检索结果-南通市图书馆

中华肿瘤防治杂志 2021年第23期28卷 1792-1797,1804页

作者：杜文倩张萌唐语彤林晓蕊潘慕垚刘宝琴中国医科大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110122 中国医科大学临床二系辽宁沈阳110122

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDnA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性n-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1... 详细信息

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDnA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性n-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDnA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-n-糖苷酶F(PnGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性n-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDnA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PnGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×10^(3),酶切处理之后其相对分子质量约为85×10^(3),符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数n-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性n-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。

关键词：前列腺特异性膜抗原 n-糖基化修饰叶酸水解酶1 位点特异性n-糖基化修饰分析前列腺癌

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