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鸡胚细胞的传代培养和麻疹病毒的增殖

微生物与感染 2022年第2期17卷 81-87页

作者：张林亚徐然周旭杨文震朱为上海生物制品研究所有限责任公司研发部第三研究室上海200051 上海生物制品研究所有限责任公司上海201400

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测... 详细信息

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测和基因序列测定。结果显示,原代鸡胚细胞可稳定传代培养至第10代,各代次细胞生长趋势相似;第5代鸡胚细胞染色体检查为正常染色体核型;第8代鸡胚细胞成瘤性检查未见成瘤;采用第3、5代鸡胚细胞制备的麻疹病毒滴度水平高于原代鸡胚细胞,但无显著性差异(n=3,P>0.05),编码病毒核蛋白(nucleoprotein,N)和血凝素蛋白(hemagglutinin,H)的基因序列与S-191株完全一致,未发生变异。本研究证实,原代鸡胚细胞可进行传代培养,各代次鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性不变,产毒水平无显著差异,可用于培养麻疹病毒。

关键词：原代鸡胚细胞传代培养麻疹减毒

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第5期24卷 395-397页

作者：刘伟曾铁兵曾庆仁蔡春张祖萍龚燕飞蔡力汀张顺科徐锡萍中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室南华大学医学院病原生物学研究所衡阳421001 中南大学湘雅医学院细胞与分子生物学实验中心长沙410013 中南大学湘雅医学院细胞与分子生物学实验中心中南大学湘雅医学院电镜室

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表... 详细信息

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

关键词：日本血吸虫成虫细胞传代培养超微结构染色体核型

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幽门螺杆菌悉尼标准菌株传代培养方法研究

大理大学学报 2022年第8期7卷 37-40页

作者：樊玉娟李福兴王黎程明璟肖敏熊苗苗赵卫东大理大学临床医学院云南大理671000

目的:比较不同培养方法幽门螺杆菌(H.pylori)悉尼标准菌株(SS1菌株)的生长速度,寻找简便、快捷的H.pylori培养方法。方法:通过4种方法对SS1菌株进行培养,在哥伦比亚血平板中加入脑心浸润液及菌液,使用无菌一次性接种环将菌液均匀涂布。... 详细信息

目的:比较不同培养方法幽门螺杆菌(H.pylori)悉尼标准菌株(SS1菌株)的生长速度,寻找简便、快捷的H.pylori培养方法。方法:通过4种方法对SS1菌株进行培养,在哥伦比亚血平板中加入脑心浸润液及菌液,使用无菌一次性接种环将菌液均匀涂布。方法一是将完成菌液涂布的哥伦比亚血平板放入装有厌氧产气包的密封厌氧袋中;方法二是将完成菌液涂布的哥伦比亚血平板置于含去离子水和厌氧产气包的密封培养罐中;方法三是在方法二的基础上,在密封培养罐内点燃1次蜡烛;方法四是在方法三的基础上,于密封培养罐内多次点燃蜡烛。4种方法均置于CO_(2)培养箱内进行培养,通过观察菌落形态、革兰染色和质谱检测鉴定H.pylori菌株。结果:4种方法均能成功培养出H.pylori菌株,在达到同等菌落数量情况下,方法四用时显著少于其他3种方法,差异有统计学意义(P传代培养方法,具有较强的应用前景,值得推广。

关键词：幽门螺杆菌传代培养方法比较

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鸡胚盲肠上皮细胞的传代培养

畜牧兽医学报 2011年第3期42卷 409-415页

作者：古少鹏赵素芬王运盛郑明学侯金环山西农业大学动物科技学院太谷030801

本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式... 详细信息

本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式;筛选了传代细胞培养液中L-GLN和胰岛素的最佳浓度,通过贴壁差进一步纯化盲肠上皮细胞,探索其合适的培养条件。通过形态学观察、透射电镜、免疫组织化学技术、组织化学技术、糖原染色、流式细胞术的方法对传代细胞特性进行了鉴定。结果表明:胰酶-EDTA联合消化、15min贴壁差纯化除去成纤维细胞,72.5mg.L-1 L-GLN、0.05mg.L-1胰岛素和5%FBS的传代细胞培养液更有利于盲肠上皮细胞的生长;经形态学和透射电镜观察,AKP、Vimentin及PAS染色,所培养的传代细胞具有典型的上皮细胞特征,在传代后24～72h盲肠上皮细胞纯度达95%以上,贴壁细胞覆盖率达85%以上;细胞凋亡测定表明,细胞连传5代,活性较好,第6代细胞凋亡率显著增加,贴壁细胞覆盖率降低。本研究提示用该法传代可获得稳定、数量大、活性高、纯度高的鸡胚盲肠上皮细胞。

关键词：盲肠上皮细胞传代培养特性鸡胚

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体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象

中国组织工程研究 2013年第20期17卷 3626-3634页

作者：徐磊叶朝阳周燕谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海市200237

背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代... 详细信息

背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较。结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化。细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红O染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低。半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化。结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复。

关键词：组织构建软骨组织构建关节软骨损伤软骨组织工程兔软骨细胞传代培养去分化细胞形态细胞生长组织学染色基因表达部级基金

AMP活化蛋白激酶在终板软骨细胞体外传代培养中的表达及意义

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中国组织工程研究 2016年第29期20卷 4297-4302页

作者：赵泉来郑权徐宏光沈祥王弘刘平王凌挺杨晓明陈学武张玙李逸峰俞宏星皖南医学院第一附属医院弋矶山医院脊柱外科安徽省芜湖市241001

背景:终板软骨功能障碍是椎间盘退变的始动因素,AMPK在软骨的形成和降解过程中也具有相应的调节作用。目的:观察AMP活化蛋白激酶(AMPK)在终板软骨细胞体外自然传代退变模型中的作用。方法:分离大鼠腰椎终板软骨细胞,体外自然传代培养,... 详细信息

背景:终板软骨功能障碍是椎间盘退变的始动因素,AMPK在软骨的形成和降解过程中也具有相应的调节作用。目的:观察AMP活化蛋白激酶(AMPK)在终板软骨细胞体外自然传代退变模型中的作用。方法:分离大鼠腰椎终板软骨细胞,体外自然传代培养,取原代细胞(P0)、第2代细胞(P2)及第5代细胞(P5),倒置显微镜及细胞骨架染色观察终板软骨细胞形态的变化,甲苯胺蓝染色观察终板软骨细胞表型的改变;MTT法检测3组细胞的增殖能力;通过Real time-PCR评价3组终板软骨细胞中软骨标志基因(Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9)以及基质金属蛋白酶3和13的表达变化,Western blot检测终板软骨细胞中AMPK蛋白磷酸化的改变。结果与结论:(1)随着传代次数的增加终板软骨细胞形态发生改变,增殖能力降低,软骨细胞表型逐渐丢失;(2)P5代终板软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9基因表达明显下调(P传代过程中软骨细胞的退变密切相关,调控AMPK活性有可能减轻或阻止终板软骨及椎间盘的退变。

关键词：椎间盘软骨细胞基质金属蛋白酶类组织工程组织构建终板软骨细胞传代培养 AMPK 国家自然科学基金

猪乙脑病毒分离株BSF．ZZ-1和BSF．ZZ-3在BHK-21细胞上的传代培养及E基因序列稳定性分析

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华北农学报 2013年第6期28卷 71-76页

作者：胡博滕蔓禹乐乐罗俊迟佳琪宿靖伟柴书军张改平吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130000 河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V... 详细信息

为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V)、E200(T→A)、E244(G→E)、E279(M→K)和E426(G→D),以及BSF.ZZ-3毒株的E244(G→E)、E255(F→L)、E285(M→L)、E368(L→S)和E497(N→S)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与疫苗株SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如BSF.ZZ-3的E279(M→K→M)出现反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。

关键词：乙脑病毒 BSF.ZZ-1 BSF.ZZ-3 BHK-21细胞系传代培养 E基因序列分析

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人脂肪细胞原代及传代培养的研究现状

中华整形外科杂志 2007年第5期23卷 448-450页

作者：骆莉莉慕晓玲新疆石河子大学医学院组织胚胎学教研室 832002

脂肪组织是机体内最大的能量储库和重要的内分泌器官。脂肪细胞的分化和增殖失常可导致肥胖、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、2型糖尿病等疾病。目前用于体外脂肪细胞分化研究的主要是鼠源性的3T3-L1和3T3-F442A前脂肪细胞系。但人和鼠的脂... 详细信息

脂肪组织是机体内最大的能量储库和重要的内分泌器官。脂肪细胞的分化和增殖失常可导致肥胖、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、2型糖尿病等疾病。目前用于体外脂肪细胞分化研究的主要是鼠源性的3T3-L1和3T3-F442A前脂肪细胞系。但人和鼠的脂肪细胞在分化调控和细胞功能上都有显著的区别，因此，为了准确的获得人脂肪细胞研究数据，就必须建立人的脂肪细胞培养模型。

关键词：脂肪细胞分化传代培养动脉粥样硬化 3T3-L1 细胞培养模型内分泌器官胰岛素抵抗 2型糖尿病

猪乙脑病毒分离株CSF.XZ2D在BHK21细胞上的传代培养及E基因序列分析

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河南农业科学 2013年第5期42卷 153-157页

作者：梁晓晓罗俊禹乐乐滕蔓胡博杨艳艳张改平钟秀会河北农业大学动物科技学院河北保定071000 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 郑州大学生物工程系河南郑州450001

为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征及其遗传基因的稳定性,将猪乙脑病毒分离株CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定,氨基... 详细信息

为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征及其遗传基因的稳定性,将猪乙脑病毒分离株CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定,氨基酸位点E271(E→V)和E278(V→L)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如E279和E312分别出现K→M→K和K→R→K→R的反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。

关键词：乙脑病毒 CSF XZ-2D BHK-21 传代培养 E基因序列分析