检索结果-南通市图书馆

作者：李月大连海洋大学

学位级别：硕士

四氢嘧啶（Ectoine）作为存在于大多数嗜盐微生物体内的一种相容性溶质,目前广泛应用在生物保护、医学制药、化妆品行业等多个领域。多年来人们对四氢嘧啶的研究一直聚焦在野生菌株的筛选和工程菌株的构建,而对于下游分离纯化工艺的探... 详细信息

四氢嘧啶（Ectoine）作为存在于大多数嗜盐微生物体内的一种相容性溶质,目前广泛应用在生物保护、医学制药、化妆品行业等多个领域。多年来人们对四氢嘧啶的研究一直聚焦在野生菌株的筛选和工程菌株的构建,而对于下游分离纯化工艺的探索和生物活性的研究较少。本论文对四氢嘧啶的液相色谱分析方法、发酵条件优化、提取方法和生物活性进行了研究,研究内容及结果如下:论文首先建立了四氢嘧啶的反相离子对色谱分析方法,通过单因素法考察了色谱条件,确定最终分析条件为:固定相C18色谱柱,进样量10.0μL,流速0.8 m L/min,柱温30.0℃,流动相:A—50%甲醇溶液;B—20 m M KHPO缓冲液（p H3.0）,戊烷磺酸钠浓度7.0m M,A/B=5/95（v/v）,检测波长为206 nm。在该条件下的检测结果显示,在0.05～5.0μg/m L范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为Y=16.2254X+0.5336,相关系数R为0.99976,最低检出限为0.023μg/m L,RSD为1.66%。本法快捷准确,适用于四氢嘧啶的分析测定。对Halomonas elongata DSM2581（*** DSM2581）产四氢嘧啶的发酵条件进行优化。首先在摇瓶发酵中通过单因素实验确定了最佳发酵培养温度28.0℃,酵母浸粉添加量为10.0 g/L,Na Cl添加量为60.0 g/L,蛋白胨添加量为5.0 g/L,葡萄糖添加量为1.0 g/L。在此基础上,设计四因素三水平正交试验,最终得到最佳培养条件为:发酵温度为30.0℃,酵母浸粉添加量为10.0 g/L,Na Cl添加量为60.0 g/L,蛋白胨添加量为10.0 g/L,葡萄糖添加量为1.0 g/L,此条件下四氢嘧啶产量为0.83 g/L,与优化之前相比提高了53.7%。以*** DSM2581发酵液为原料,采用有机溶剂萃取法和超声破碎法结合的方式,对胞内四氢嘧啶进行萃取,通过优化提取溶剂乙醇的用量和浓度以及超声破碎时间,利用均匀设计试验进行回归分析,得到的优化结果为:当破碎时间为5.0 min,乙醇浓度为100%,添加乙醇体积为10.0 m L时提取液中四氢嘧啶含量为0.64 g/L;当破碎时间为20.0min,乙醇浓度为100%,乙醇体积为50.0 m L时提取液中四氢嘧啶纯度为90.0%在活性评价中,分别对四氢嘧啶的自由基清除活性、抑菌活性、血凝活性和ACE酶抑制活性进行研究。结果显示,四氢嘧啶具有一定的自由基清除能力,当浓度为500 mg/L时,90.24%纯度的四氢嘧啶DPPH自由基清除率达到73.79%;四氢嘧啶同样显示出了对ACE酶的抑制活性,浓度500 mg/L的纯度69.46%的四氢嘧啶样品ACE酶抑制率达到54.56%;在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈实验中,四氢嘧啶没有表现出抑菌效果;四氢嘧啶对绵羊血细胞不具有凝血活性。综上,本论文完成了对四氢嘧啶的液相色谱分析方法建立、发酵条件优化、提取方法建立和生物活性评价,可为四氢嘧啶投入大规模商业化生产提供一定参考依据。

关键词：四氢嘧啶反相离子对色谱伸长盐单胞菌发酵条件优化

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极端嗜盐菌Halomonas elogata的分离鉴定及其降解偶氮染料活性兰BRF的条件优化研究

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环境科学学报 2012年第9期32卷 2091-2096页

作者：韦娜张前前杜宗军张栋梅中国海洋大学化学化工学院青岛266100 中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室青岛266100 山东大学威海分校海洋学院威海264209

从新疆地区土壤中经驯化、分离纯化得到一株极端嗜盐菌,并对其形态特征、生理生化特性及16S rDNA同源性进行了检索比较,鉴定该菌株为伸长盐单胞菌(Halomonas elogata);其次,考察了不同因素对菌株降解偶氮染料--活性兰BRF的影响,比较了... 详细信息

从新疆地区土壤中经驯化、分离纯化得到一株极端嗜盐菌,并对其形态特征、生理生化特性及16S rDNA同源性进行了检索比较,鉴定该菌株为伸长盐单胞菌(Halomonas elogata);其次,考察了不同因素对菌株降解偶氮染料--活性兰BRF的影响,比较了不同盐度条件下的降解率,并在30℃、5%盐度生长条件下采用单因素实验考察了该菌接菌量、染料初始浓度、初始pH等因素对活性兰BRF72h降解率的影响,采用正交试验L9(33)获得适宜的降解条件;最后,通过紫外-可见吸收光谱分析了降解产物.结果表明,该菌株耐盐范围为0～32%,最适生长盐度为5%～20%;在盐度为3%～25%条件下该菌株对活性兰BRF的降解率随着盐度的升高先升后降,5%盐度下的降解效果最佳;在30℃、5%盐度下适宜降解条件为:染料浓度100mg·L-1,pH=7,接菌量5%,72h的降解率为88.62%.紫外-可见光谱结果显示,降解产物的光谱与活性兰BRF的明显不同,可见光区的吸收峰消失,正己烷萃取液无紫外吸收,二氯甲烷萃取液出现两个紫外吸收峰,推测为芳胺类及杂环类等极性化合物;质谱分析证实,降解产物合苯甲基二胺、2,6-氨基苯酚等极性化合物.

关键词：伸长盐单胞菌偶氮染料降解脱色

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嗜盐菌的分离鉴定及其应用研究

嗜盐菌的分离鉴定及其应用研究

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作者：韦娜中国海洋大学

学位级别：硕士

中度嗜盐菌有广泛的耐盐性，用途较广。近年来，中度嗜盐菌在环境生物治理、生产相容性溶质以及嗜盐菌与耐盐植物协同修复盐碱土壤的研究日益受到关注。本文从不同盐碱土壤中分离、纯化了8种微生物;针对嗜盐菌伸长盐单胞菌(Halmonaselog... 详细信息

中度嗜盐菌有广泛的耐盐性，用途较广。近年来，中度嗜盐菌在环境生物治理、生产相容性溶质以及嗜盐菌与耐盐植物协同修复盐碱土壤的研究日益受到关注。本文从不同盐碱土壤中分离、纯化了8种微生物;针对嗜盐菌伸长盐单胞菌(Halmonaselogata)，研究了其降解偶氮染料活性兰BRF的优化条件、考察了影响其分泌四氢嘧啶(Ectoine)的因素;利用得到的4种微生物制成复合菌肥，初步试验了微生物复合菌肥与碱蓬协同修复盐碱土壤的效果，主要研究成果如下： (1)微生物的分离纯化及鉴定。从青岛王哥庄、青岛盐场、东营榆林和新疆盐土分离得到8种微生物，经SEM分析，4种为细菌，2种为放线菌，2种为真菌。其中，细菌N1、N2、N3在小于10%NaCl培养基中均可以生长，为耐盐的革兰氏阴性球菌;细菌N4耐盐范围较广，可以在02%含盐量的培养基上生长，最适生长含盐量为50%，为嗜盐菌，通过形态特征、生理生化及16s rDNA序列分析鉴定为伸长盐单胞菌(H. elogata)。 (2)伸长盐单胞菌(H. elogata)对偶氮染料活性兰BRF的降解作用研究。比较了不同含盐量条件下的降解率，在30℃、5%含盐量生长条件下采用单因素实验考察了该菌接菌量、染料初始浓度、初始pH等因素对72h降解率的影响，采用正交试验L9(33)获得适宜的降解条件。实验结果表明，在含盐量为35%条件下该菌株对活性兰BRF的降解率随着含盐量的升高先升后降，5%含盐量下的降解效果最佳;在30℃、5%含盐量下适宜降解条件为：染料浓度100mg L，pH=7，接菌量5%，72h的降解率为88.62%。紫外-可见光谱结果显示降解产物的光谱与活性兰BRF的明显不同，可见光区的吸收峰消失;降解产物的正己烷萃取液无紫外吸收，二氯甲烷萃取液在紫外光区出现两个紫外吸收峰，结合质谱结果，得到降解产物为苯甲基二胺，2,6-二氨基苯酚等极性化合物。 (3)伸长盐单胞菌(H. elogata)合成四氢嘧啶的影响因素研究。当存在外界渗透压冲击时，伸长盐单胞菌(H. elogata)能够自身合成胞内相容性溶质四氢嘧啶应对其变化。考察了含盐量、谷氨酸单钠浓度、氮源浓度等因素对四氢嘧啶合成量的影响，结果表明：含盐量的影响最大，且含盐量、谷氨酸单钠浓度、氮源浓度三个因素之间的相互作用较强;在含盐量为5%，氮源含量为0.5%，谷氨酸单钠为6%时，实验得到四氢嘧啶的最大合成量为0.447g L。 (4)复合菌肥与碱蓬协同修复盐碱土壤的初步研究。复合菌肥由四种细菌与草炭土组成，其中四种细菌N1、N2、N3、N4体积比为1:1:1:1。室内实验表明，碱蓬对增加盐碱土样的根际微生物具有促进作用;菌肥与碱蓬共同作用的土样，碱解氮、速效钾、速效磷均有增加的趋势。

关键词：伸长盐单胞菌偶氮染料生物降解四氢嘧啶碱蓬

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