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PCR快速鉴定皮肤癣菌病

PCR快速鉴定皮肤癣菌病

作者：谈燕第二军医大学

学位级别：硕士

研究目的目前实验室常用的皮肤癣菌病的诊断方法为镜检和培养，该方法对操作人员的专业性要求较高，而且培养耗时较长，在皮肤癣菌病的快速鉴定方面，虽然国内已有相关的分子研究报导，但都难以应用于临床。本研究通过对皮肤癣菌菌株... 详细信息

研究目的目前实验室常用的皮肤癣菌病的诊断方法为镜检和培养，该方法对操作人员的专业性要求较高，而且培养耗时较长，在皮肤癣菌病的快速鉴定方面，虽然国内已有相关的分子研究报导，但都难以应用于临床。本研究通过对皮肤癣菌菌株以及临床诊断为皮肤癣菌病患者的皮屑标本进行研究，将PCR方法与传统诊断方法的诊断结果进行统计学对比，探索临床皮肤癣菌病的快速简便特异的新型诊断方法。研究方法第一部分使用65株皮肤癣菌临床株以及50株非皮肤癣菌临床株和2例人DNA用于PCR体系的优化及CHS1(Chitin synthase1)引物的评估。采用1步法处理皮肤癣菌及非皮肤癣菌菌株获得菌株DNA，然后用皮肤癣菌特异性引物CHS1(panDerm1:5’G A A G A A G A T T G T C G T T T G C A T C G T C T C3’,panDerm2:5’C T C GAG G T C AAAAG C AC G C C AGAG3’)对获得的DNA产物进行PCR扩增。皮肤癣菌通用引物的敏感性测定：将获得的菌株DNA以及人DNA进行PCR扩增后跑电泳，观察是否出现特定大小的阳性条带。 PCR反应体系的敏感性测定：用超微量分光光度计测量皮肤癣菌菌液的DNA浓度，再将皮肤癣菌菌液的DNA进行10倍连续稀释，获得不同浓度的皮肤癣菌菌液，随后进行PCR扩增，记录特定大小的阳性条带出现时的最小的皮肤癣菌DNA浓度值，PCR重复3次。第二部分，将临床收集的119例皮屑标本，均匀分成三份，分别进行镜检、培养和PCR鉴定。采用Brillowska-Dabrowsk的2步提取法从临床标本中快速提取皮肤癣菌DNA,对临床标本的DNA产物进行PCR扩增时，为了防止体系中PCR抑制物造成的假阴性结果，设计了IC(Internal control内部对照)，内部对照为大肠杆菌质粒，该质粒可与皮肤癣菌CHS1特异性引物反应，产生510bp的内部对照条带。我们设计并合成了特异性引物，其序列为For:5-G AAGAAGAT T G T C G T T T G C AT C GT C T C AG G G T T T GAT T C T G G C T C AG-3，Rev:5-C T C GAG G T C AAAA G C A C G C C AG A G G TAT TA C C G C G G C G G C T G G-3，该引物能与大肠杆菌DNA反应，生成510bp片段，该片段被插入大肠杆菌质粒，合成本实验所需的质粒。根据电泳结果判断是否为皮肤癣菌感染，若电泳结果出现366bp的条带，则为皮肤癣菌感染，若未出现此特异性条带且出现了510bp的内部对照条带，则能判断为非皮肤癣菌感染，若未出现此特异性条带且未出现510bp的内部对照条带，则为假阴性结果。最后将临床标本的PCR结果与传统诊断方法进行一致性比较。结果第一部分：所有皮肤癣菌菌株经PCR扩增后均出现366bp的阳性条带，非皮肤癣菌菌株及人DNA经PCR扩增后均未出现任何条带。将浓度为600ng/ul的皮肤癣菌DNA浓度经10倍连续稀释后，得到7个浓度的菌液：600ngpg经PCR扩增后出现366bp的阳性条带，第8个600fg浓度经PCR扩增后未出现任何条带。第二部分：在119例临床标本中，PCR与传统诊断方法的一致性检验Kappa值为0.910，P诊断结果方面具有较高的一致性。然而PCR方法在5小时内即可完成从标本处理至结果判读的全过程，且操作简便，判断结果客观。结论皮肤癣菌通用引物CHS1具有较高的特异性，可用作检测皮肤癣菌的特异性引物，本实验PCR体系的敏感度较高，为6pg。PCR在临床标本的皮肤癣菌检测方面更加简便快速，可替代现有皮肤癣菌病的传统诊断方法。

关键词： PCR 癣菌病 CHS1 传统诊断

中国科协第90期“新观点新学说学术沙龙”研讨“结核病新型诊断技术的应用”

同方学位论文库评论

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科技导报 2014年第31期32卷 49-49页

2014年9月25—26日,主题为＂结核病新型诊断技术的应用＂的中国科协第90期＂新观点新学说学术沙龙＂在贵阳举行。近30位国内专家与会研讨,围绕＂结核病常规诊断方法的局限性和现行结核病诊断工作的重点难点＂、＂结核病新型诊断技术的... 详细信息

2014年9月25—26日,主题为＂结核病新型诊断技术的应用＂的中国科协第90期＂新观点新学说学术沙龙＂在贵阳举行。近30位国内专家与会研讨,围绕＂结核病常规诊断方法的局限性和现行结核病诊断工作的重点难点＂、＂结核病新型诊断技术的发展趋势及运用前景＂、＂结核病耐多药快速诊断技术发展趋势及运用前景＂等议题展开观点阐述和激烈争论。

关键词：诊断技术中国科协运用前景常规诊断方法国内专家观点阐述应用免疫学传统诊断发展趋势临床诊断

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思考维吾尔医传统诊疗方法

新疆维吾尔医学专科学校学报（维文） 2014年第1期24卷 51-54页

作者：买买提艾力·穆合木德喀什地区维吾尔医医院喀什844000

维吾尔医诊治疾病时，首先通过区分正常密杂吉与异常密杂吉，其次制定相应的治疗治疗原则再进行病因治疗，这样能从病源上治疗疾病且能巩固疗效。

关键词：维吾尔医学传统诊断

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实验室检测在猪病防控中的应用

广西畜牧兽医 2016年第2期32卷 83-84页

作者：钟舒红胡帅李军于行峰广西兽医研究所广西南宁530001 广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 桂林市畜牧站广西桂林541000

近年来,随着规模化、集约化养猪的不断发展,猪场疾病的复杂化程度日趋严重,和以往仅凭兽医技术人员简单的临床诊断及经验判断已经远远无法满足当今养殖业的发展需求,需借助专业的实验室检测技术来弥补传统诊断的缺陷。笔者结合自身两年... 详细信息

近年来,随着规模化、集约化养猪的不断发展,猪场疾病的复杂化程度日趋严重,和以往仅凭兽医技术人员简单的临床诊断及经验判断已经远远无法满足当今养殖业的发展需求,需借助专业的实验室检测技术来弥补传统诊断的缺陷。笔者结合自身两年来的实验室工作经历,总结以下几点实验室检测在猪病防控中的应用,仅供大家交流参考。

关键词：实验室检测抗体检测兽医技术人员集约化养猪传统诊断抗原检测临床诊断复杂化程度母源抗体猪群免疫

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浅议汽车怠速不稳故障诊断与维修

价值工程 2011年第10期30卷 31-31页

作者：李俊杰武警8610部队后勤部盘锦124010

现代汽车技术迅猛发展,汽车电子化、智能化趁势越来越明显。特别是桥车的功能和结构越来越复杂,故障的诊断与排除愈来愈依赖高、精、尖的检测仪器与设备。本文主要探讨了汽车怠速不稳故障的诊断与排除方法。

关键词：传统诊断故障判断高级桥车

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肌钙蛋白T与心肌损害

福建医药杂志 1992年第5期14卷 32-32页

作者：吴永廉

急性心肌梗塞的传统诊断检验方法有许多弊病,表现为左束支传导阻滞和非特异的ST段-T波异常,肌酸激酶的假阳性率高达15％,同功酶也不是一种心脏病特异性因子,并在心肌梗塞期间其浓度可短暂增加,因而限制它的诊断价值。心肌肌钙蛋白T是心... 详细信息

急性心肌梗塞的传统诊断检验方法有许多弊病,表现为左束支传导阻滞和非特异的ST段-T波异常,肌酸激酶的假阳性率高达15％,同功酶也不是一种心脏病特异性因子,并在心肌梗塞期间其浓度可短暂增加,因而限制它的诊断价值。心肌肌钙蛋白T是心肌严重缺血时释放进入血循环的唯一一种心肌抗原。Katus等研制一胂免疫试剂盒来测定心肌肌钙蛋白T,一般血清浓度通常很低,而在心肌梗塞时可明显增加。肌钙蛋白T与心肌损伤的传统血清学标记相比。

关键词：肌钙蛋白肌损害左束支传导阻滞假阳性血清学血清浓度特异性因子传统诊断肌损伤免疫试剂盒