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低碱性磷酸酯酶症——附1病例报告

低碱性磷酸酯酶症——附1病例报告

作者：孙营营吉林大学

学位级别：硕士

低碱性磷酸酯酶症(Hypophosphatasia,HP)又称低磷酸酶血症,是一种罕见的遗传性全身系统病,主要特症为骨骼和牙齿的矿化不全,血清及骨组织中碱性磷酸酶活性减低。其临床及病理特点主要依靠病例报告,病因和发病机制仍不明确,尚无彻底的治... 详细信息

低碱性磷酸酯酶症(Hypophosphatasia,HP)又称低磷酸酶血症,是一种罕见的遗传性全身系统病,主要特症为骨骼和牙齿的矿化不全,血清及骨组织中碱性磷酸酶活性减低。其临床及病理特点主要依靠病例报告,病因和发病机制仍不明确,尚无彻底的治疗方法。近年来随着分子遗传学的飞速发展,国外有报道从细胞、分子及基因角度对其发病机制进行研究,已经取得了较大的突破性进展。本文将报告一例低碱性磷酸酯酶症的病例,并结合病例对低碱性磷酸酯酶症的临床表现,病因机制及治疗进行讨论。从分子生物学角度讨论ALP酶及其代谢产物5′-磷酸吡哆醛( pyridoxal - 5′- phosphate , PLP)、焦磷酸盐(pyrophosphate , Ppi )和磷酸乙氨醇(phosphoethanolamine ,PEA),以及与其发病相关的基因位点,ALPL基因的突变做出讨论。并总结它的诊断标准,治疗方法及新的治疗理念。

关键词：低碱性磷酸酯酶症非特异性碱性磷酸酶发病机制分子学检测

低碱性磷酸酯酶症患儿的骨髓间充质干细胞和乳牙牙髓干细胞生物学行为的实验研究

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低碱性磷酸酯酶症患儿的骨髓间充质干细胞和乳牙牙髓干细胞生物学...

作者：王茜第四军医大学

学位级别：硕士

低碱性磷酸酯酶症(Hypophospatasia,HPP)是一种常染色体隐性遗传疾病,由于碱性磷酸酯酶(ALPL)基因突变而导致的以骨骼和牙齿发育缺陷及血清、骨的组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)活性降低为特征的一种系统性疾病。由于ALPL的等位基因异质... 详细信息

低碱性磷酸酯酶症(Hypophospatasia,HPP)是一种常染色体隐性遗传疾病,由于碱性磷酸酯酶(ALPL)基因突变而导致的以骨骼和牙齿发育缺陷及血清、骨的组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)活性降低为特征的一种系统性疾病。由于ALPL的等位基因异质性,该疾病的临床表型高度变化,轻者仅表现为乳牙过早脱落,严重情况下可出现严重骨骼异常及高钙血症导致围产期死亡,目前已发现214个ALPL基因突变类型可导致HPP疾病的发生。ALPL编码的TNAP蛋白不仅在生物矿化过程中具有至关重要作用,而且可能通过影响相关干细胞的生物学行为导致骨骼及牙齿发育异常。本实验首先对HPP患儿进行基因突变检测,进而体外培养和检测HPP患儿脱落乳牙牙髓干细胞(SHED)以及骨髓间充质干细胞(BMMSC),以期探讨ALPL基因突变对SHED及BMMSC生物学特性及分化行为的影响,为深入阐明低碱性磷酸酯酶症的致病机制提供一定实验依据和研究基础。所取的研究结果如下。实验一低碱性磷酸酯酶症患儿致病基因ALPL突变检测的研究本实验通过PCR及基因测序等方法对1名HPP患儿致病基因ALPL基因的外显子(EXON)进行基因组DNA序列分析,进而检测基因突变的类型和位点。结果显示,该HPP患儿ALPL基因的第7个外显子,基因序列第787位点发现了一个T→C的错义突变,为杂合型结构,该点突变导致密码子TAC→CAC,可引起编码蛋白第263位点酪氨酸变成组氨酸,而其家系健康成员及正常对照均显示为野生型序列。经过数据库和文献检索,本实验发现的ALPL基因突变型(c.787T>C, p.Y263H)未见报道,初步认为此基因型单倍体不足是导致该HPP患儿临床表型的致病原因。实验二低碱性磷酸酯酶症患儿乳牙牙髓干细胞的生物学行为研究本实验首先进行低碱性磷酸酯酶症患者乳牙牙髓干细胞和正常乳牙牙髓干细胞的体外培养,进而通过免疫细胞化学的方法对两组细胞表面分子标记物表达分析,采用克隆形成率,Ki67阳性率,MTT,流式细胞方法检测两组干细胞增殖能力及凋亡水平的差异,茜素红染色,Real-time PCR检测两组细胞的矿化能力。结果发现:HPP细胞的成骨相关指标ALP、BSP、COL1等蛋白表达水平均略低于正常对照组;而增殖检测显示HPP细胞的细胞扩增水平较低;运用茜素红染色看出HPP细胞形成矿化结节明显较少;Real-time PCR检测发现RUNX2的mRNA表达下调,而ALP、COL1、DSPP等的表达上调。结果提示HPP细胞较正常对照组有着较弱的增殖能力和矿化能力。实验三低碱性磷酸酯酶症患儿骨髓间充质干细胞的生物学行为研究本实验首先体外培养低碱性磷酸酯酶症患者骨髓间充质干细胞和正常骨髓间充质干细胞,进而通过免疫细胞化学和流式细胞方法对两组细胞表面分子标记物表达分析,采用MTT,碱性磷酸酶活性检测,流式细胞方法检测两组干细胞增殖能力及凋亡水平的差异,茜素红染色,ALP活性染色,Real-time PCR检测两组细胞的矿化能力。结果发现:HPP细胞的成骨相关指标ALP、BSP、COL1等蛋白表达水平均略低于正常对照组;流式细胞的表面分子鉴定两组细胞表达量无明显差异;而增殖检测显示HPP细胞的细胞扩增水平较低;运用茜素红染色和ALP活性染色看出HPP细胞形成矿化结节明显较少;Real-time PCR检测发现RUNX2的mRNA表达下调,而ALPL、COL1、BSP等的表达上调。结果提示HPP细胞较正常对照组有着较弱的增殖能力和矿化能力。

关键词：低碱性磷酸酯酶症基因突变乳牙牙髓干细胞骨髓间充质干细胞

低碱性磷酸酯酶症患儿乳牙牙周膜干细胞生物学行为的实验研究

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低碱性磷酸酯酶症患儿乳牙牙周膜干细胞生物学行为的实验研究

作者：冀堃第四军医大学

学位级别：硕士

低碱性磷酸酯酶症(Hypophospatasia,HPP)是一类涉及骨骼及牙齿发育缺陷的遗传性疾病,是由于肝/骨/肾碱性磷酸酯酶基因(ALPL)突变导致编码的非组织特异性碱性磷酸酶(TNAP)蛋白活性降低造成的。该疾病的临床表型高度变化,轻者仅表现为牙... 详细信息

低碱性磷酸酯酶症(Hypophospatasia,HPP)是一类涉及骨骼及牙齿发育缺陷的遗传性疾病,是由于肝/骨/肾碱性磷酸酯酶基因(ALPL)突变导致编码的非组织特异性碱性磷酸酶(TNAP)蛋白活性降低造成的。该疾病的临床表型高度变化,轻者仅表现为牙根发育不良导致的乳牙过早脱落,严重情况下可出现严重骨骼异常及高钙血症引发围产期死亡。按照临床表现可分成围产期型(致死性和良性)、婴幼儿型、儿童型、成人型和牙齿型。发育相关间充质干细胞及其微环境是维持骨骼及牙齿正常发育和修复再生的重要基础,因此通过研究发育相关干细胞的生物学特性,探索HPP导致牙根发育不良的致病机理,对该疾病的治疗十分必要。牙周膜干细胞能够维持牙周膜功能的稳定,发挥生理性细胞更新和组织损伤修复的作用,具有自我更新和多向分化的能力。本实验首先通过临床及实验室检查,结合患儿脱落乳牙的病理学检查及电镜分析,对1例乳牙早脱的患儿进行初步的临床和病理诊断,确定该患儿的临床表型及牙齿发育异常表现;进而分离培养乳牙牙周膜干细胞,并对其进行来源鉴定和生物学特性的分析;继而通过对患儿及正常儿童乳牙牙周膜干细胞进行生物学特性的比较,探讨低活性的TNAP对乳牙牙周膜干细胞分化的影响,为深入阐明低碱性磷酸酯酶症的致病机制提供一定实验依据和研究基础。本课题的研究内容及结果如下: 第一部分HPP患儿的临床、实验室和病理学检查及分析本课题研究对象为1例乳牙过早脱落的患儿,为明确诊断和临床分型,我们对患儿进行了详细的临床及实验室检查,并对患儿脱落的乳牙进行病理学和扫描电镜检查,观察和分析乳牙组织结构及发育情况。临床和实验室检查结果发现患儿主要表现为乳牙过早脱落,恒牙发育及萌出迟缓,牙周组织发育缺陷而骨骼发育无明显异常;多次实验室检查均发现血清碱性磷酸酶活性低于正常参考值,患儿尿磷酸乙醇胺的检测也为弱阳性;病理学检查和扫描电镜观察发现,患儿乳牙牙本质矿化程度低,牙本质小管较正常乳牙粗大;牙骨质层较薄且厚度不均匀,表面凹凸不平,部分牙根表面无牙骨质覆盖。根据患儿的临床、实验室、病理学检查结果,该患儿初步诊断为牙齿型低碱性磷酸酯酶症。第二部分正常人乳牙牙周膜干细胞生物学行为的实验研究本实验首次从正常人乳牙牙周膜中分离培养出干细胞,并通过免疫细胞化学方法和流式细胞仪对其来源进行鉴定,进而从增殖能力和多向分化能力等方面对乳牙牙周膜干细胞的生物学特性进行研究。实验结果显示:分离培养获得的人乳牙牙周膜干细胞在形态上与恒牙牙周膜干细胞相似,均为长梭形成纤维细胞样;免疫细胞化学和流式细胞仪分子表型鉴定显示乳牙牙周膜干细胞阳性表达间充质来源的表面标志STRO-1, CD146, CD29和CD90,而造血系来源的标志物CD34为阴性;细胞周期,MTT和克隆形成率的检测结果显示,人乳牙牙周膜干细胞的增殖能力强于恒牙牙周膜干细胞;人乳牙牙周膜干细胞在体外诱导条件下可以向成骨,成脂方向分化;同时RT-PCR检测发现,矿化诱导后细胞成骨相关基因(ALP,OCN和Col I)的表达上调,而成脂诱导后细胞成脂相关基因(PPAR-γ和C/EBPα)的表达上调。以上结果说明乳牙牙周膜中确实存在间充质来源的干细胞,并且具有很强的增殖能力和多向分化的能力,尤其是具备比恒牙牙周膜干细胞更强的增殖能力,是一种理想的种子细胞。第三部分HPP患儿乳牙牙周膜干细胞生物学行为的实验研究本实验首先分离培养HPP患儿和健康儿童乳牙牙周膜干细胞,进而比较两者在增殖和分化能力方面的差异,探索低活性的TNAP对牙周膜干细胞生物学行为的影响。细胞周期,MTT和克隆形成实验结果发现,HPP患儿的乳牙牙周膜干细胞在增殖能力上明显较正常细胞弱。两组细胞矿化诱导后HPP患儿细胞形成的矿化结节数量明显少于正常组。ALP活性分析显示,各个时间观察点患儿乳牙牙周膜干细胞的ALP活性都明显低于同一时间点正常组细胞的ALP活性。Real-time PCR结果显示,HPP患儿细胞RUNX2基因表达低于正常组,而其它相关功能基因ALP,OCN和CP23基因表达量均为患儿组高于正常组。体内移植实验发现,正常乳牙牙周膜干细胞与牙本质片复合植入裸鼠体内可形成牙周膜纤维样的结构;而患者细胞仅形成环绕牙本质片的不规则纤维。以上结果说明HPP患儿乳牙牙周膜干细胞的增殖能力和成骨能力明显低于正常细胞,低活性的TNAP影响乳牙牙周膜干细胞的生理功能及分化。

关键词：低碱性磷酸酯酶症碱性磷酸酯酶乳牙牙周膜干细胞

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低碱性磷酸酯酶症及其在口腔中的表现

国际口腔医学杂志 2011年第5期38卷 581-583页

作者：孙营营林崇韬吉林大学口腔医院牙周科长春130021

低碱性磷酸酯酶症(HP)又称低磷酸酶血症,是一种罕见的遗传性全身系统疾病,主要特征为骨骼和牙齿的矿化不全,血清及骨组织中碱性磷酸酶活性降低。据统计该病的严重型发病率为1/100 000,而轻型发病率相对较高,其临床表现有很大的变异性,... 详细信息

低碱性磷酸酯酶症(HP)又称低磷酸酶血症,是一种罕见的遗传性全身系统疾病,主要特征为骨骼和牙齿的矿化不全,血清及骨组织中碱性磷酸酶活性降低。据统计该病的严重型发病率为1/100 000,而轻型发病率相对较高,其临床表现有很大的变异性,有的仅表现为年轻恒上前牙过早脱落,有的会出现严重的全身性骨骼形成不良,甚至导致新生儿死亡。HP的诊断依靠碱性磷酸酶的测定和碱性磷酸酯酶(ALP)基因的分子检测。近年的研究方向主要是组织非特异性碱性磷酸酶及其对骨矿化的功能、ALP的基因突变对HP的影响、HP的治疗方法等。

关键词：低碱性磷酸酯酶症碱性磷酸酶碱性磷酸酯酶基因突变

GSK3β在TNAP缺乏导致的牙硬组织矿化异常中的作用

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GSK3β在TNAP缺乏导致的牙硬组织矿化异常中的作用

作者：陈琦第四军医大学

学位级别：硕士

低碱性磷酸酯酶症(Hypophosphatasia,HPP)是一种罕见的系统性遗传疾病。主要由于ALPL基因突变导致组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)活性降低从而引起骨和牙矿化代谢的异常。TNAP在骨与牙等硬组织的矿化过程中具有重要作用。最新研究表明,T... 详细信息

低碱性磷酸酯酶症(Hypophosphatasia,HPP)是一种罕见的系统性遗传疾病。主要由于ALPL基因突变导致组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)活性降低从而引起骨和牙矿化代谢的异常。TNAP在骨与牙等硬组织的矿化过程中具有重要作用。最新研究表明,TNAP缺乏不仅仅会直接抑制矿化过程,还可能通过微环境影响相关间充质干细胞的生物学特性。间充质干细胞及其微环境是维持相关组织正常发育的重要基础,且在组织更新和修复过程中发挥着重要作用。在基因缺陷情况下干细胞表现出的细胞生物学行为将直接关系到患者的临床表现。本课题组前期研究发现,来源于HPP患儿的骨髓间充质干细胞(BMMSC)存在分化能力异常,同时Active-β-catenin表达降低,提示Wnt/β-catenin信号通路可能参与了低ALP活性条件下干细胞功能的改变。但与牙齿发育矿化密切相关的牙髓干细胞(DPSC)及牙周膜干细胞(PDLSC),其在ALPL基因异常情况下功能的改变尚未见报道。本实验拟研究DPSC和PDLSC在TNAP缺乏时的功能改变以及相关机制,在此基础上,初步探索利用恢复干细胞功能来治疗HPP相关异常的可能性。研究主要由以下几个方面逐步进行:第一,以ALPL基因敲除小鼠Akp2+/-为模型,观察敲除ALPL基因对牙齿硬组织的影响;第二,通过慢病毒转染的方法敲减正常人来源的hPDLSC与hDPSC中的ALPL基因,观察敲减ALPL基因对干细胞功能的影响,同时检测GSK3β及相关信号通路的变化;第三,观察GSK3β磷酸化抑制剂LiCl对ALPL基因敲减后hPDLSC与hDPSC功能的影响;第四,观察LiCl对Akp2+/-小鼠牙及牙槽骨异常的恢复作用,以此验证GSK3β及间充质干细胞在TNAP功能异常导致的牙硬组织矿化异常中的作用。第一部分ALPL基因敲除对小鼠牙硬组织的影响研究目的观察ALPL基因敲除对小鼠牙及牙槽骨的影响。研究方法(1)Micro-CT扫描野生型与Akp2+/-小鼠单侧下颌骨,观察Akp2+/-小鼠牙及牙槽骨的改变;选取第一磨牙冠部牙本质进行组织矿化密度定量分析。(2)扫描电镜观察野生型与Akp2+/-小鼠牙本质的矿化情况。研究结果(1)Micro-CT观察,比较于野生型,Akp2+/-小鼠的颌骨及牙槽骨存在明显缺损,牙齿牙髓腔扩大;(2)电镜扫描结果可见,与野生型比较,Akp2+/-小鼠牙本质矿化程度低,可见胶原纤维暴露。结论相比较于野生型小鼠,Akp2+/-小鼠存在不同程度的牙槽骨缺损以及牙本质矿化不全。第二部分ALPL基因敲减对hPDLSC与hDPSC干细胞功能的影响研究目的验证ALPL基因突变对hPDLSC和hDPSC干细胞功能的影响。研究方法(1)体外培养正常人来源hPDLSC与hDPSC,通过慢病毒转染的方法敲减hPDLSC和hDPSC中的ALPL基因;在此基础上用Western-Blot和茜素红染色法检测敲减后hPDLSC和hDPSC成骨能力的改变;(2)Western-Blot检测敲减后hPDLSC与hDPSC中的P-GSK3β表达。研究结果(1)Western-Blot结果可见,ALPL敲减后,hPDLSC与hDPSC中ALP蛋白表达量下降,其它成骨相关蛋白表达均下降;hDPSC中DSP表达下降。(2)敲减ALPL后,茜素红染色结果可见hPDLSC与hDPSC成骨能力下降。(3)敲减ALPL后,Western-Blot结果可见hPDLSC与hDPSC中P-GSK3β表达量下降。结论(1)通过慢病毒转染法可以有效地敲减hPDLSC与hDPSC中的ALPL基因,并且在敲减后,hPDLSC与hDPSC的成骨能力受到抑制;(2)在敲减ALPL后,hPDLSC与hDPSC中P-GSK3β表达下降,提示Wnt信号通路受到抑制。第三部分GSK3β抑制剂对ALPL敲减hPDLSC与hDPSC功能的影响研究目的观察LiCl对ALPL敲减hPDLSC与hDPSC成骨能力的影响,验证GSK3β在ALPL基因突变导致的干细胞功能异常中的作用。研究方法成骨诱导ALPL敲减后的hPDLSC和hDPSC,在诱导过程中加入GSK3β抑制剂LiCl;成骨诱导21d时,茜素红染色观察其成骨能力的改变。研究结果茜素红染色结果可见,在成骨诱导过程中加入LiCl后,hPDLSC与hDPSC成骨能力明显提高。结论在成骨诱导过程中通过抑制GSK3β而激活Wnt信号通路,可以使ALPL敲减hPDLSC和hDPSC的成骨能力提高,验证了ALPL基因突变是通过GSK3β影响干细胞的成骨能力。第四部分GSK3β抑制剂对于Akp2+/-小鼠牙硬组织异常的作用研究目的观察LiCl对Akp2+/-小鼠牙硬组织异常的作用研究方法对Akp2+/-小鼠注射LiCl(100mg/Kg),与Ak

关键词：低碱性磷酸酯酶症碱性磷酸酶牙周膜干细胞牙髓干细胞糖原合成激酶3β

ALPL-ATP轴调控BMMSCs外泌体影响成骨-成血管耦联的作用研究

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ALPL-ATP轴调控BMMSCs外泌体影响成骨-成血管耦联的作用研究

作者：董加一中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

【研究背景】随着口腔种植修复技术日新月异的发展,口腔种植已成为缺牙修复的首选治疗方案。然而种植成功的关键在于患者的缺牙区需具备良好的骨组织形态及充足的骨量,对于患有骨质疏松、骨软化等骨骼疾病的患者、缺牙区硬组织骨量、骨... 详细信息

【研究背景】随着口腔种植修复技术日新月异的发展,口腔种植已成为缺牙修复的首选治疗方案。然而种植成功的关键在于患者的缺牙区需具备良好的骨组织形态及充足的骨量,对于患有骨质疏松、骨软化等骨骼疾病的患者、缺牙区硬组织骨量、骨密度不良者将失去种植修复的机会。低碱性磷酸酯酶症(hypophosphatasia,HPP)患者因ALPL基因突变导致编码组织非特异性碱性磷酸酶(TNSALP)功能缺失,影响羟基磷灰石(HA)结晶形成,最终无法实现牙、骨等硬组织矿化与再矿化。如何恢复该类患者缺牙区骨量及促进骨缺损的修复再生,一直是口腔种植学与再生医学领域的研究热点。骨内新生血管对骨再生起关键作用,成熟的血管网络可以有效促进周围软硬组织修复与再生。最新研究发现,在人和鼠科动物长骨干骺端与骨膜下发现一种高表达CD31和Endomucin(EMCN)的特殊毛细血管,称其为H型微血管(CD31EMCN),这种特殊的血管类型不仅与骨相关性疾病密切相关,且在调节骨发育及维持骨骼动态平衡中具有重要作用。但在HPP疾病微环境下,骨量下降是否会诱发H型血管发生改性目前仍然缺乏认识。干细胞在21世纪生命科学时代中具有广阔应用前景。骨改建过程中,骨髓间充质干细胞(BMMSCs)通过其自我更新及多向分化的能力,实现对缺损组织的修复与再生,对骨内稳态的维持具有重要作用。本课题组前期研究发现,ALPL基因缺陷条件下导致BMMSCs胞内外ATP升高,从而下调p-AMPKα表达,导致干细胞分化谱系的改变,这与HPP的病理性骨发育异常密切相关。干细胞表现出的细胞生物学行为将直接影响机体骨改建的过程。在骨持续性改建的动态过程中,BMMSCs参与的骨形成和内皮细胞(ECs)参与的血管化之间相互耦联,且BMMSCs通过对ECs增殖、迁移和管腔形成的诱导作用促进骨内血管新生。外泌体在作为细胞间重要的交流方式,在以上过程中发挥重要作用,但ALPL基因缺失导致BMMSCs生物学行为改变,是否会通过外泌体影响ECs血管新生,目前尚未有研究所报道。本实验拟探究BMMSCs中ALPL基因通过外泌体对ECs血管新生的影响及作用,旨在进一步探索ALPL基因功能,有助于阐明牙、骨等硬组织矿化不良的机制研究,并为开发新的治疗方案以及扩大口腔种植修复适应症方面提供一定实验基础。【研究目的】1.利用Alpl模式小鼠,明确ALPL对骨改建中血管化的影响;2.明确ALPL基因通过BMMSCs调控内皮细胞迁移、成管腔能力从而影响血管化;3.阐明ALPL通过ATP调控BMMSCs分泌外泌体(分泌量及内容物)影响内皮细胞血管新生;4.探讨ALPL通过调控BMMSCs外泌体影响血管形成的具体机制【研究方法】***基因在成骨、成血管中的作用研究。选取4-6周龄雌性野生型C57/BL、Alpl基因敲除小鼠,及在野生型C57/BL小鼠系统注射ALP活性抑制剂(左旋咪唑盐酸盐)。小鼠双侧股骨进行Micro-CT扫描及三维重建,观察骨量和骨小梁排列情况,分析骨密度(Bone Mineral Density,BMD)、骨体积分数(Bone Volume/Total Volume,BV/TV)等。对小鼠股骨进行冰冻切片处理,利用免疫荧光染色(IF)标记目标抗原信号,激光共聚焦显微镜(CLSM)多层扫描重建H型血管标志性分子CD31、EMCN在干骺端处表达情况。***基因缺失对BMMSCs诱导ECs血管新生的研究。体外分别培养正常人和HPP患者来源的h BMMSCs(Nor-h BMMSCs&HPP-h BMMSCs)、野生型和Alpl小鼠来源的m BMMSCs(WT-m BMMSCs&Alplm BMMSCs),以及通过慢病毒浸染法上调、下调ALPL基因的h BMMSCs(Plenti-ALPL&Sh-ALPL h BMMSCs);通过Transwell共培养方法,检测三组BMMSCs对ECs迁移、管腔形成的诱导作用;同时使用外泌体抑制剂GW4869,检测抑制外泌体条件下三组管腔形成情况。采用超速离心法提取三组BMMSCs外泌体,通过透射电镜和Western-Blot鉴定提取的外泌体后,将三组BMMSCs分泌的外泌体加入至ECs培养基中,利用划痕实验和管腔形成实验,观察三组BMMSCs分泌的外泌体对内皮细胞血管新生的诱导作用。***对BMMSC外泌体分泌的研究。利用ELISA及Western-Blot,检测相同细胞数量时,Nor&HPP组、WT&Alpl组以及Nor&Plenti-ALPL&Sh-ALPL组外泌体分泌量及标志性分子的表达情况。因课题组前期已证明ALPL基因缺失导致胞内外ATP浓度升高从而影响BMMSCs的生物学功能,所以使用ATP水解酶(Apyrase)降低HPP组ATP浓度,补充ATP升高Nor组A

关键词：骨髓间充质干细胞外泌体碱性磷酸酶低碱性磷酸酯酶症血管形成 H型血管