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伴放线放线杆菌菌落生长形态变化的观察

中华口腔医学杂志 2003年第1期38卷 52-55页

作者：王者玲杨圣辉李金路 Nobuko Maeda Tomoko Ohshima Ayako Takao 首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所 100050 日本鹤见大学齿学部细菌室

目的　观察伴放线放线杆菌 (Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa)从粗糙型到光滑型的转变过程 ,识别Aa在实验室传代过程中出现的不同生长形态。方法　从牙周炎患者龈下菌斑中分离出的原代菌株 8株 ,应用固体及液体培养基连续传代 ... 详细信息

目的　观察伴放线放线杆菌 (Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa)从粗糙型到光滑型的转变过程 ,识别Aa在实验室传代过程中出现的不同生长形态。方法　从牙周炎患者龈下菌斑中分离出的原代菌株 8株 ,应用固体及液体培养基连续传代 ,液体培养每次传代的同时接种固体培养基观察相应的菌落形态。结果　液体培养获得 3株光滑型转变株。菌落的变化从粘附的小菌落到沉淀的大菌落到完全的均匀生长 ,转化过程大约需要 7～ 8代。在这一过程中相应传至固体培养基上生长的Aa从粘附的半透明的小菌落变大、不透明并失去粘附的特性 ,又随着边缘的扩散变为扁平 ,透明度也增加 ;与此同时内部的星形结构逐渐变简单、变小 ,最后消失。固体培养未获得典型的转变株。结论　Aa从粗糙型到光滑型的转变是一个菌落湿度逐渐增加 ,体积逐渐增大 ,并逐渐失去内部结构的过程。这一过程至少可以看到半透明突起的粗糙型、不透明突起的光滑型和近乎透明的扁平光滑型

关键词：伴放线放线杆菌菌落生长形态牙周炎牙菌斑

伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素的细胞毒性研究

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牙体牙髓牙周病学杂志 2011年第4期21卷 181-186,199页

作者：段君兰李璐徐艳杨迷芳南京医科大学口腔医学研究所南京医科大学附属口腔医院牙周科江苏南京210029

目的:体外诱导表达伴放线放线杆菌(Aqqregatibacter actinomycetemcomitans,Aa)细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin,CDT),观察其对中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和人宫颈癌上皮细胞(HeLa cell)的毒性作用。方法:诱导重组蛋白Aa CdtA、CdtB、CdtC的体外表达,采用镍亲和层析柱法纯化目的蛋白,体外重构Aa CDT全毒素。通过体外酶活性实验检测重组蛋白CdtB的生物学活性,并通过细胞克隆形成实验(Colony-forming experiment)及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphe nyltetrazolium bromide,MTT]比色法进一步观察CDT对CHO细胞和HeLa细胞的毒性作用。结果:由重组蛋白Aa CdtA、CdtB、CdtC体外重构获得的Aa CDT全毒素不仅抑制CHO细胞增殖,导致CHO细胞克隆形成单位(Colony-Forming Unit,CFU)数目减少甚至消失。也可抑制He-La细胞增殖并引起包括细胞体积增大及细胞核增大增多的细胞形态学改变,并且此增殖抑制作用呈浓度依赖性。结论:体外成功构建了具有生物学活性的Aa CDT全毒素,且Aa CDT毒性发挥需要三个亚基CdtA、CdtB、CdtC同时存在并构成三聚体。

关键词：伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素中国仓鼠卵巢细胞 HeLa细胞

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伴放线放线杆菌与致龋菌生长关系的体外研究

上海口腔医学 2008年第5期17卷 515-519页

作者：韩耀伦郝玉庆张朝良陆峻君口腔疾病研究国家重点实验室(四川大学) 四川成都610041

目的:观察伴放线放线杆菌(***)与4种致龋菌,即变异链球菌(***)、嗜酸乳杆菌(***)、内氏放线菌(***)、粘性放线菌(***)在体外共培养时相互间的生长抑制作用。方法:改良琼脂扩散法和双菌种液体培养观察***与***、***、***、***生长的相互... 详细信息

目的:观察伴放线放线杆菌(***)与4种致龋菌,即变异链球菌(***)、嗜酸乳杆菌(***)、内氏放线菌(***)、粘性放线菌(***)在体外共培养时相互间的生长抑制作用。方法:改良琼脂扩散法和双菌种液体培养观察***与***、***、***、***生长的相互关系;扫描电镜及菌落计数观察双菌种生物膜形态和细菌比例的差异。实验数据用SPSS10.0软件包进行两样本均数的t检验。结果:琼脂扩散法抑菌实验表明,***对***、***、***、***的生长无抑制作用,***、***、***、***可抑制***的生长。在双菌种液体培养中,***所占比例随时间逐渐下降,差异具有显著性(P<0.05);***培养12h后,所占比例呈下降趋势,24h在***和***组中的比例下降为0。生物膜的观察表明,单菌种***成块状散在黏附,无完整生物膜形成,4种致龋菌在48h均形成结构完整的生物膜,具有三维立体结构。与单菌种相比,加入***后,致龋菌的生物膜形态未发生明显改变。更换培养液后,***在混合菌种生物膜中的比例仍随时间延长下降,72h降低到最低点,各时间点的差异具有显著性(P<0.05)。结论:体外培养4种致龋菌可抑制***的生长。

关键词：伴放线放线杆菌牙周病致龋菌龋病抑制

伴放线放线杆菌表面相关物质对人牙周膜成纤维细胞在牙根磨片定向排列的影响

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牙体牙髓牙周病学杂志 2009年第11期19卷 624-626,631页

作者：张亚庆肖明振赵守亮第四军医大学口腔医学院陕西西安710032 同济大学口腔医学院上海200011

目的:观察Aa表面相关物质对人牙周膜成纤维细胞在牙根磨片定向排列的影响。方法:制备150μm薄牙根磨片,接种人牙周膜成纤维细胞与含Aa表面相关物质共同孵育,观察细胞定向排列的变化。结果:对照组细胞定向良好,72h内始终以根片为中心呈... 详细信息

目的:观察Aa表面相关物质对人牙周膜成纤维细胞在牙根磨片定向排列的影响。方法:制备150μm薄牙根磨片,接种人牙周膜成纤维细胞与含Aa表面相关物质共同孵育,观察细胞定向排列的变化。结果:对照组细胞定向良好,72h内始终以根片为中心呈放射状生长,实验组随时间变化细胞数量减少,排列方向紊乱,由有序变为无序。结论:此物质可改变培养的人牙周膜成纤维细胞对牙根磨片的排列方向。

关键词：伴放线放线杆菌牙周病附着

伴放线放线杆菌cdtC基因的克隆及其原核表达载体pET15b-cdtC的构建

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口腔医学研究 2010年第2期26卷 153-156页

作者：王晓茜李璐徐艳南京医科大学口腔医学研究所江苏南京210029 南京医科大学附属口腔医院牙周科

目的:本实验设计克隆Aa CdtC亚基蛋白的编码基因cdtC并构建其原核表达载体pET 15b-cdtC,为研究CdtC亚基对CDT全毒素功能的分子机制奠定基础。方法:厌氧培养Aa ATCC 29523,提取Aa基因组DNA,PCR反应扩增cdtC基因片段。将此片段克隆入pMD 1... 详细信息

目的:本实验设计克隆Aa CdtC亚基蛋白的编码基因cdtC并构建其原核表达载体pET 15b-cdtC,为研究CdtC亚基对CDT全毒素功能的分子机制奠定基础。方法:厌氧培养Aa ATCC 29523,提取Aa基因组DNA,PCR反应扩增cdtC基因片段。将此片段克隆入pMD 19-T Vector,经限制性内切酶BamHI和Xho I酶切得到粘性末端cdtC片段,克隆入原核表达载体pET 15b中。结果:产物经PCR初步鉴定后进行DNA序列分析,测序结果与Genbank公布序列一致性达100%。结论:本实验成功克隆了cdtC基因,并成功构建了其原核表达载体pET15b-cdtC。为深入研究CdtC亚基以及CDT全毒素分子作用机制奠定基础。

关键词：伴放线放线杆菌基因克隆 cdtC 原核表达载体

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伴放线放线杆菌血清型分析

现代口腔医学杂志 2007年第3期21卷 271-274,277页

作者：刘冬宇王者玲王明荣韩亚玲杨圣辉首都医科大学附属北京安贞医院口腔科北京100029 首都医科大学附属北京口腔医院中国医学科学院肿瘤研究所

目的PCR法检测伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)临床分离菌株血清型,分析其与flp-1基因型的关系。方法用血清型特异性引物,通过普通PCR和多重PCR的方法对60株Aa临床分离菌株的血清型进行鉴定,并分析其与flp-1... 详细信息

目的PCR法检测伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)临床分离菌株血清型,分析其与flp-1基因型的关系。方法用血清型特异性引物,通过普通PCR和多重PCR的方法对60株Aa临床分离菌株的血清型进行鉴定,并分析其与flp-1基因型的关系。结果60株Aa临床分离菌株中血清型c型63.33%,e型23.33%,b型6.67%,a,f型各占3.33%,未检测到d型菌株;在24名被检测者中,15名检测到c型Aa菌株,3名检测到b型菌株,各有2名分别检测到a、e、f型菌株。flp-1基因型Ⅰ型菌株的血清型均为a型,40株Ⅱ型菌株中38株为c型,Ⅳ型菌株均为b型,11株Ⅴ型菌株中9株为e型,Ⅵ型菌株均为e型。结论Aa血清型分布以c型为主,flp-1基因型与菌株血清型存在一定对应关系。

关键词：伴放线放线杆菌血清型基因

伴放线放线杆菌对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

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实用医学杂志 2016年第17期32卷 2813-2816页

作者：于丽娜张文轩于洋秦文光罗刚广州医科大学附属口腔医院广州口腔病研究所口腔医学重点实验室广州市510140

目的:研究伴放线放线杆菌对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用细胞计数法分析伴放线放线杆菌对干细胞增殖的影响。应用免疫细胞化学法检测干细胞表面标记物和骨桥蛋白的表达,RT-PCR法检测C-myc、Klf4、Col1和Runx2 mRN... 详细信息

目的:研究伴放线放线杆菌对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用细胞计数法分析伴放线放线杆菌对干细胞增殖的影响。应用免疫细胞化学法检测干细胞表面标记物和骨桥蛋白的表达,RT-PCR法检测C-myc、Klf4、Col1和Runx2 mRNA的表达,利用试剂盒检测干细胞碱性磷酸酶的变化,分析伴放线放线杆菌对干细胞干性和成骨分化的影响。结果:伴放线放线杆菌与干细胞按照1克隆:1细胞比例共培养后,细胞增殖明显增加;两者共培养后,干细胞CD44、CD166和骨桥蛋白均呈阳性表达,C-myc、Klf4、Runx2和Col1 mRNA表达明显增加,碱性磷酸酶活性仍较强。结论 :伴放线放线杆菌在体外促进人骨髓间充质干细胞增殖,增强干细胞干性,但却不影响干细胞的成骨分化潜能。

关键词：伴放线放线杆菌人骨髓间充质干细胞细胞增殖干性成骨分化

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伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素研究进展

牙体牙髓牙周病学杂志 2014年第1期24卷 48-51,41页

作者：段君兰徐艳南京医科大学口腔医学研究所江苏南京210029 南京医科大学附属口腔医院牙周科江苏南京210029

细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin,CDT)是近年来新发现的一种伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)的毒力因子(Aa CDT),研究发现该毒力因子在Aa的牙周致病机制中发挥着重要的作用。本文就Aa CDT的... 详细信息

细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin,CDT)是近年来新发现的一种伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)的毒力因子(Aa CDT),研究发现该毒力因子在Aa的牙周致病机制中发挥着重要的作用。本文就Aa CDT的结构和功能、作用机制及致病机制等方面的研究进展作一综述,以期进一步了解Aa的致病机理。

关键词：伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素

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伴放线放线杆菌侵入人颊黏膜上皮细胞的研究

大连医科大学学报 2008年第1期30卷 18-21页

作者：邹博潘亚萍李琛大连市口腔医院辽宁大连116021 中国医科大学附属口腔医院牙周科辽宁沈阳110002

[目的]探讨伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans,A.a）与人口腔颊黏膜上皮细胞之间的关系,加深对A.a侵入颊黏膜上皮细胞能力的了解。[方法]运用荧光原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜对12例侵袭性牙周炎患者（AgP）... 详细信息

[目的]探讨伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans,A.a）与人口腔颊黏膜上皮细胞之间的关系,加深对A.a侵入颊黏膜上皮细胞能力的了解。[方法]运用荧光原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜对12例侵袭性牙周炎患者（AgP）、30例慢性牙周炎患者（CP）和12例牙周健康者颊黏膜上皮细胞中的细菌进行定位及半定量。[结果]受检者口腔颊黏膜细胞内均检测出细菌。分别有11名AgP患者、27名CP患者和1名牙周健康者上皮细胞内检测出A.a;颊黏膜上皮细胞内A.a占全细菌相对比例为60%-100%处比较时,AgP组与CP组之间的差异具有显著性意义（P〈0.01）。[结论]A.a能够黏附和侵袭口腔颊黏膜上皮细胞。

关键词：伴放线放线杆菌侵袭性牙周炎颊黏膜荧光原位杂交激光共聚焦显微镜