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低拷贝HBV病毒全长DNA的制备和体外复制水平的鉴定

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重庆医科大学学报 2013年第4期38卷 425-428页

作者：杜茜马其欢龚旭阳蔡雪飞重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室.重庆400016

目的:从乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)低拷贝的血清样本中提取病毒DNA并通过PCR扩增得到全长DNA片段。将全长片段经过环化处理后转染HuH7细胞,体外评价病毒的复制水平。方法:设计含有BspQⅠ酶切位点的HBV全长扩增引物和分段扩增... 详细信息

目的:从乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)低拷贝的血清样本中提取病毒DNA并通过PCR扩增得到全长DNA片段。将全长片段经过环化处理后转染HuH7细胞,体外评价病毒的复制水平。方法:设计含有BspQⅠ酶切位点的HBV全长扩增引物和分段扩增引物,选择HBV低拷贝的临床病人血清样本,经抽提纯化后的病毒DNA作为模板,用巢式PCR结合分段扩增的方法扩增得到HBV全长DNA,PCR产物经BspQⅠ酶切后自连环化,将环化的HBV DNA转染HuH 7细胞,经5 d细胞培养,提取细胞中的病毒复制中间体,通过Southern blot分析病毒复制水平。结果:通过PCR扩增得到5个HBV全长DNA,经过酶切连接全长基因后转染HuH7细胞,Southern blot检测均有复制表达。结论:本实验成功构建能够有复制表达的HBV环化全长,为研究血清中低拷贝HBV病毒的不同病人复制水平与DNA序列关系打下基础。

关键词：低拷贝乙肝病毒全长扩增闭合环状DNA

ART-PCR方法的建立及扩增低拷贝RNA的初步研究

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药物生物技术 2013年第6期20卷 475-479页

作者：李铁军周宋峰陆毅祥朱远源江苏莱芙时代生物科技有限公司百奥迈科生物技术有限公司南通大学小核酸技术与应用研究所中国药科大学

建立依赖反义RNA和核糖核酸酶T1(RNase T1)的PCR方法,称为ART-PCR,用于扩增高拷贝RNA和复杂RNA样本中的低拷贝RNA。首先,设计待检低拷贝RNA的反义RNA分子,在高拷贝和复杂RNA样本中与待检低拷贝RNA退火后用RNase T1消化,反转录后用PCR扩... 详细信息

建立依赖反义RNA和核糖核酸酶T1(RNase T1)的PCR方法,称为ART-PCR,用于扩增高拷贝RNA和复杂RNA样本中的低拷贝RNA。首先,设计待检低拷贝RNA的反义RNA分子,在高拷贝和复杂RNA样本中与待检低拷贝RNA退火后用RNase T1消化,反转录后用PCR扩增。进一步,用ARPE-19细胞中低表达基因干扰素γ(IFNG)作为实例,用ART-PCR和常规实时定量PCR(RT-qPCR)检测。结果显示,用ART-PCR可以很好地消除常规RT-qPCR中低拷贝RNA的PCR抑制效应。研究结果初步表明ART-PCR可以作为检测低拷贝RNA的理想工具,这对于RNA功能的基础研究以及基于多重PCR的临床复合病毒感染的基因诊断方法的优化、推广具有重要的参考价值。

关键词：依赖反义RNA的核糖核酸酶T1 PCR 低拷贝高拷贝基因 RNase T1 dsRNA ssRNA 病毒

巢氏PCR扩增低拷贝HBV全基因组方法的建立及应用

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现代检验医学杂志 2018年第3期33卷 44-49页

作者：张孟李倩周华君孙长贵成军戴玉柱中国人民解放军第一一七医院财经中心杭州310013 中国人民解放军第一一七医院检验科杭州310013

目的建立一种用于低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型全基因组扩增的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法及应用评价。方法通过设计和改良一组对HBV各基因型(A,B,C,D,E,F,G)DNA均具有较高扩增效率的通用巢式简并引物,采用两步法分六段(... 详细信息

目的建立一种用于低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型全基因组扩增的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法及应用评价。方法通过设计和改良一组对HBV各基因型(A,B,C,D,E,F,G)DNA均具有较高扩增效率的通用巢式简并引物,采用两步法分六段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增低拷贝HBV基因组,比较不同反应条件对于PCR扩增产物的影响(退火温度,引物浓度),建立一种适合于低拷贝HBV全基因组扩增的方法;同时采用该方法对57份低浓度HBsAg乙肝感染者(HBsAg低浓度HBsAg乙肝感染者进行扩增,其中全基因扩增49例(86.0%),各片段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增分别为:53例(93.0%),52例(91.2%),54例(94.7%),54例(94.7%),55例(96.5%)和49例(86.0%),说明该方法适用于慢性低浓度HBsAg乙肝感染者HBV DNA全基因扩增。结论该文为慢性低浓度HBsAg乙肝感染者的全基因系列分析提供了高灵敏度、高特异度的方法,可在低浓度HBsAg感染者流行病学调查中发挥重要作用,同时为巢氏PCR扩增反应体系的优化提供了参考。

关键词：乙型肝炎病毒低拷贝全基因巢式聚合酶链式反应

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充分挖掘低拷贝检材在案件侦破中的价值

海峡科学 2014年第10期 53-53,58页

作者：陈晓燕王永清蔡剑伟漳州市公安局刑侦支队

低拷贝检材常无法进行针对性提取,得到理想分型的难度较大。该文分别采用增加循环数、细胞富集、低模板试剂盒扩增等方法,提高该类检材的检出率。联合应用新技术、新方法,正确应用低拷贝检材检验结果,可提高低拷贝检材在案件侦破中的应... 详细信息

低拷贝检材常无法进行针对性提取,得到理想分型的难度较大。该文分别采用增加循环数、细胞富集、低模板试剂盒扩增等方法,提高该类检材的检出率。联合应用新技术、新方法,正确应用低拷贝检材检验结果,可提高低拷贝检材在案件侦破中的应用价值。

关键词：低拷贝检材检出率

乙型肝炎相关性肝癌患者血清低拷贝HBV DNA检测的临床分析

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中华全科医学 2016年第4期14卷 549-551页

作者：童永喜项波潘克女黄海军潘红英浙江省人民医院感染科浙江杭州310014 杭州市第六人民医院感染科浙江杭州310023 杭州市第六人民医院检验科

目的通过对乙型肝炎相关性肝癌(HCC)患者血清低拷贝HBV DNA的检测,探讨乙肝病毒低复制水平与肝癌发生、发展的相关性,明确乙型肝炎患者血清低拷贝HBV DNA检测的临床意义。方法在所有乙型肝炎相关性HCC患者中,选取85例血清HBV DNA水平持... 详细信息

目的通过对乙型肝炎相关性肝癌(HCC)患者血清低拷贝HBV DNA的检测,探讨乙肝病毒低复制水平与肝癌发生、发展的相关性,明确乙型肝炎患者血清低拷贝HBV DNA检测的临床意义。方法在所有乙型肝炎相关性HCC患者中,选取85例血清HBV DNA水平持续小于1 000 IU/ml的患者,对其病情发生、发展、演变进行系统的回顾分析,同时获得其血清,进行乙型肝炎标志物、肝功能、甲胎蛋白及低拷贝HBV DNA的检测,最后分析各项指标与低拷贝HBV DNA的相关性,分析其临床意义。结果 85例乙型肝炎相关性HCC患者当中,乙型肝炎标志物HBe Ag阳性者有15例,占17.65%,HBe Ag阴性者70例,占82.35%。肝功能指标(ALT及AST)异常者52例,占61.18%。甲胎蛋白(AFP)异常升高者65例,占76.47%。低拷贝HBV DNA水平大于20 IU/ml者72例,占84.71%。低拷贝HBV DNA水平小于20 IU/ml者13例,占15.29%。结论乙型肝炎相关性HCC与乙型肝炎病毒持续复制有关,常规的HBV DNA检测只能检测HBV DNA水平大于1 000 IU/ml的患者,乙肝病毒低复制患者往往会被忽视,导致患者不能及时抗病毒治疗而使得病情发展。因此这种检测已不能满足临床的实际要求,乙型肝炎患者低拷贝HBV DNA检测更有临床指导意义。

关键词：肝炎病毒,乙型肝细胞癌甲胎蛋白低拷贝乙型肝炎病毒-DNA

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甜菜SBPase基因的遗传转化

中国糖料 2022年第3期44卷 8-13页

作者：韩平安孙瑞芬唐宽刚常悦王良金晓蕾梁亚晖李晓东吴新荣内蒙古自治区农牧业科学院呼和浩特010031 内蒙古自治区甜菜品种遗传改良与种质创制重点实验室呼和浩特010031

利用转基因方法在甜菜中适度表达光合作用相关的关键酶(景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶,SBPase),具有提高光合效率,提高甜菜产量的潜力。本研究以甜菜叶柄为受体材料,构建携带SBPase基因的植物表达载体,通过农杆菌介导法进行遗传转化;利用RT-... 详细信息

利用转基因方法在甜菜中适度表达光合作用相关的关键酶(景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶,SBPase),具有提高光合效率,提高甜菜产量的潜力。本研究以甜菜叶柄为受体材料,构建携带SBPase基因的植物表达载体,通过农杆菌介导法进行遗传转化;利用RT-PCR技术检测转基因植株中SBPase基因的表达情况;通过微滴数字PCR技术筛选低拷贝转基因植株。在所检测的抗性植株中获得转录水平上表达的SBPase转基因甜菜植株8株,其中低拷贝株系2株,为探索甜菜产量形成机理,创制高产新种质奠定了基础。

关键词：甜菜基因景天庚酮糖-1,7-二磷酸酯酶(SBPase) 遗传转化农杆菌介导法低拷贝

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血清低病毒载量HBV-DNA乙型肝炎相关性肝细胞肝癌患者的检测分析

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当代医学 2021年第23期27卷 91-93页

作者：唐敏陈倩郭姗抚州市第一人民医院检验科江西抚州344000

目的探讨血清低病毒载量HBV-DNA与乙型肝炎相关性肝细胞肝癌的相关性。方法选取2018年1月至2019年12月本院收治的HBV-DNA水平持续1000 IU/m者,低病毒载量患者易漏诊,因此,需为乙型肝炎患者开展低拷贝HBV-DNA检测。

目的探讨血清低病毒载量HBV-DNA与乙型肝炎相关性肝细胞肝癌的相关性。方法选取2018年1月至2019年12月本院收治的HBV-DNA水平持续低拷贝HBV-DNA检测,并分析各指标与低拷贝HBV-DNA的相关性。结果12例HBeAg阳性患者中HBV-DNA水平≥50 IU/mL 11例,50例HBeAg阴性患者中HBV-DNA水平≥50 IU/mL 40例,差异具有统计学意义(P低拷贝HBV-DNA水平≥50 IU/mL 52例,低拷贝HBV-DNA水平1000 IU/m者,低病毒载量患者易漏诊,因此,需为乙型肝炎患者开展低拷贝HBV-DNA检测。

关键词：乙型肝炎病毒肝细胞肝癌乙型肝炎病毒DNA 甲胎蛋白低拷贝

Williams-Beuren综合征的发生机制和研究进展

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医学研究通讯 2005年第5期34卷 54-57页

作者：袁海昕黄尚志中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室 100005

Williams-Beuren 综合征(WBS)是由于7q11.23邻近基因杂合性丢失所致的部分单体性综合征。临床表型包括心血管疾病、特殊面容、神经行为异常和一过性婴儿期高钙血症。在新生儿中的发病率为1/7500～1/25000,多数为散发,部分为常染色体显... 详细信息

Williams-Beuren 综合征(WBS)是由于7q11.23邻近基因杂合性丢失所致的部分单体性综合征。临床表型包括心血管疾病、特殊面容、神经行为异常和一过性婴儿期高钙血症。在新生儿中的发病率为1/7500～1/25000,多数为散发,部分为常染色体显性遗传。WBS 的发生机制为染色体间或染色体内低拷贝重复序列的重排。其缺失区域包含20多个基因,其中ELN、LIMK、CYLN2和 TFII-I 等基因的功能已经明确。关于基因型和表型的关系还需要进一步研究。

关键词： ren综合征发生机制常染色体显性遗传基因杂合性丢失神经行为异常心血管疾病性综合征部分单体临床表型特殊面容高钙血症重复序列婴儿期一过性发病率新生儿低拷贝 WBS 步研究基因型

石蜡包埋组织中目的基因原位逆转录-聚合酶链反应检测

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贵州医药 2002年第3期26卷 211-212,F003页

作者：肖庆邦揭伟郭瑞珍唐文台梁群英遵义医学院病理教研室 563003

目的探讨原位逆转录 -聚合酶链反应技术 (ISRT -PCR)在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值。方法应用直接法ISRT -PCR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒 (HCV)基因组序列进行检测。结果从存档多年的福尔马林固定、... 详细信息

目的探讨原位逆转录 -聚合酶链反应技术 (ISRT -PCR)在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值。方法应用直接法ISRT -PCR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒 (HCV)基因组序列进行检测。结果从存档多年的福尔马林固定、普通制作石蜡包埋淋巴瘤组织中检测到HCVRNA序列。结论ISRT -PCR可用于福尔马林固定。

关键词：原位逆转录-聚合酶链反应石蜡包埋组织基因组序列低拷贝