检索结果-南通市图书馆

作者：杨里重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:对体外培养C57小鼠密质骨来源的间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPC)的方法进行研究,建立适合小鼠MPC增殖的培养方案;探讨小鼠密质骨来源的MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的实验研究。方法: 取材方法选择健康C57... 详细信息

目的:对体外培养C57小鼠密质骨来源的间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPC)的方法进行研究,建立适合小鼠MPC增殖的培养方案;探讨小鼠密质骨来源的MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的实验研究。方法: 取材方法选择健康C57雌性小鼠,清洁级,3周龄,18±2 g,取股骨、胫骨碎片经Ⅱ型胶原蛋白酶消化后作为MPC来源。分组取得消化后的骨碎片,选取干细胞培养中经常使用的DMEM/F12培养基、IMDM培养基、α-MEM培养基和TBD公司生产的胎牛血清(FCS)、GIBCO公司生产的胎牛血清,按不同搭配进行培养,随机分为DMEM/F12+10%TBD胎牛血清组、DMEM/F12 +10%GIBCO胎牛血清组、IMDM+10%TBD胎牛血清组、IMDM +10%GIBCO胎牛血清组、α-MEM +10%TBD胎牛血清组、α-MEM +10%GIBCO胎牛血清组,共6组,每组培养6份。培养方法将小鼠密质骨碎片置入六孔板中,按不同分组加入相应培养液,放入37℃、5% CO2的培养箱内,48 h后首次换液,以后每隔2-3 d换液一次。每天观察细胞生长情况,当生长最好的实验组原代(P0)细胞细胞贴壁超过培养板底面积80%时吸出培养液,用含0.04% EDTA的0.25%胰蛋白酶消化、收集细胞,按固定细胞浓度传入培养瓶。传代后以后每2-3 d换液一次,当生长最好的实验组细胞贴壁超过培养瓶底面积70%-80%时按固定细胞浓度1×103个/cm2传代。 MPC纯度鉴定采用流式细胞术分析,单标法检测第三代(P3)MPC,取FITC标记的兔抗鼠CD29、CD31、CD44、CD90和PE标记的兔抗鼠CD45、CD106作为标记物,平行对照组为加入同型对照抗体的MPC。考虑到实验的需要以及研究生学习阶段时间有限,只选择采用优化方案进行培养的MPC进行纯度鉴定。 MPC的多向分化鉴定对MPC进行向骨细胞、脂肪细胞的定向诱导分化,验证其具有干细胞的多向分化潜能,用茜素红和油红O染色检测诱导分化结果。同样只选择采用优化方案进行培养的MPC进行多向分化能力鉴定。 MPC定向诱导成神经元样细胞的方法取优化方案培养的P4代MPC,用微环境体液(神经元原代培养上清液)进行诱导,取诱导24 h后的MPC作为实验标本。对其进行形态学观察;免疫细胞化学检测神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase ,NSE)及神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)的表达情况,同时进行免疫荧光分析。结果: C57小鼠间充质祖细胞(MPC)体外优化培养原代培养5 d后,可见培养器皿底部有细胞贴壁生长,以圆形和扁圆形为主,10 d后贴壁细胞逐渐铺开,形成梭形或多角形,形态饱满,折光性强,细胞间无重叠,有接触抑制现象;传代后细胞形态趋于一致,大部分为梭形,排列紧密,生长旺盛。当某个实验组细胞贴壁超过底面积70%-80%时,对所有细胞进行传代计数,观察3代。结果发现在每一代的细胞计数中,DMEM/F12+10% GIBCO胎牛血清组的细胞数量都超过其他各组,通过统计学检验验证DMEM/F12+10% GIBCO胎牛血清组细胞数量与其余各组相比有显著差异(P﹤0.05)。说明DMEM/F12+10%GIBCO胎牛血清更有利于MPC的体外培养增殖。 MPC纯度鉴定优化方案培养的MPC表达间质细胞标记CD29、CD44、CD90和CD106,不表达造血细胞标记CD31和CD45。说明得到的是同源性好、纯度高、排除了造血干细胞影响的MPC。 MPC多向分化能力鉴定在用优化方案培养的MPC定向诱导成骨细胞的实验中,通过茜素红染色发现诱导后细胞外基质中大量钙盐沉积;在定向诱导成脂肪细胞的实验中,通过油红O染色发现细胞中出现的脂滴被染成点状红色,表明我们得到的MPC能向骨细胞、脂肪细胞分化。说明我们得到的是活性好、具有多向分化能力的MPC。 MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化经诱导24 h后,MPC细胞形态发生变化,自胞体有突起长出,各细胞突起长短不一,类似神经元。免疫细胞化学检测结果表明,诱导后MPC的NSE(73.73%±9.88%)及NF(60.26%±7.19%)均阳性表达;免疫荧光检测也证实免疫细胞化学检测的结果。结论 1.实验证明,用DMEM/F12+10% GIBCO胎牛血清为培养液进行小鼠密质骨来源的MPC体外培养最有利于其数量的扩增,得到的是同源性好、纯度高、增殖活力强、具有多向分化潜能的MPC细胞群。 2.通过微环境体液(神经元原代培养上清液)诱导的方法能够使小鼠密质骨来源的MPC定向分化为神经元样细胞。

关键词：间充质祖细胞优化培养诱导分化神经元样细胞

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草菇菌丝优化培养条件研究

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中国食用菌 2009年第3期28卷 28-31页

作者：伍国明李梅佛山科学技术学院食品科学系广东佛山528000

试验研究不同营养因子与培养条件(pH值、温度)对草菇4个菌株菌丝生长的影响。结果表明,菌丝生长最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,无机盐为硫酸镁,植物生长素为萘乙酸,最适培养温度为30℃～35℃,最适pH值范围为7.0～11.0。正交试验确定... 详细信息

试验研究不同营养因子与培养条件(pH值、温度)对草菇4个菌株菌丝生长的影响。结果表明,菌丝生长最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,无机盐为硫酸镁,植物生长素为萘乙酸,最适培养温度为30℃～35℃,最适pH值范围为7.0～11.0。正交试验确定最佳培养基组分为蔗糖20.0g·L-1、蛋白胨5.0g·L-1、硫酸镁1.5g·L-1、萘乙酸5.0mg·L-1、马铃薯200g·L-1。

关键词：草菇菌丝体营养因子培养条件优化培养

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松嫩草地羊草和星星草根际溶磷能力测定及优化培养

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黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 158-161页

作者：邓小宇唐凤兰朱瑞芬刘杰淋刘凤歧哈尔滨师范大学生命科学与技术学院哈尔滨150025 黑龙江省农业科学院草业研究所哈尔滨150086

为了获取植物根际高效溶磷菌,试验对松嫩草地乡土植物羊草(Leymus chinensis)和星星草(Puccinellia tenuiflora)进行了根际土壤取样,分离纯化,测定了羊草和星星草根际溶磷菌分解无机磷的能力,并对溶磷菌的生长条件优化处理。结果表明:... 详细信息

为了获取植物根际高效溶磷菌,试验对松嫩草地乡土植物羊草(Leymus chinensis)和星星草(Puccinellia tenuiflora)进行了根际土壤取样,分离纯化,测定了羊草和星星草根际溶磷菌分解无机磷的能力,并对溶磷菌的生长条件优化处理。结果表明:初步得到的溶磷菌株27株中,有效磷增加量超过150 mg/L的菌株有4株,聚类分析得到具备较强溶磷水平菌株1株。两种乡土植物根际菌株的溶磷能力与p H值具有线性关系(P优化培养基是麦芽糖、尿素、Na Cl用量分别为5,0.05,5 g/L,p H值为5,在30℃下培养48 h菌落总数可达6.03×109cfu/m L。

关键词：羊草星星草根际溶磷菌溶磷量 pH值分离纯化优化培养

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泡囊侧耳细胞毒活性成分的分离鉴定及野生药用珊瑚菌液体优化培养

泡囊侧耳细胞毒活性成分的分离鉴定及野生药用珊瑚菌液体优化培养

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作者：庞海月福建师范大学

学位级别：硕士

本论文以泡囊侧耳(Pleurotus cystidiosus)和珊瑚菌(Clavicorona pyxidata)为研究材料,探讨食药用真菌活性化学成分的开发技术。泡囊侧耳具有较高的食药用价值,隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属。本文以马铃薯葡萄糖... 详细信息

本论文以泡囊侧耳(Pleurotus cystidiosus)和珊瑚菌(Clavicorona pyxidata)为研究材料,探讨食药用真菌活性化学成分的开发技术。泡囊侧耳具有较高的食药用价值,隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属。本文以马铃薯葡萄糖琼脂为培养基,将泡囊侧耳进行固体平板发酵,首先利用噻唑蓝(MTT)法对其发酵产物的有机浸提物的细胞毒性进行测定,结果表明50μg/mL的有机浸提物对前列腺癌细胞株LNCaP、DU-145和PC-3的抑制率依次为39.9%、41.2%和36.6%,而对人正常前列腺上皮细胞RWPE-1的抑制率为23.5%。接着,将泡囊侧耳固体平板发酵15 L,制备得到4.4 g有机浸提物,利用反相硅胶柱层析、凝胶柱层析以及正相硅胶柱层析等色谱分离技术,从浸提物中分离获得5个化合物。采用核磁共振波谱、高分辨质谱、紫外吸收光谱、红外光谱、圆二色谱和旋光等数据等理化数据对5个化合物的结构进行解析鉴定,结合数据库检索,5个化合物为新倍半萜类化合物：化合物1和2是bisabolane型倍半萜,命名为pleuroton A(1)和pleuroton B(2),化合物3、4和5是clitocybulol衍生物,命名为clitocybulol D(3),clitocybulol E(4)和clitocybulol F(5)。MTT试验结果表明,5个化合物对前列腺癌细胞株LNCaP、C42B和DU-145具有不同程度的抑制作用,化合物2的抑制作用较强,对前列腺癌细胞株LNCaP、C42B和DU-145的IC50值依次为28、52和51nM。细胞克隆形成试验也进一步表明化合物2的细胞毒作用。采用流式细胞分析、染色质观察和Western Blot Analysis蛋白质印迹分析技术,表明化合物2具有诱导DU-145细胞发生凋亡的作用。构效分析表明,化合物2含有的α,β-不饱和羰基和C8位羟基的特殊化学官能团对其细胞毒性起着重要作用。珊瑚菌属多孔菌目,珊瑚菌科,氨基酸和萜类等含量丰富,有较高的药用与营养价值,其子实体现多为野生采摘,未见有人工栽培的报道。本文对珊瑚菌的液体发酵开发技术进行研究,首先采用核磁共振波谱(氢谱和碳谱)技术对珊瑚菌子实体与菌丝体的化学成分进行比较,结果表明液体发酵菌丝体与子实体的化学组成极为相似,液体发酵菌丝体可以作为子实体的替代品。接着对珊瑚菌菌丝液体发酵条件进行优化,结果表明培养基以葡萄糖为碳源,以酵母粉为氮源,pH为7.0,装液量为100 mL,培养20 d,珊瑚菌液体摇瓶的生物量较大。在Plackett-Burman设计试验的基础上,利用最陡爬坡试验确定摇瓶发酵的最大产量区域,最终将菌丝产量由原来的1.06g/L提高到9.45g/L。本论文的研究为进一步采用工业发酵技术来开发利用泡囊侧耳和珊瑚菌的化学资源奠定了基础。

关键词：泡囊侧耳倍半萜细胞毒活性珊瑚菌优化培养

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绿球藻Chlorococcum sphacosum GD的优化培养及油脂积累研究

绿球藻Chlorococcum sphacosum GD的优化培养及油脂积累研究

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作者：郭宇宁山西大学

学位级别：硕士

由于环保需求的增强和化石能源储量的缩减,越来越多的研究开始关注将应用微藻制备生物柴油的绿色能源作为未来能源发展的重要方向。目前,应用微藻制备生物柴油过程涉及到藻种筛选、培养、收取、提取、转化等多个环节。然而,由于现有的... 详细信息

由于环保需求的增强和化石能源储量的缩减,越来越多的研究开始关注将应用微藻制备生物柴油的绿色能源作为未来能源发展的重要方向。目前,应用微藻制备生物柴油过程涉及到藻种筛选、培养、收取、提取、转化等多个环节。然而,由于现有的生产工艺成本远远高于应用传统化石能源的成本,因此很大程度上阻碍了微藻生物柴油的产业化及其发展。选择高油脂含量的藻种、采用低成本的培养方式,建立低能耗的采收方式和干燥方法,并设计应用环境较友好的油脂提取方法,才能在总体性能上提高微藻能源竞争力,在市场上得以大力推广和应用。我们前期研究中筛选获得一株油脂含量高达30%的藻种,Chlorococcum sphacosum GD,非常适合作为微藻能源的藻种。为了摸索*** GD作为能源微藻的可行性,本研究以该藻种的生物量、油脂含量以及生理生化的变化为标准,对最佳培养条件进行了探索性研究。首先,我们检测了光照强度对*** GD生长和中性脂积累的影响。结果显示在BG-11培养基中,25℃培养条件下,持续光照强度分别为3000 lx、7000lx、11000 lx培养11天后,*** GD的干重分别达到0.38 g/L、0.34 g/L、0.32 g/L,提示高光照强度会抑制生物量增长。在上述条件下,中性脂的累计随着光照强度的增加而增加;同样总脂的含量也相应增加,在三种光照强度下分别达到24.01%、32.23%、35.55%,这些结果证明光照强度可以促进细胞中油脂的积累。进而,针对不同碳源对于*** GD的生长和油脂的累积进行了分析。在碳源分别为0.02 g/L NaCO3和10.00 g/L葡萄糖培养基中,*** GD在培养第9天时干重分别达到0.36 g/L、3.75 g/L,表明葡萄糖作为碳源更易于促进藻的生长。同时根据生长曲线可以看出,以葡萄糖为碳源时,*** GD的生物量在前两天迅速增加,生长速率在第3天达到高峰后下降,提示培养基中的葡萄糖利用速度非常快。但是,使用葡萄糖作为碳源并没有明显提高中性脂的积累。在使用NaCO3为唯一碳源时,*** GD的生长速度缓慢,油脂积累也没有明显的增加。第三,我们针对不同氮源对于*** GD的生长和油脂积累也进行了详细研究。研究结果显示以NaNO3为氮源时生物量最大,其次是CO(NH2)2,NH4Cl条件下最差。但是,无论使用上述哪种氮源,细胞内的中性脂含量均没有明显变化。这一结果提示,NaNO3是*** GD生长的最佳氮源。最后,我们还检测了不同浓度的NaCl对*** GD生长和油脂积累的影响。实验结果显示,随着NaCl浓度的增加,生物量逐渐下降,但是细胞内中性脂的积累却逐渐增加。在NaCl浓度为8.00 g/L时,细胞油脂含量最高,而且高NaCl浓度条件下,细胞中C18:3和C22:1的含量相对增加。综上所述,可以得出如下结论,以*** GD为能源微藻,最适的培养条件是光照强度为11000 lx,以葡萄糖为有机碳源,NaNO3为氮源,并配以较高的NaCl浓度。本研究结果为以*** GD作为能源微藻的进一步应用提供了重要的实验数据和的理论基础。

关键词：绿球藻Chlorococcum sphacosum GD 油脂积累光照强度营养元素优化培养

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优化培养过程塑造合格全科医学生

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中国农村卫生 2015年第8期7卷 58-59,62页

作者：覃晓龙李春鸣葛正龙余昌胤陈琦遵义医学院教务处贵州遵义563003

为适应医改需要，深入贯彻落实全科医生培养规划，我校于2010年首批承担了“农村订单定向医学生”免费培养项目（因其培养要求为全科医学方向，以下简称全科医学生），2012年被教育部、原卫生部列入“卓越医生教育培养计划”。如何加强... 详细信息

为适应医改需要，深入贯彻落实全科医生培养规划，我校于2010年首批承担了“农村订单定向医学生”免费培养项目（因其培养要求为全科医学方向，以下简称全科医学生），2012年被教育部、原卫生部列入“卓越医生教育培养计划”。如何加强全科医学生服务基层的使命感和荣誉感、培养和保障其“六位一体”岗位（能力）需求、提高其对疾病（主要指常见病、

关键词：全科医学生优化培养 “六位一体” 全科医生培养规划教育培养教育部卫生部

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嗜水气单胞菌BSK-10株的优化培养及生长动态研究

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鱼类病害研究 2000年第4期22卷 7-13页

作者：钱冬曹铮沈锦玉沈智华尹文林吴颖蕾张念慈中国水产科学研究院鱼病研究室，浙江湖州，313001

用正交试验研究了嗜水气单胞菌BSK-10株的优化培养条件，结果表明：葡萄糖、甘油对BSK-10株有显著的促生长作用；各种无机离子中，HPO42^2-、Fe^2+、Ca^2+，(NH4)2SO4、Mg^2+、Zn^2+、Mn^2+对BSK-10生长有显著促进作用，而Cu^2+、Co^2+... 详细信息

用正交试验研究了嗜水气单胞菌BSK-10株的优化培养条件，结果表明：葡萄糖、甘油对BSK-10株有显著的促生长作用；各种无机离子中，HPO42^2-、Fe^2+、Ca^2+，(NH4)2SO4、Mg^2+、Zn^2+、Mn^2+对BSK-10生长有显著促进作用，而Cu^2+、Co^2+则表现为抑制作用：Na2HPO4与各种离子间存在交互作用，Fe^2+、Mg^2+、Zn^2+、Mn^2+的促生长作用在Na2HPO4存在表现得极为明显，而(NH4)2SO4、Mn^2+在Na2HPO4存在时有轻微抑制作用：葡萄糖对不同来源的鱼类嗜水气单胞菌致病株有不同的效应．研究了BSK-10的生长动态．表明不同温度条件下BSK-10达到对数生长及最大菌量的时间不同，以30℃为最好。

关键词：生长动态嗜水气单胞菌促生长作用优化培养病株温度条件 Mg^2+ HPO 抑制作用葡萄糖

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新月菱形藻的紫外诱变及优化培养

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山东科学 2011年第1期24卷 22-27页

作者：张新建任艳黄玉杰宋莉璐李红梅赵晓燕张广志杨合同山东省科学院中日友好生物技术研究中心山东省应用微生物重点实验室山东济南250014

本实验室通过紫外诱变得到一株富含油脂的新月菱形藻BC6,在实验室条件下研究了不同温度、光照强度、pH值、N源含量、NaCl含量等培养条件对BC6生长的影响。研究结果表明:最适培养温度在20℃,pH值为7.5,最适光照强度为54μE/(m2.s),NaNO3... 详细信息

本实验室通过紫外诱变得到一株富含油脂的新月菱形藻BC6,在实验室条件下研究了不同温度、光照强度、pH值、N源含量、NaCl含量等培养条件对BC6生长的影响。研究结果表明:最适培养温度在20℃,pH值为7.5,最适光照强度为54μE/(m2.s),NaNO3的最适添加量为105 mg/L,NaCl最适添加量为27 g/L。在优化培养条件下,最高细胞密度可达1.69×106/mL,比优化前增大了2.2倍。

关键词：新月菱形藻紫外诱变培养条件优化培养

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蛹虫草优化培养研究进展

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鲁东大学学报（自然科学版） 2011年第1期27卷 64-70页

作者：何洋刘林德赵彦宏苏志坚鲁东大学生命科学学院山东烟台264039 滨州市农业局山东滨州256000

概述了蛹虫草的菌丝体优化培养、子实体优化培养、富硒优化培养以及为提高蛹虫草中活性成分为目的的蛹虫草培养等方面的研究进展,并对今后的研究发展方向进行了展望.

关键词：蛹虫草优化培养培养基培养条件

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小球藻的优化培养及胞内多糖的提取

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生物技术 2002年第3期12卷 18-20页

作者：刘艳杨海波林芃张欣华大连大学化学与化学工程系辽宁大连116622

小球藻细胞中所含有的多糖和糖蛋白等活性物质具有明显的抗肿瘤、抗病毒感染及增强机体免疫力等作用。首先考察了几个重要的环境因素对小球藻生长及胞内多糖含量的影响 ,确定了优化的环境条件为 :光照 1 7h ,培养温度 1 5℃ ,营养盐KNO3... 详细信息

小球藻细胞中所含有的多糖和糖蛋白等活性物质具有明显的抗肿瘤、抗病毒感染及增强机体免疫力等作用。首先考察了几个重要的环境因素对小球藻生长及胞内多糖含量的影响 ,确定了优化的环境条件为 :光照 1 7h ,培养温度 1 5℃ ,营养盐KNO3 浓度为 2mmol/L。在此优化条件下 ,大批量培养小球藻至平衡期 ,离心收集藻细胞 ,再经过冻融与超声波破碎 ,三氯乙酸沉淀蛋白质 ,最后通过SephadexG - 75凝胶柱分离得到了两种分子量不同的多糖 ,并结合醋酸纤维素膜电泳证明了同样的结论。

关键词：小球藻优化培养胞内多糖提取

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