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传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株分离与基本特性研究

传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株分离与基本特性研究

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作者： John M.Dikki 浙江大学

学位级别：硕士

腺胃鸡胚分离物2/97、3/97、1/98毒株的生物学及理化特性研究将从浙江建德市、杭州市部分发病鸡场中收集的腺胃肿大病料（分别编号为 1/97、3/97、1/98）制成匀浆，经无均处理后接种9-11日龄的 sPF鸡胚，传代 ... 详细信息

腺胃鸡胚分离物2/97、3/97、1/98毒株的生物学及理化特性研究将从浙江建德市、杭州市部分发病鸡场中收集的腺胃肿大病料（分别编号为 1/97、3/97、1/98）制成匀浆，经无均处理后接种9-11日龄的 sPF鸡胚，传代分离病毒。结果显示：接种病料的鸡胚，1-5代的鸡胚死亡率较低，约20%，死亡时间不规律，平均为130小时。从第6代开始，鸡胚出现规律性死亡，主要死亡时间集中在46-68小时，平均死亡率高达92%;死亡鸡胚的病变表现为皮肤点状出血。至168小时未死亡或死亡鸡胚，均出现生长发育停滞呈“抱头状”，形似“侏儒”。感染鸡胚尿液经纯化后电镜观察，可见100-120nm的病毒离子。鸡胚分离物对氯仿敏感，对PH3、反复冻融不敏感;45℃90分钟和56℃15分钟处理后对鸡胚感染性下降;感染鸡胚尿液经1%胰酶处理后具有凝集红细胞的特性。感染鸡胚尿液在鸡胚内可干扰新城疫病毒的复制，这些结果说明，腺胃鸡胚分离物 2/97、3/97和1/98毒株的特征与传染性支气管炎病毒一致，但各分离株与其他传染性支气管炎病毒的之间的中和反应能力较低，对鸡胚的致死时间与己有的传染性支气管炎病毒存在差异。传染性支气管炎病毒2/97、3/97和1/98 毒株s1基因克隆及序列分析根据己发表的 IBV核苷酸序列设计并合成特异的 PCR引物，成功地获得了 2／97、3／97和1／98病毒株1．93kb的RT－PCR产物;获得的PCR产物克隆进入pBs sK载体，经一系列鉴定后测序，结果显示：2/97、3/97和 1/98 毒株s1基因均由 1930个核苷酸组成，并编码 620AA组成的多肽;进一步分析显示，1/98、2/97、 3/97的核苷酸和多肽序列与ZJ971、H52和M41毒株均有较高的同源性，ZJ971、 2/97、3/97、1/98具有较近的亲缘关系，但与其他毒株相比存在一定数量的核苷酸点突变，进而引起氨基酸突变造成其多肽二级结构的改变。综合传染性支气管炎病毒2/97、3/97、1/98 病毒株的上述理化、生物学特性及s1 基因的分子特征2/97、3/97及1/98为传染性支气管炎新的变异株．传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株油乳剂灭活疫苗的实验研究应用本实验室分离鉴定的IBV-ZJ971毒株制成不同病毒浓度的油乳剂灭活疫苗，以不同的剂量免疫14日龄sPF雏鸡，在免疫后14天和30天分两次进行强毒攻击，同时监测免疫组的血清抗体直到164日龄。结果表明：用病毒原液制备疫苗，以0．5ml和1．0ml剂量免疫动物时才能刺激机体产生有效的免疫应答和抵抗强毒的攻击．其中以0．5ml剂量为最佳免疫剂量。

关键词：传染性支气管炎病毒,变异株,分离,s1基因,克隆

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