓度。【结果】从黑腹果蝇中分离到的菌株鉴定为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum FY1菌株(Gen Bank登录号:KY038178),可在黑腹果蝇肠道内定植,每个肠道定植量约为104CFU,并能在世代间稳定传递。FY1菌株体外发酵可降低p H值至5.2,可诱导无菌果蝇卵至蛹发育时间由20.0 d缩短至6.9 d,卵至成虫发育时间由30.0 d缩短至10.7 d,其生长速率是无菌果蝇的约2倍。实时定量PCR结果表明,FY1菌株显著地提前了PTTH表达高峰期,同时降低果蝇中InR表达水平,血淋巴液葡萄糖浓度从5.1 mg/mL降低至2.7 mg/mL。【结论】植物乳杆菌是黑腹果蝇的一种益生菌,推测能通过胰岛素信号通路促进宿主黑腹果蝇的生长和发育。

关键词：植物乳杆菌黑腹果蝇共生菌体内定植肠道

基于荧光D-氨基酸标记的益生菌成像分析初步研究

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基于荧光D-氨基酸标记的益生菌成像分析初步研究

作者：李琳广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:本课题拟根据细菌生长分裂过程中肽聚糖结构合成对D-氨基酸的需要,通过设计合成荧光D-氨基酸实现对活性菌体细菌壁的荧光标记,建立一种分析口服益生菌在体内的存活率、生长方式的方法,并将其应用到健康及溃疡性结肠炎小鼠模型中,... 详细信息

目的:本课题拟根据细菌生长分裂过程中肽聚糖结构合成对D-氨基酸的需要,通过设计合成荧光D-氨基酸实现对活性菌体细菌壁的荧光标记,建立一种分析口服益生菌在体内的存活率、生长方式的方法,并将其应用到健康及溃疡性结肠炎小鼠模型中,为益生菌口服之后在体内定植和存活研究提供依据,为临床益生菌补充提供指导。方法:本研究采用荧光基团与D-氨基酸的偶联作用合成荧光D-氨基酸,通过在细菌培养基中简单地添加实现菌体荧光标记,运用流式细胞术、荧光显微镜等方法验证后,进行了肠道菌群标记;随后建立了口服益生菌的双重标记方法,实现其在小鼠体内菌群占比以及存活率的检测。结果:1、经合成纯化后的三种荧光D-氨基酸能在体外培养条件下对嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、韦荣球菌的活菌实现荧光标记且流式细胞术检测标记率可以达到100%,但灭活菌不能被标记;标记过程对各益生菌的正常生长无明显影响且揭示了其生长分裂方式。2、荧光D-氨基酸对小鼠肠道菌群的标记展示了肠道内多种细菌的生长分裂方式;通过建立双重标记方法成功考察了嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、韦荣球菌三种益生菌经灌胃后在小鼠肠道的存活率分别为91.00%、80.03%、80.36%。3、对健康小鼠和溃疡性结肠炎小鼠进行嗜酸乳杆菌的补充,结果表明在健康小鼠中进行嗜酸乳杆菌补充1、4、7天后,嗜酸乳杆菌逐渐在肠道中定植,在肠道菌群中的占比和存活率升高;在溃疡性结肠炎小鼠中进行的嗜酸乳杆菌补充成功缓解了葡聚糖硫酸钠造成的肠功能紊乱,促进了肠道蠕动,使嗜酸乳杆菌占比远远低于模型组且趋于正常组,同时逆转了溃疡性结肠炎小鼠中嗜酸乳杆菌存活率降低的趋势。结论:基于荧光D-氨基酸标记的细菌标记方法,不仅能够揭示肠道内细菌的生长分裂方式,还能够实现对口服益生菌的体内追踪,考察其在不同情况下的存活率,进而为临床益生菌补充提供建议。

关键词：荧光D-氨基酸益生菌肠道菌群荧光成像体内定植

PbrR大肠埃希菌外膜展示株体内外生长特性

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中国热带医学 2017年第7期17卷 650-654页

作者：吴晓燕郭妍惠长野陈剑辉高朝贤曾新军深圳市职业病防治院广东深圳518020

目的考察Pbr R大肠埃希菌外膜展示株在不同条件下的体内外生长特性,为其体内定植驱铅能力的研究奠定基础。方法 15%SDS-PAGE分析不同浓度诱导剂L-阿拉伯糖诱导展示菌p BAD-loa-pbrr/DH10B的重组蛋白表达情况;铅平板敏感实验对比重组菌... 详细信息

目的考察Pbr R大肠埃希菌外膜展示株在不同条件下的体内外生长特性,为其体内定植驱铅能力的研究奠定基础。方法 15%SDS-PAGE分析不同浓度诱导剂L-阿拉伯糖诱导展示菌p BAD-loa-pbrr/DH10B的重组蛋白表达情况;铅平板敏感实验对比重组菌诱导及非诱导条件下在含铅平板上的菌落形成能力;体外培养实验考察诱导剂的加入对重组菌生长能力及耐铅能力的影响;通过混合共培养实验对比诱导条件下重组菌与空宿主菌的竞争生长能力;考察重组菌6 h内的胃酸耐受性;考察诱导剂及染菌方式对重组菌小鼠体内定植的影响。结果低至0.002%的L-阿拉伯糖即可诱导重组蛋白的高效表达;Pbr R展示菌对铅表现出了一定的耐受力;诱导剂引入后重组菌生长能力降低;重组菌对胃酸有较好的抗性,经口染菌方式重组菌可定植于小鼠肠道,但摄入L-阿拉伯糖水后,粪便中重组菌快速丢失,通过连续染菌方式可维持其定植水平。结论重组菌体内外培养实验结果表明,基于商品化的诱导型表达载体构建的展示菌难以表达重组蛋白的同时实现小鼠体内的稳定定植。

关键词：铅结合蛋白细菌外膜展示体外生长特性体内定植

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大豆低聚肽对嗜酸乳杆菌的增殖效果研究

养殖与饲料 2024年第1期23卷 47-50页

作者：高建胜河南后羿实业集团有限公司河南郑州450000

[目的]探究大豆低聚肽对嗜酸乳杆菌生长的影响,为乳酸菌体内定植提供思路。[方法]试验组加入不同质量浓度的大豆低聚肽于MRS肉汤培养基中,培养嗜酸乳杆菌48 h测定OD_(600 nm);测定不同培养时间下嗜酸乳杆菌培养液的OD_(600 nm),绘制生... 详细信息

[目的]探究大豆低聚肽对嗜酸乳杆菌生长的影响,为乳酸菌体内定植提供思路。[方法]试验组加入不同质量浓度的大豆低聚肽于MRS肉汤培养基中,培养嗜酸乳杆菌48 h测定OD_(600 nm);测定不同培养时间下嗜酸乳杆菌培养液的OD_(600 nm),绘制生长曲线;以300、600、1200 mg/kg剂量的大豆低聚肽-嗜酸乳杆菌菌悬液连续灌胃抗生素诱导的肠道菌群紊乱小鼠7 d,测定大豆低聚肽作用下小鼠体质量变化。[结果]40、30、20 mg/mL大豆低聚肽能明显增加嗜酸乳杆菌菌液浊度,促进嗜酸乳杆菌增殖;能使嗜酸乳杆菌培养12 h后进入对数生长期,提前进入快速增长状态并提高增长速度;低剂量组(300 mg/kg)、中剂量组(600 mg/kg)、高剂量组(1200 mg/kg)均能促进小鼠体质量增长,且600 mg/kg中剂量组体质量增加2.89 g,与阴性对照组差异显著。[结论]大豆低聚肽在体外能明显促进嗜酸乳杆菌增殖,添加的大豆低聚肽质量浓度为40 mg/mL时增殖效果最为显著。能促进小鼠体质量增长,但其促进乳酸菌的体内定植机制需要进一步评价。

关键词：大豆低聚肽嗜酸乳杆菌体外增殖体内定植肠道营养