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中国生物工程杂志 2020年第6期40卷 84-92页

作者：樊斌陈欢宋婉莹陈光王刚吉林农业大学生命科学学院长春130118 秸秆生物学与利用教育部重点实验室长春130118 中粮集团吉林中粮生化有限公司长春130033

乳酸菌是一类革兰氏阳性、不产芽孢、兼性厌氧、发酵多种碳源产乳酸的重要工业微生物之一,广泛应用于食品、医药及化学品的生产当中。随着乳酸菌工业化应用范畴的不断拓展,乳酸菌生理生化特性、酸耐受特性,代谢途径及产酸调控机理的研... 详细信息

乳酸菌是一类革兰氏阳性、不产芽孢、兼性厌氧、发酵多种碳源产乳酸的重要工业微生物之一,广泛应用于食品、医药及化学品的生产当中。随着乳酸菌工业化应用范畴的不断拓展,乳酸菌生理生化特性、酸耐受特性,代谢途径及产酸调控机理的研究受到广泛关注。因此,建立稳定、高效的乳酸菌基因编辑方法,借助基因编辑技术来解析代谢关键基因及基因网络的功能,调控代谢途径,十分必要。对乳酸菌基因编辑技术的研究进展做一综述,并对乳酸菌基因编辑技术的未来研究方向进行展望。

关键词：乳酸菌基因编辑同源重组位点特异线性DNA CRISPR

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基因重组技术在猪伪狂犬病毒基因工程疫苗中的研究进展

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广东农业科学 2021年第5期48卷 124-131页

作者：柯海意王帅徐民生蔡汝健勾红潮臧莹安李春玲简运华仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州510305 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 茂名市动物疫病控制中心广东茂名525000 广东广垦畜牧集团股份有限公司广东广州510612

猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PR... 详细信息

猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PRV关键毒力基因进行改造,敲除毒力基因或插入免疫增强基因,是降低PRV毒力或提高病毒免疫保护效果的有效方法之一,也是研制安全高效PRV基因工程疫苗的重要手段。从基因同源重组、Cre/lox P位点特异性重组、细菌人工染色体和CRISPR基因编辑等不同基因重组技术应用方面对猪PRV基因工程疫苗的研制进行综述,为PRV重组疫苗的进一步深入研究提供参考。

关键词：猪伪狂犬病毒基因工程疫苗基因编辑同源重组位点特异 CRISPR

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重组人干扰素的基因表达以及PEG修饰

重组人干扰素的基因表达以及PEG修饰

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作者：袁永天津大学

学位级别：硕士

重组干扰素-α是一种具有抗病毒、抗繁殖和免疫调节等特性的药物蛋白,多次用于临床治疗疾病和癌症。然而,它在人体内半衰期非常短,使它不能大规模应用于临床。因此,本文通过聚乙二醇与蛋白质的化学耦合来延长干扰素-α的半衰期。利用基... 详细信息

重组干扰素-α是一种具有抗病毒、抗繁殖和免疫调节等特性的药物蛋白,多次用于临床治疗疾病和癌症。然而,它在人体内半衰期非常短,使它不能大规模应用于临床。因此,本文通过聚乙二醇与蛋白质的化学耦合来延长干扰素-α的半衰期。利用基因定点突变在蛋白质非活性位点引进半胱氨酸残基,通过这个半胱氨酸残基将蛋白质和聚乙二醇（末端含有与半胱氨酸反应的活性基团）进行共价连接,这种方法的优点是能产生高生物活性,单一位点耦合物。由Bolder Biotechnology, nc生物技术公司构建的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110,IPTG诱导后经SDS-PAGE分析,表达产物的分子量为19KD左右,并且蛋白以不溶性的包涵体形式存在。Western-blot印迹分析证实表达产物具有良好的免疫学活性。同时优化了蛋白表达条件,结果为:温度37℃,环境pH7.0,IPTG浓度0.5mM,诱导时间16小时。包涵体蛋白经过盐酸胍变性后稀释复性,然后利用阳离子交换色谱层析（IEC）分离得到目标蛋白,其纯度达到98%以上。同时,也对层析条件进行了优化,并最终从1L细菌培养基中得到22mg目的蛋白。最后干扰素-α与马来酰亚胺-PEG反应得到位点特异、单一的PEG化蛋白。

关键词：干扰素聚乙二醇基因定点突变位点特异

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新一代长效干扰素的研发—干扰素-α的表达纯化及活性测定

新一代长效干扰素的研发—干扰素-α的表达纯化及活性测定

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作者：张文静天津大学

学位级别：硕士

重组干扰素-α是一种具有抗病毒、抗细胞增殖和免疫调节等特性的药物蛋白,已经被证明并应用于临床治疗多种病毒性疾病和癌症。然而,它在人体内半衰期非常短,给病人用药带来诸多不便。通过聚乙二醇修饰可延长干扰素-α的半衰期。本文中... 详细信息

重组干扰素-α是一种具有抗病毒、抗细胞增殖和免疫调节等特性的药物蛋白,已经被证明并应用于临床治疗多种病毒性疾病和癌症。然而,它在人体内半衰期非常短,给病人用药带来诸多不便。通过聚乙二醇修饰可延长干扰素-α的半衰期。本文中生产的干扰素,利用基因定点突变的方法在蛋白质非活性位点插入一个游离的半胱氨酸残基,通过这个半胱氨酸残基将蛋白质和聚乙二醇（末端含有与半胱氨酸反应的活性基团）进行共价连接。这种方法的优点是能产生具有高生物活性、单一位点修饰的长效干扰素。由美国某生物技术公司提供的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110,IPTG诱导后干扰素以不溶的包涵体形式表达。实验探索和优化了蛋白表达条件和包涵体蛋白体外稀释复性的条件,以提高蛋白产率。采用阳离子交换层析（IEC）和疏水相互作用层析（HIC）的方法进行目的蛋白的纯化,辅之以非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯化产物。实验重点优化了疏水层析的纯化条件,使疏水层析两个主峰分离度达到1.0以上。最后利用Daudi细胞株对这两个峰蛋白进行活性测定,以选择高活性的纯化产品进行后续的聚乙二醇修饰实验。

关键词：干扰素聚乙二醇位点特异 HIC 生物活性

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蛋白质-聚氨基酸偶联物的合成与生物应用

蛋白质-聚氨基酸偶联物的合成与生物应用

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中国化学会2017全国高分子学术论文报告会

作者：吕华北京大学化学与分子工程学院软物质中心

蛋白质-高分子偶联物是潜在的长循环蛋白质药物。传统的用于蛋白偶联的高分子如PEG虽然取得了可观的临床成功,但是因其不可降解以及缺乏可修饰官能团等性质严重限制了其广泛应用。而聚氨基酸（也称聚多肽,PAA）具备可降解、生物相容性... 详细信息

蛋白质-高分子偶联物是潜在的长循环蛋白质药物。传统的用于蛋白偶联的高分子如PEG虽然取得了可观的临床成功,但是因其不可降解以及缺乏可修饰官能团等性质严重限制了其广泛应用。而聚氨基酸（也称聚多肽,PAA）具备可降解、生物相容性好、含有丰富的侧链官能团等特点,成为一类潜在的PEG替代物用于蛋白药物的修饰。我们开发了一种方法能够在聚氨基酸链增长的过程中原位引入可修饰活性基团,得到两端分别含有不同生物正交官能团的异遥爪聚合物（heterotelechelic polymer）,从而极大地简化了后续的蛋白质-聚氨基酸偶联步骤,得到了一批位点特异、且具有不同拓扑结构的绿色荧光蛋白-聚氨基酸偶联物,包括头-尾相接的环形偶联物。不同拓扑结构的蛋白质-聚氨基酸偶联物的简洁制备在发展制备蛋白质-高分子偶联物的化学方法的同时,也显示了其在长循环蛋白药物方面的巨大潜力。

关键词：聚氨基酸位点特异蛋白质-高分子偶联干扰素

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从聚多肽高分子到抗体偶联

从聚多肽高分子到抗体偶联

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中国化学会第29届学术年会

作者：吕华北京大学化学与分子工程学院

在这个报告中,我将关注生物大分子与合成高分子的合成和应用。在报告的前半部分我主要讨论NCA的可控聚合用于制备分子量可控的聚多肽高分子,发展具有超稳螺旋结构的例子聚多肽,以及它们的生物应用。在报告的后半部分,我将讨论利用基因... 详细信息

在这个报告中,我将关注生物大分子与合成高分子的合成和应用。在报告的前半部分我主要讨论NCA的可控聚合用于制备分子量可控的聚多肽高分子,发展具有超稳螺旋结构的例子聚多肽,以及它们的生物应用。在报告的后半部分,我将讨论利用基因导入非天然氨基酸来实现位点特异的抗体偶联用于靶向的癌症治疗。比如:合成抗体-高分子偶联物用于癌细胞选择性的siRNA传递;合成双特异抗体激活T细胞用于急性髓细胞白血病的免疫治疗。

关键词： NCA可控聚合聚多肽位点特异抗体免疫疗法

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