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己酮可可碱对人精子功能影响的体外实验研究

己酮可可碱对人精子功能影响的体外实验研究

作者：王慕华山西医科大学

学位级别：硕士

目的:研究不同浓度下的己酮可可碱(Pentoxifylline,PF)体外对人精子活力、活率、运动功能、精子膜功能完整性、精子顶体反应、精子细胞内电压依赖性钙离子浓度的影响,探讨发生顶体反应的相关机制。方法:30名健康、具有生育能力的男性,... 详细信息

目的:研究不同浓度下的己酮可可碱(Pentoxifylline,PF)体外对人精子活力、活率、运动功能、精子膜功能完整性、精子顶体反应、精子细胞内电压依赖性钙离子浓度的影响,探讨发生顶体反应的相关机制。方法:30名健康、具有生育能力的男性,手淫法取得全部精液标本。第一部分,将终浓度为4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L的PF在体外与经上游优化处理的正常生育男性的精子分别共同孵育,同时设立正常对照组,于30和60分钟时对它们分别进行精液常规分析。第二部分,对第一部分60分钟时的各组精液分别进行低渗肿胀(HOS)试验。第三部分,正常生育男性的精子经上游优化处理后,诱导精子获能,将终浓度为4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L的PF与获能精子孵育60分钟,同时设立正常对照组,然后诱发精子发生顶体反应,用特异性荧光标记物——络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素(FITC-PSA)标记顶体,通过流式细胞仪检测顶体的完整性。第四部分,正常生育男性的精子经上游优化处理后,将终浓度为4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L的PF在体外与之分别共同孵育,同时设立正常对照组,于30分钟时用Fura-3/AM标记精子细胞内电压依赖性钙离子,用RF-540荧光分光光度计测定精子细胞内电压依赖性钙离子的荧光强度。结果:1)第一部分,与对照组相比,4mmol/L组、8mmol/L组、16mmol/L组的活力、活率均有明显差异(P＜0.05),并且曲线速度(VCL)、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、平均移动角度(MAD)、侧摆幅度(ALH)、摆动性(WOB)均有明显差异(P＜0.05);与对照组相比,4mmol/L组、8mmol/L组、16mmol/L组的鞭打频率(BCF)、直线性(LIN)和前向性(STR)无明显差异(P＞0.05)。表明随着PF浓度的升高和孵育时间的延长,精子活力、活率、精子运动能力仍能保持高活性的趋势。2)第二部分,对照组、4mmol/L组、8mmol/L组、16mmol/L组的精子g形精子百分率、尾部总肿胀率无明显差异(P＞0.05)。表明随着PF浓度的升高,PF对精子膜功能的完整性没有影响。3)第三部分,终浓度为16mmol/L组的精子,顶体标记荧光值明显高于对照组和其他实验组,差异具有显著性(P＜0.05)。对照组、4mmol/L组、8mmol/L组之间无显著性差异(P＞0.05)。表明终浓度为16mmol/L的PF能诱导精子发生顶体反应。4)第四部分,加入PF终浓度为16mmol/L组的精子,细胞内Ca荧光差值均明显高于对照组、4mmol/L组、8mmol/L组,差异具有显著性(P＜0.05)。对照组、4mmol/L组、8mmol/L组之间精子细胞内Ca荧光值依次升高,但无显著性差异。表明PF诱导精子发生顶体反应的机制与精子细胞内Ca浓度升高有关。结论:在精子的体外实验中,不同浓度的PF均可促进人精子的活力和活率,提高精子的运动功能,但是对精子膜功能的完整性没有影响;高浓度的PF能诱发精子发生顶体反应,其机制可能是促进了细胞内电压依赖性Ca内流。揭示了PF提高精子受精力的可能内在原因;为精子体外处理技术的发展提供一些实践经验;也为人工授精和体外授精技术的发展提供一定的理论依据和理论参考。

关键词：己酮可可碱精子低渗肿胀试验顶体反应钙离子

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商陆皂甙甲对大鼠的体外杀精作用

新乡医学院学报 2014年第9期31卷 688-690页

作者：易文龙郭晓轶樊舒豪谌曼荣王育斌武汉科技大学附属天佑医院儿科湖北武汉430064 武汉科技大学医学院生理学系湖北武汉430065

目的探讨商陆皂甙甲(EsA)对大鼠的体外杀精作用及其机制。方法采用手术方法采集Sprague-Dawley大鼠精子,随机分为EsA组、生理盐水组及壬苯醇醚-9(N-9)组,采用改良Sander-Cramer法,将不同浓度EsA制剂在体外与大鼠精子作用,测定EsA的杀精... 详细信息

目的探讨商陆皂甙甲(EsA)对大鼠的体外杀精作用及其机制。方法采用手术方法采集Sprague-Dawley大鼠精子,随机分为EsA组、生理盐水组及壬苯醇醚-9(N-9)组,采用改良Sander-Cramer法,将不同浓度EsA制剂在体外与大鼠精子作用,测定EsA的杀精作用及杀精最低有效浓度;精子尾低渗肿胀(HOS)试验、伊红Y(EY)染色法检测精子膜的完整性和活力,固相法检测精子顶体酶(ACE)活性。结果作用20 s,最低有效质量浓度为2.0 g·L-1的EsA对大鼠精子具有快速杀精作用;与生理盐水组比较,最低有效质量浓度(2.0 g·L-1)的EsA作用20 s后,精子尾肿胀率显著下降(P<0.05),EY染色率显著升高(P<0.05);与生理盐水组比较,EsA各浓度组ACE活性均显著下降(P<0.05),且药物浓度越大,ACE活性降低越明显,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EsA对大鼠有体外杀精作用,其机制可能与破坏精子膜和降低ACE活性有关。

关键词：商陆皂甙甲体外杀精低渗肿胀试验精子顶体酶

抗精子抗体对人精子HOS试验及膜间Ca2+内流的影响

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临床泌尿外科杂志 2020年第4期35卷 297-299,303页

作者：刘喜军李荣军王向东王璟琦徐计秀山西医科大学附属大同市第三人民医院泌尿外科山西大同037008 山西医科大学第一医院泌尿外科

目的:探讨在正常精液中加入IgG类抗精子抗体阳性精浆对人精子膜功能完整性及压力敏感性Ca2+内流的影响。方法:在门诊的不育患者中收集精浆IgG抗精子抗体阳性患者,通过离心的方法从其精液中分离出精浆,并同正常人精子孵育,与正常精浆及... 详细信息

目的:探讨在正常精液中加入IgG类抗精子抗体阳性精浆对人精子膜功能完整性及压力敏感性Ca2+内流的影响。方法:在门诊的不育患者中收集精浆IgG抗精子抗体阳性患者,通过离心的方法从其精液中分离出精浆,并同正常人精子孵育,与正常精浆及正常人精子、精子培养液及正常人精子孵育的对照组比较研究,分别对它们进行低渗肿胀(HOS)试验及测定精子细胞内钙离子浓度的变化。结果:与IgG抗精子抗体阳性精浆孵育的精子,其g形精子百分率和精子尾部总肿胀率均明显低于两个对照组,差异有统计学意义(P试验组的精子细胞内Ca2+荧光强度差值明显低于两个对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:IgG类抗精子抗体对人精子膜功能完整性及压力敏感性Ca2+内流均可造成影响。

关键词：抗精子抗体精子钙离子低渗肿胀试验

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补肾活血药对子宫内膜异位大鼠腹腔液的影响

医药论坛杂志 2007年第2期28卷 46-47页

作者：刘素玲杨敏漯河市第三人民医院妇产科漯河市462000 广州中医药大学附属骨伤科医院妇科广州市510240

目的了解不同中药对大鼠子宫内膜异位症动物模型腹腔液对精子功能的作用。方法取造模成功子宫内膜异位大鼠32只分为4组,取正常大鼠8只,分别取腹腔液,其中3组造模成功大鼠给活血化瘀、补肾活血、单纯补肾药物治疗后取腹腔液,将腹腔液与... 详细信息

目的了解不同中药对大鼠子宫内膜异位症动物模型腹腔液对精子功能的作用。方法取造模成功子宫内膜异位大鼠32只分为4组,取正常大鼠8只,分别取腹腔液,其中3组造模成功大鼠给活血化瘀、补肾活血、单纯补肾药物治疗后取腹腔液,将腹腔液与正常精液标本混合孵育后,计数其A级直线向前活动率及总活动率,置低渗液中计数其总肿胀率。结果与正常大鼠组相比,造模成功组腹腔液孵育后精子A级直线向前活动率及总活动率、总肿胀率均呈明显下降(P0.05,P>0.05,P>0.01)。结论子宫内膜异位症大鼠腹腔液对精子功能有显著影响,而补肾活血中药则有一定治疗作用。

关键词：补肾活血子宫内膜异位低渗肿胀试验精子活动率

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精子体外处理前后低渗肿胀百分率的观察

陕西医学检验 2000年第2期15卷 33-34页

作者：黄凤芬浙江省乐清市妇幼保健院检验科 325600

报告了用低渗肿胀试验观察经 percoll梯度离心和白蛋白柱处理前后的精子低渗肿胀率。结果显示 :percoll、白蛋白柱处理前精子低渗肿胀率为 73.8%± 8.0 %。处理后的精子低渗肿胀率分别为84.6%± 7.2 % ,87.7%± 8.1 %。与处理前比较差... 详细信息

报告了用低渗肿胀试验观察经 percoll梯度离心和白蛋白柱处理前后的精子低渗肿胀率。结果显示 :percoll、白蛋白柱处理前精子低渗肿胀率为 73.8%± 8.0 %。处理后的精子低渗肿胀率分别为84.6%± 7.2 % ,87.7%± 8.1 %。与处理前比较差异均非常显著。提示精液经体外处理后再行人工授精是治疗不育症的一种手段。

关键词： percoll梯度人血清白蛋白柱低渗肿胀试验精子

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其他

中国计划生育和妇产科 1995年第4期 198-200页

子宫内膜异位大鼠腹腔液对精子功能影响及补肾活血法作用的探讨

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江西医学院学报 2006年第3期46卷 30-31,34页

作者：杨敏广州中医药大学附属骨伤科医院妇科广东广州524023

目的了解大鼠子宫内膜异位症动物模型腹腔液对精子功能的影响及不同中药治疗的改善作用。方法取造模成功子宫内膜异位大鼠24只分为4组,取正常大鼠6只,分别取腹腔液,其中3组造模成功大鼠给活血化瘀、补肾活血、单纯补肾药物治疗后取腹腔... 详细信息

目的了解大鼠子宫内膜异位症动物模型腹腔液对精子功能的影响及不同中药治疗的改善作用。方法取造模成功子宫内膜异位大鼠24只分为4组,取正常大鼠6只,分别取腹腔液,其中3组造模成功大鼠给活血化瘀、补肾活血、单纯补肾药物治疗后取腹腔液,将腹腔液与正常精液标本混合孵育后,计数其A级直线向前活动率及总活动率,置低渗液中计数其总肿胀率。结果与正常大鼠组相比,造模成功组腹腔液孵育后精子A级直线向前活动率及总活动率、总肿胀率均呈明显下降(P0.05,P>0.05,P>0.05)。结论子宫内膜异位症大鼠腹腔液对精子功能有显著影响,而补肾活血中药则有一定治疗作用。

关键词：补肾活血子宫内膜异位低渗肿胀试验精子活动率

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不同获能时间对人类精子膜完整性的影响

男性学杂志 1996年第3期10卷 154-156页

作者：田佩玲文任乾杨宁林德亮广东省计划生育科学技术研究所

本研究用人精子低渗肿胀试验（ＨＯＳ－ｔｅｓｔ）分析了１２例正常育龄男子的精液标本。精子分别用常规洗涤法、上游法和加入钙离子载体（Ａ２３１８７）诱导获能等３种不同方法处理后，分别在液化后、上游１小时后、获能３小时、６小... 详细信息

本研究用人精子低渗肿胀试验（ＨＯＳ－ｔｅｓｔ）分析了１２例正常育龄男子的精液标本。精子分别用常规洗涤法、上游法和加入钙离子载体（Ａ２３１８７）诱导获能等３种不同方法处理后，分别在液化后、上游１小时后、获能３小时、６小时和２４小时后测定了精子的低渗肿胀率。结果显示经不同方法处理、在不同获能时间之后的精子，在２４小时之内其肿胀率保持在８７．８±１４．６％～７３．３±１１．９％之间。统计学分析表明各实验组肿胀率之间无明显差异。本研究提示在２４小时之内精子膜的完整性不受获能时间及不同处理方法的影响。

关键词：人类精子膜低渗肿胀试验获能

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冷冻保存对人类精子膜完整性的影响

暨南大学学报（自然科学与医学版） 1998年第S1期19卷 96-97页

作者：朱伟杰刘学高暨南大学生殖免疫研究中心