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LIGHT作为EBNA1 DNA疫苗佐剂的免疫效应研究

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现代医药卫生 2016年第11期32卷 1618-1621页

作者：卢晓华邹军辉郑威杨建设王蒲西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 中国科学院深圳先进技术研究院生物医药与技术研究所广东深圳518055

目的研究LIGHT作为免疫佐剂在EB病毒核抗原1(EBNA1)DNA疫苗诱导免疫反应中的作用。方法以Balb/c小鼠肝脏c DNA为模板,PCR扩增构建真核表达载体pc DNA3.1-LIGHT;转染细胞,验证LIGHT蛋白的表达;采用电脉冲方法,以LIGHT质粒为佐剂与EBV DN... 详细信息

目的研究LIGHT作为免疫佐剂在EB病毒核抗原1(EBNA1)DNA疫苗诱导免疫反应中的作用。方法以Balb/c小鼠肝脏c DNA为模板,PCR扩增构建真核表达载体pc DNA3.1-LIGHT;转染细胞,验证LIGHT蛋白的表达;采用电脉冲方法,以LIGHT质粒为佐剂与EBV DNA疫苗联合免疫小鼠,测定血清中EBNA1特异性抗体;分离和收集小鼠脾脏淋巴细胞,经EBNA1抗原刺激后,测定细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的分泌水平。结果 PCR扩增出LIGHT目的片段,大小为720 bp;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)鉴定结果:在蛋白Marker相对分子质量26×103上方有单一清晰目的条带,表明有LIGHT蛋白表达;免疫小鼠血清测定实验结果:LIGHT联合DNA疫苗实验组的抗体滴度是单独DNA疫苗免疫组的3倍;脾淋巴细胞因子测定结果表明LIGHT联合免疫组能明显增强IFN-γ的分泌。结论 LIGHT作为免疫佐剂,可依赖其介导的信号通路对抗体的产生和相关细胞因子的分泌具有显著促进作用。

关键词：疱疹病毒4型,人疫苗,DNA 佐剂,免疫 LIGHT 电脉冲免疫

禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

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禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

脂质纳米粒载体共递送抗原和雷西莫特佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响

第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：杨忠东王石磊许文婷李冬梅上海生物制品研究所第六研究室上海生物制品研究所第四研究室

目的观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫后对异亚型病毒攻击后的保护情况。方法用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免... 详细信息

目的观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫后对异亚型病毒攻击后的保护情况。方法用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免疫雌性BALB/c小鼠,同时分别以H5N1灭活疫苗免疫小鼠以及PBS腹腔注射处理小鼠作对照。采用ELISA方法分别对各组小鼠免疫后血清特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a水平进行检测;以PR8病毒鼻腔攻击后观察小鼠体重变化情况和生存率。结果与PBS处理组相比,无论以何种方式免疫H5N1疫苗,免疫后特异性IgG及其亚类水平均明显升高(t=7.4004,P免疫组和联合M59免疫组IgG2a水平升高明显,联合纳米化MF59免疫小鼠后IgG2a水平有所下降,IgG1水平有所升高;联合铝佐剂组以IgG1升高为主。攻毒后各组小鼠体重均出现下降,但疫苗单独免疫小鼠以及疫苗与佐剂联合免疫小鼠于攻毒后期体重恢复接近正常或者正常。PBS处理组小鼠攻毒后全部死亡,佐剂联合免疫组小鼠存活率100%,而疫苗单独免疫小鼠存活率为70%。结论 H5N1疫苗无论是单独免疫或是联合不同佐剂免疫均可诱导较高水平的特异性抗体产生,有非常好的免疫原性。H5N1灭活疫苗诱导的抗体亚类以IgG2a为主,MF59以及纳米化MF59也以诱导IgG2a亚类为主,但纳米化MF59可诱导更均衡的免疫应答。联合铝佐剂或纳米化铝佐剂免疫小鼠后均可诱导以IgG1亚类为主的抗体应答。联合两种佐剂均可对小鼠产生很好的异亚型保护。

关键词：流感病毒A型 H5N1亚型佐剂,免疫流感疫苗 MF59

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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贵州医科大学学报 2023年第9期48卷 1032-1039页

作者：金育罗佳何春艳罗忠瑞张玉芳刘野中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响。方法取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组... 详细信息

目的探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响。方法取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组(生理盐水100μL)、LNP+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和LNP 10μg)、LNP+R848组(LNP 10μg和R8483.18μg)、R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和R8483.18μg)及LNP+R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg、LNP 10μg及R8483.18μg),均采用肌肉注射、2次免疫、间隔7 d,免疫处理期间每2 d测量1次各组小鼠肿瘤体积的变化,第2次免疫结束后第7天麻醉处死各组小鼠,取瘤体制备细胞悬液;采用流式细胞术检测各组小鼠肿瘤细胞中CD4阳性T淋巴细胞(CD4^(+)T)和CD8阳性T淋巴细胞(CD8^(+)T)细胞分泌的溶酶体相关膜蛋白1(CD107a)、干扰素γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果LNP+R848^(+)抗原组小鼠黑色素瘤体积低于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848^(+)抗原组(P佐剂可增强黑色素瘤小鼠的细胞免疫应答及抑制瘤体的生长。

关键词：佐剂,免疫共递送脂质纳米粒雷西莫特肿瘤疫苗细胞免疫

板蓝根α-葡聚糖佐剂提高H1N1流感疫苗免疫小鼠体液免疫和细胞免疫功能

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第6期28卷 850-856页

作者：文松李倩贾培媛赵修南武军华麻浩张永平王玉霞单俊杰王海南贵州大学药学院贵州贵阳550025 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 北京中安佐际生物科技有限公司北京100111 国家食品药品监督管理总局北京100053

目的：研究板蓝根α-葡聚糖对H1N1流感疫苗免疫小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。方法100μg α-葡聚糖按＋H1N1流感病毒裂解液3μg给每只小鼠一次性肌内注射。分别在免疫后3,5,8,10,12和14 d采血,ELlSA法检测小鼠血清特异性抗体和亚... 详细信息

目的：研究板蓝根α-葡聚糖对H1N1流感疫苗免疫小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。方法100μg α-葡聚糖按＋H1N1流感病毒裂解液3μg给每只小鼠一次性肌内注射。分别在免疫后3,5,8,10,12和14 d采血,ELlSA法检测小鼠血清特异性抗体和亚类抗体滴度；MTT法测定小鼠脾T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞增殖反应；ELlSA法测定细胞培养上清干扰素γ（ lFN-γ）、白细胞介素4（ lL-4）、lL-12和肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）含量；流式细胞术测定脾细胞中CD3^＋, CD19^＋, CD4^＋, CD8^＋T细胞亚群百分率。结果板蓝根α-葡聚糖对人用H1N1流感疫苗抗原显示优良的佐剂作用,初次免疫后5 d即能促进特异性抗体的生成,抗体亚型主要为lgM。免疫后5～14 d,总抗体及亚类lgG1, lgG2a和lgG2b滴度持续升高,lgG3在免疫8 d达峰,之后无明显变化。 lgA滴度水平最低,且随时间无明显变化。α-葡聚糖显著促进H1N1流感疫苗免疫小鼠脾T 细胞和B 细胞增殖（增殖率分别为44.2％和37.8％）,促进脾细胞分泌 lFN-γ（ P＜0.01）和lL-12（ P＜0.05）,刺激胸腺细胞分泌lL-4（ P＜0.01）；与单独抗原组相比,联用α-葡聚糖明显提高免疫小鼠脾 CD3^＋细胞百分率（P＜0.01）及 CD3＋/CD19＋比值（P＜0.01）,提高 CD8^＋T 细胞百分率,降低CD4^＋/CD8^＋比值（ P＜0.01）。α-葡聚糖能激活巨噬细胞,促进TNF-α的分泌。结论板蓝根α-葡聚糖能显著提高免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫功能。

关键词：板蓝根 α-葡聚糖流感疫苗佐剂,免疫抗体生成免疫,细胞

热休克蛋白融合蛋白抗肿瘤免疫佐剂的初步筛选

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吉林大学学报（医学版） 2007年第4期33卷 642-646页

作者：陈亚静吴秀丽王丽卫红飞王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的:筛选一种具有增强热休克融合蛋白HSP-MUC1抗肿瘤作用的免疫佐剂。方法:将HSP-MUC1与新型CpG ODN或人源性IFNα2b混合后皮下注射MUC1阳性荷瘤小鼠,各分4组,分别是磷酸盐缓冲液(PBS)、HSP-MUC1、CpG ODN(hIFNα2b)及HSP-MUC1+CpG ODN... 详细信息

目的:筛选一种具有增强热休克融合蛋白HSP-MUC1抗肿瘤作用的免疫佐剂。方法:将HSP-MUC1与新型CpG ODN或人源性IFNα2b混合后皮下注射MUC1阳性荷瘤小鼠,各分4组,分别是磷酸盐缓冲液(PBS)、HSP-MUC1、CpG ODN(hIFNα2b)及HSP-MUC1+CpG ODN(HSP-MUC1+hIFNα2b)。观察各组肿瘤发生率及肿瘤体积变化。结果:HSP-MUC1+CpG ODN组与PBS组及HSP-MUC1组比较小鼠的肿瘤发生率及肿瘤重量均降低(P0.05)。结论:CpG ODN是一种能增强HSP-MUC1抗肿瘤作用的免疫佐剂,人源性IFNα2b则不能增强HSP-MUC1的抗肿瘤活性。

关键词：热休克蛋白类 HSP-MUC1 CpG ODN 干扰素疫苗,合成佐剂,免疫

透皮免疫佐剂LTB及LTK63的表达与鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 8-11页

作者：陈斯勇伊瑶郭瑜毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎病毒室北京100052

目的研究新型的透皮免疫佐剂。方法从大肠埃希菌***10407中扩增出大肠埃希菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)全长基因,并用基因工程的方法表达出了无毒性的A亚单位蛋白LTKA及B亚单位蛋白LTB。将表达产物纯化后用SDS-PAGE、GM1... 详细信息

目的研究新型的透皮免疫佐剂。方法从大肠埃希菌***10407中扩增出大肠埃希菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)全长基因,并用基因工程的方法表达出了无毒性的A亚单位蛋白LTKA及B亚单位蛋白LTB。将表达产物纯化后用SDS-PAGE、GM1-ELISA等方法进行鉴定。结果表达的LTB亚单位仍具有和神经节苷脂GM1特异结合的生物学活性,LTK63已经不具有毒素活性。结论LTB和LTK63有希望成为候选的透皮免疫佐剂。

关键词：免疫,黏膜免疫,皮肤佐剂,免疫

铝佐剂和免疫程序对Sabin IPV免疫原性影响的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2013年第2期27卷 102-104页

作者：王芳张名谢炳锋曹晗童少勇王俊荣俞晓平汤洋杨景然孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室昆明550118

目的研究铝佐剂和免疫程序对不同配比的SabinIPV免疫原性的影响。方法用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备四批SabinIPV，分别为中剂量无佐剂组、中剂量铝佐剂组、低剂量无佐剂组、低剂量铝佐剂组，采用0、1、2月和0、2、4月两种免疫... 详细信息

目的研究铝佐剂和免疫程序对不同配比的SabinIPV免疫原性的影响。方法用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备四批SabinIPV，分别为中剂量无佐剂组、中剂量铝佐剂组、低剂量无佐剂组、低剂量铝佐剂组，采用0、1、2月和0、2、4月两种免疫程序对大鼠进行3针基础免疫，每针基础免疫一个月后采血，并检测免疫后血清中3个型别的中和抗体水平。结果经过3针基础免疫后，各组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中和抗体几何平均滴度均显著提高，阳转率均达到100％。对不同组别间两种免疫程序比较无显著差异，但相同条件下，0、2、4月免疫程序可诱导产生更高的抗体水平。对相同免疫程序下不同组别进行比对，添加铝佐剂组与无佐剂组相比可以诱导更高的抗体水平。结论铝佐剂和免疫程序可提高SabinIPV免疫原性。

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗灭活氢氧化铝佐剂,免疫免疫接种程序表中和试验

硫酸乙酰肝素与氢氧化锌复合佐剂对丙型肝炎病毒重组抗原表位多肽疫苗的免疫增强作用

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1174-1176页

作者：王海漩胡云章胡凝珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室昆明650118

目的探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌复合佐剂对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)重组抗原表位多肽疫苗诱导小鼠体液免疫的增强作用。方法将HS(100μg)与氢氧化锌(1.0 mg)复合佐剂与高(100μg/0.1 ml)、中(50μg/0.... 详细信息

目的探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌复合佐剂对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)重组抗原表位多肽疫苗诱导小鼠体液免疫的增强作用。方法将HS(100μg)与氢氧化锌(1.0 mg)复合佐剂与高(100μg/0.1 ml)、中(50μg/0.1 ml)、低(25μg/0.1 ml)剂量的HCV重组抗原表位多肽疫苗混合后免疫小鼠,并设阴性对照组(生理盐水)、无佐剂组、铝佐剂组、HS单一佐剂组和氢氧化锌单一佐剂组。于免疫后4、8、12、16、20周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度。结果除阴性对照组外,各实验组小鼠血清中均检测出HCV特异性IgG抗体。抗原高剂量复合佐剂组在各时间点的HCV特异性IgG抗体滴度均显著高于无佐剂组、铝佐剂组、HS单一佐剂组和氢氧化锌单一佐剂组(P均佐剂组小鼠产生的抗体滴度与铝佐剂组相当。结论 HS与氢氧化锌复合佐剂能有效增强HCV重组抗原表位多肽疫苗诱导的小鼠体液免疫应答,且能够在一定程度上降低抗原的使用量。

关键词：硫酸乙酰肝素氢氧化锌佐剂,免疫肝炎,丙型疫苗

硫酸乙酰肝素与氢氧化锌联合佐剂对HBsAg诱导小鼠免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2011年第4期24卷 394-397页

作者：乌美妮王海漩兰芸胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室昆明650118

目的探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌联合佐剂对HBsAg诱导的小鼠体液免疫和细胞免疫应答的影响。方法将HS与氢氧化锌按不同剂量组合,与HBsAg(2μg)混合,免疫ICR小鼠,并设阴性对照、抗原对照、铝佐剂对照、单一HS及单一... 详细信息

目的探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌联合佐剂对HBsAg诱导的小鼠体液免疫和细胞免疫应答的影响。方法将HS与氢氧化锌按不同剂量组合,与HBsAg(2μg)混合,免疫ICR小鼠,并设阴性对照、抗原对照、铝佐剂对照、单一HS及单一氢氧化锌对照组,共23组。分别于末次免疫后4、8、12、16、20、24周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg抗体水平;选择体液免疫效果最佳的组免疫BALB/c小鼠,于免疫后8周,采用乳酸脱氢酶法检测细胞杀伤活性。结果阴性对照组在各时间点均未检测到IgG抗体,其余各组的抗体滴度均在末次免疫后第8周达峰值,随着时间的延长,抗体水平呈下降趋势。其中第23组(100μg HS+1.0 mg氢氧化锌,免疫2针)抗体水平最高,且持续时间较长,末次免疫后8周,其对HBsAg的体液免疫增强效应显著优于铝佐剂和HS单一佐剂(P佐剂,但差异无统计学意义(P>0.05)。联合佐剂能诱导产生特异性的CTL细胞免疫效应。结论 HS和氢氧化锌联合佐剂既能有效增强HBsAg诱导的小鼠特异性体液免疫应答,又能显著诱导CTL细胞免疫应答。

关键词：硫酸乙酰肝素氢氧化锌佐剂,免疫肝炎表面抗原,乙型