检索结果-南通市图书馆

基于核酸适配体传感器的伏马毒素b1快速检测方法研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于核酸适配体传感器的伏马毒素B1快速检测方法研究

作者：张峻搏牡丹江师范学院

学位级别：硕士

伏马毒素b1（Fumonisin b1,Fb1）是串珠镰刀菌的次级代谢产物,毒性极强,被国际癌症研究机构列为2b类致癌物,威胁人畜健康。现有Fb1检测方法尚无法满足快速、高灵敏度、操作简单等要求。针对该问题,本研究基于核酸适配体荧光传感器建立了... 详细信息

伏马毒素b1（Fumonisin b1,Fb1）是串珠镰刀菌的次级代谢产物,毒性极强,被国际癌症研究机构列为2b类致癌物,威胁人畜健康。现有Fb1检测方法尚无法满足快速、高灵敏度、操作简单等要求。针对该问题,本研究基于核酸适配体荧光传感器建立了Fb1快速检测方法,结果如下:（1）设计了荧光基团修饰的Fb1适配体FAM-APT,其通过π-π堆叠附着在氧化石墨烯（Graphene oxide,GO）表面,荧光共振能量转移作用使FAM荧光猝灭;当存在Fb1时,FAM-APT从GO表面解离与Fb1结合,荧光恢复。实验结果显示,该Fb1检测方法在10-100000 ng/L浓度范围内线性关系良好,R=0.9976;检测限0.26μg/k g,定量限0.86μg/kg,优于现有对Fb1快速检测的方法;玉米样品回收率为88.47%-101.8%、大米样品回收率为84.17%-91.89%。（2）通过空气低温等离子体射流对GO进行改性。结果表明,改性后GO吸附性能增强,水溶液稳定性增加,以其为猝灭剂的核酸适配体传感器的Fb1检测方法线性范围变宽为10-5000000 ng/L,R=0.9974;检测限低至0.16μg/kg,定量限0.49μg/kg,结果优于改性前;玉米样品回收率为95.83%-104.7%、大米样品回收率为89.31%-94.46%。（3）设计并筛选出FAM-APT互补DNA（Complementary DNA,c DNA）和c DNA的互补cr RNA;55℃退火条件下,c DNA与FAM-APT在链霉亲和素磁珠（Magnetic beads,Mbs）表面结合成双链DNA（double-stranded DNA,ds DNA）,cr RNA与Cas12a酶结合成CRISPR-Cas12a,并加入荧光探针序列形成CRISPR-Cas12a系统;Fb1引入Mbs体系,与FAM-APT结合,ds DNA链解释放出c DNA,引入c DNA并激活CRISPR-Cas12a系统反式切割特性,荧光产生。实验结果显示,该Fb1检测方法在0.1-500000ng/L浓度范围内线性关系良好,R=0.9985;检测限0.52μg/kg,定量限1.56μg/kg;玉米样品回收率为98.77%-107.3%、大米样品回收率为89.57%-94.95%。

关键词：伏马毒素b1 适配体氧化石墨烯 CRISPR-Cas12a

伏马毒素b1对猪体外成熟卵母细胞凋亡与自噬的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2022年第6期55卷 1241-1252页

作者：李文慧贺依静姜瑶赵红宇彭磊李佳芮荣剧世强南京农业大学动物医学院

【目的】探究伏马毒素 b(fumonisin b,Fb)对猪卵母细胞体外成熟的影响及其潜在的作用机制, 为临床有效防治Fb所致的生殖毒性损伤提供理论参考。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)进行随机分组，在体... 详细信息

【目的】探究伏马毒素 b(fumonisin b,Fb)对猪卵母细胞体外成熟的影响及其潜在的作用机制, 为临床有效防治Fb所致的生殖毒性损伤提供理论参考。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)进行随机分组，在体外成熟培养过程中分别用不同浓度 Fb(0、10、20 和 30 μg·mL)处理 44 h 后，统计卵母细胞第一极体(first polar body, Pb1)排出和激活后胚胎发育情况；通过免疫荧光染色结合共聚焦显微镜技术进一步检测 Fb对卵母细胞减数分裂进程和细胞骨架结构的影响；为进一步探究 Fb对猪卵母细胞毒性损伤的作用机制，分别采用 JC-1、Annexin V-FITC和 LC3A/b 荧光染色检测各组卵母细胞内线粒体功能、早期凋亡和自噬水平，并在此基础上，进一步通过 Western blotting分析了凋亡/自噬相关蛋白的表达情况。【结果】Fb处理对卵母细胞成熟具有明显的抑制作用，Pb1 排出率呈浓度依赖性下降，当 Fb浓度达到 20 μg·mL以上时，Pb1 排出率显著降低(Pb处理还会导致减数分裂周期进程紊乱，使阻滞在生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown,GVbD)的卵母细胞比例显著升高(Pb处理组卵母细胞线粒体膜电位明显降低(Pb处理组卵母细胞早期凋亡率显著增加(Pblotting 分析结果显示，Fb处理组卵母细胞中促凋亡蛋白 bAX 和自噬蛋白 LC3A/b II的表达均显著上调(PbCL2 的表达显著下调(Pb对猪卵母细胞体外成熟及其激活后胚胎发育具有明显的毒性损伤作用，致使减数分裂周期阻滞，纺锤体结构紊乱、微丝分布减少和线粒体损伤，其毒性作用机制与诱导卵母细胞凋亡和自噬有关。

关键词：猪卵母细胞伏马毒素b1 细胞骨架凋亡自噬

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

伏马毒素b1染毒对小鼠睾丸损伤的研究

伏马毒素B1染毒对小鼠睾丸损伤的研究

作者：欧阳慧敏佛山科学技术学院

学位级别：硕士

目的伏马毒素b对生殖系统的毒性作用可能导致动物生殖功能障碍,影响种用动物的繁殖性能,危害养殖行业的发展,甚至造成严重的经济损失。Fb对动物睾丸的毒性与睾丸抗氧化系统平衡的相关性以及Fb对睾丸塞托利细胞的毒性作用报道较少。本研... 详细信息

目的伏马毒素b对生殖系统的毒性作用可能导致动物生殖功能障碍,影响种用动物的繁殖性能,危害养殖行业的发展,甚至造成严重的经济损失。Fb对动物睾丸的毒性与睾丸抗氧化系统平衡的相关性以及Fb对睾丸塞托利细胞的毒性作用报道较少。本研究以雄性昆明小鼠为研究对象,探究Fb对小鼠睾丸组织的损伤及对氧化平衡系统的影响,并初步探究Fb对睾丸塞托利细胞ROS含量和细胞凋亡水平的影响。以期为生产实践中有效防控Fb诱导生殖系统疾病的发生提供理论指导,同时也为临床上Fb所导致的雄性动物生殖功能损伤提供一定的实验参考。方法方法一:将标准饲料制成含5 mg/kg的Fb饲料,80只4周龄SPF级雄性昆明小鼠随机分组:连续饲喂标准饲料21或42天（C21、C42）、连续饲喂Fb饲料21或42天（F21、F42）。采集睾丸组织,测定睾丸脏器系数变化,通过组织病理切片观察组织病理变化,通过TUNEL法检测组织中凋亡细胞阳性率,通过免疫组化检测睾丸组织内抗氧化系统相关因子抗原水平,通过RT-q PCR、Wb分别测定炎症、凋亡、抗氧化系统相关因子m RNA水平、蛋白含量。方法二:为进一步探究Fb对小鼠睾丸的生殖毒性,37℃,5%CO培养箱内体外培养塞托利细胞TM4。本试验分别用0、20、40、80μM Fb处理塞托利细胞48 h后,并选取80μM Fb用于后续试验。通过DCFH-DA探针法检测细胞中ROS水平,通过间接免疫荧光法检测细胞中caspase3、bax表达。结果结果一:Fb染毒后,睾丸组织中出现炎性细胞,生殖细胞和精子数量减少,组织内TUNEL染色观察发现凋亡阳性细胞率显著增加。随着Fb染毒时间增加,组织损伤严重程度增加。Fb连续饲喂21天后凋亡相关因子caspase3、bax,炎症因子IL-1β、IL-2、INF-γ、TNF-α、NF-κb,以及Nrf2等抗氧化系统相关基因的m RNA相对表达量降低;Fb连续饲喂42天后,凋亡、炎症因子、抗氧化系统相关基因m RNA表达水平增加。Fb染毒后睾丸组织caspase12、bax蛋白含量增加,bcl-2蛋白含量降低。免疫组化结果显示Fb染毒后Nrf2、Keap1、SOD1、SOD2、NADPH、NQO1和SQSTM1等抗氧化系统相关因子阳性率增加。结果二:CCK8检测发现随着Fb浓度增加TM4细胞活力降低,ROS探针试验检测发现,80μM Fb1处理后,塞托利细胞细胞内ROS含量增加,Annexin-V/PI检测观察到凋亡细胞增加。间接免疫荧光法观察到细胞caspase3、bax含量增加。结论1、睾丸组织Fb染毒后的实验结果表明,Fb可以引起小鼠睾丸组织炎症反应、减少睾丸中生殖细胞及精子的数目,损伤组织结构,引起组织细胞凋亡,并且Fb毒性对睾丸组织抗氧化系统有影响。2、睾丸塞托利细胞染毒后的研究结果表明Fb降低塞托利细胞的细胞活力,并具有一定的剂量依赖性;Fb会增加睾丸塞托利细胞中ROS水平,并能促进塞托利细胞凋亡。

关键词：伏马毒素b1 小鼠睾丸塞托利细胞凋亡炎症细胞因子

伏马毒素b1通过抑制CerS2表达诱导内质网应激破坏猪肠上皮屏障

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

伏马毒素B1通过抑制CerS2表达诱导内质网应激破坏猪肠上皮屏障

作者：李孟聪南京农业大学

学位级别：硕士

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）是由镰刀菌属产生的一类有毒次生代谢产物。该化合物理化性质稳定,碾磨、加热等处理也无法破坏其结构,导致Fb能够在食品或饲料中长期存在,对食品安全管理工作和畜禽健康养殖造成了严重威胁。胃肠道是抵御食... 详细信息

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）是由镰刀菌属产生的一类有毒次生代谢产物。该化合物理化性质稳定,碾磨、加热等处理也无法破坏其结构,导致Fb能够在食品或饲料中长期存在,对食品安全管理工作和畜禽健康养殖造成了严重威胁。胃肠道是抵御食物污染物的第一道屏障。但是,目前对Fb肠毒性的了解有限。猪是对Fb高度敏感的农场动物,因此,本研究选择猪肠上皮细胞（IPEC-J2）为研究对象,探讨Fb对肠上皮的影响,并剖析了Fb诱导肠上皮损伤的机制。研究分为以下两部分:1、Fb诱导肠上皮屏障功能损伤本研究首先观察了Fb暴露48 h后对肠上皮细胞的影响。结果表明80μM及更高浓度的Fb明显抑制了肠上皮细胞活力（P≤0.05或P≤0.01）。此外,80μM的Fb还显著促进了胞质中乳酸脱氢酶（LDH）的释放（P≤0.05）,并且随着Fb浓度的增加、培养液上清中LDH的含量也随之提高。肠上皮细胞间的紧密连接（TJs）是肠道物理屏障的主要组成成分。实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测发现Fb的暴露会明显抑制TJs中zo-1（58.65%）,occludin（45.48%）,claudin-1（50.74%）的转录水平。免疫印迹实验（Wb）进一步在蛋白水平上证明Fb可抑制TJs的表达（P≤0.05或P≤0.01）。上皮细胞调节、分泌的细胞因子构成了肠道抵御外界污染物重要的免疫屏障。因此,研究又检测了细胞中促炎因子表达量的变化。结果表明80μM的Fb显著促进转化生长因子-β、白介素-1β、白介素-6、白介素-8、肿瘤坏死因子（tnf-α）等的m RNA表达（P≤0.05,P≤0.01或P≤0.001）。值得指出的是,即使是在Fb相对较低的暴露浓度下（40μM）,tnf-α的转录水平也被显著上调（P≤0.01）。因此,研究随后对TNF-α的蛋白水平也进行了检测,Wb结果与q RT-PCR结果一致。同时,调节TNF-α表达和活性的信号分子如TNF-α转换酶（TACE）、TNF-α受体（TNFR1）的表达水平也在80μM Fb的作用下显著升高（P≤0.05或P≤0.01）。2、Fb诱导肠上皮屏障功能损伤的机制研究本研究在前期观察中发现Fb的暴露会诱导肠上皮物理和免疫屏障功能的损伤。鉴于此,本研究又进一步探讨了Fb诱导肠上皮屏障功能障碍的机制。结果表明80μM的Fb显著抑制cers家族的转录表达,尤其是cers2（P≤0.01）。Wb结果也验证了Fb在蛋白水平上对CerS2的抑制（P≤0.01）。由于CerS是内质网合成的蛋白且其在内质网膜上调节脂质代谢,Fb对CerS2的抑制可能会阻断内质网中蛋白质的合成及脂质代谢,破坏内质网的稳态,诱导内质网应激。因此,本研究又在m RNA及蛋白水平上检测了内质网应激的标志物-未折叠蛋白反应（UPR）信号轴的表达情况。结果表明,80μM的Fb显著上调了葡萄糖调节蛋白78（grp78）的转录表达（P≤0.01）。与grp78结合的三个UPR传感器,肌醇需要酶1（IRE1）、蛋白激酶RNA激活样内质网激酶（PERK）和激活转录因子6（ATF6）的m RNA和蛋白水平也均有明显升高（P≤0.05或P≤0.01）。此外,受UPR传感器调控的下游基因的表达水平也均显著上调,如受ire1激活的X盒结合蛋白1（xbp1）的m RNA表达量增加并促进自我剪切形成s-xbp1;perk调控的真核细胞翻译起始因子（eif2α）、转录激活因子4（atf4）也呈高水平表达。总之,结果提示Fb可能通过抑制CerS2的表达、诱导细胞发生内质网应激。为了验证以上猜想,研究首先用siRNA抑制CerS2的表达,观察肠上皮细胞中内质网应激标志物的表达水平。结果表明,si-CerS2的处理会显著上调grp78、perk、eif2α、atf4、atf6、ire1、xbp1及其剪切体（s-xbp1）的m RNA水平（P≤0.05或P≤0.01）。蛋白水平的检测也肯定了si-CerS2对PERK、ATF6、IRE1表达的诱导作用。随后,我们用80μM的Fb处理过表达CerS2的IPEC-J2细胞,以进一步观察CerS2表达和内质网应激在Fb毒理学中的联系。结果表明,CerS2过表达可以有效抑制Fb对grp78、perk、atf6、ire1等内质网应激标志物m RNA水平的上调。Wb结果与m RNA水平变化一致,证明了Fb通过抑制CerS2的表达、诱发内质网应激。接下来本研究又探讨了CerS2抑制和内质网应激与Fb诱导的肠屏障损伤的关系。在过表达CerS2的IPEC-J2中,检测Fb处理后TJ以及炎性因子的表达情况。结果表明CerS2过表达有效抑制了Fb引起的TJs表达的下调以及对TNF-α表达的上调。4-苯基丁酸（4-

关键词：伏马毒素b1 肠上皮细胞屏障功能内质网应激神经酰胺合酶

伏马毒素b1单独及其与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合诱导肠道炎症的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

伏马毒素B1单独及其与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合诱导肠道炎症的机制...

作者：毛欣茹南京农业大学

学位级别：硕士

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）是镰刀菌属真菌产生的有毒次生代谢产物,在世界范围内的谷物及饲料中检出率极高,对食品安全、畜牧生产以及人体健康构成巨大威胁。Fb进入机体后首先作用于消化道,引起肠道组织损伤及肠道炎症的发生,但其潜... 详细信息

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）是镰刀菌属真菌产生的有毒次生代谢产物,在世界范围内的谷物及饲料中检出率极高,对食品安全、畜牧生产以及人体健康构成巨大威胁。Fb进入机体后首先作用于消化道,引起肠道组织损伤及肠道炎症的发生,但其潜在的机制有待深入研究。细胞焦亡是一种新型细胞炎性坏死方式,焦亡激活伴有后续炎性内容物的释放,导致病理性炎症发生。自噬是维持细胞成分降解和循环利用的生理过程,自噬水平的改变被证明可以调控细胞焦亡。但目前尚无Fb诱导肠道炎性损伤与焦亡、自噬之间关系的研究报道。Fb和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）混合污染在谷物原料和饲料中检出比例最高,检出率也呈现逐年上升的趋势。因此,评价Fb和DON对肠道的联合毒性及其潜在机制可提高对Fb和DON肠毒性的认识,为饲料及原材料中Fb和DON的限量标准制定提供重要参考依据。本研究首先选用C57bL/6小鼠和小肠上皮细胞系（IPEC-J2）作为研究模型,研究Fb暴露对肠道及肠上皮细胞的毒性作用并探究其潜在机制;其次通过体内、体外试验相结合,探讨自噬水平改变对Fb诱导肠道炎症的影响;最后评价Fb和DON暴露对肠道的联合毒性作用及其潜在机制。试验一:Fb暴露通过NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡诱导肠道炎症本研究旨在探讨Fb暴露对小鼠肠道炎症和IPEC-J2肠上皮细胞炎性反应的影响及其焦亡机制。本研究结果表明,Fb暴露可引起C57bL/6小鼠小肠绒毛脱落、空肠固有层炎性细胞浸润,并导致小鼠血清中促炎因子（IL-1β、IL-18）含量增加。进一步研究发现,空肠中炎性因子（IL-1β、IL-18）和焦亡相关基因（NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD）m RNA和蛋白表达水平在Fb处理后显著上调。体外试验中,Fb处理导致IPEC-J2细胞表现出细胞肿胀、细胞膜破裂、PI内流增多等明显焦亡样变。同体内结果相似,Fb暴露导致细胞内焦亡相关基因（NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD）和炎性因子（IL-1β、IL-18）的m RNA及蛋白表达水平也呈现上升趋势。使用特异性抑制剂MCC950抑制NLRP3后,Fb暴露诱导的IPEC-J2细胞内焦亡相关基因的蛋白表达水平、炎性因子（IL-1β、IL-18）的分泌和PI内流均被阻断。本研究结果提示,Fb暴露可以通过上调NLRP3炎症小体介导的焦亡来诱导小鼠肠道炎症和肠上皮细胞炎性反应。本研究结果为深入揭示Fb的肠毒性效应提供了新思路。试验二:自噬在Fb暴露诱导肠道炎症中的调控作用自噬可以通过去除受损的细胞器或直接降解炎症小体组分来负调节NLRP3炎症小体活化,但其在Fb暴露诱导肠道炎症中的作用还不明确。本研究结果表明,Fb暴露可以促进小鼠空肠和IPEC-J2细胞自噬相关蛋白LC3-I向LC3-II转化以及ATG5表达,表明自噬水平的升高。此外,Fb暴露可以诱导IPEC-J2细胞内线粒体功能障碍以及胞内ROS聚集。进一步研究发现,Fb暴露抑制了体内外m TOR磷酸化水平。使用m TOR激动剂MHY1485促进m TOR磷酸化、抑制自噬水平后发现,MHY1485预处理进一步加剧了Fb暴露诱导的小鼠空肠及IPEC-J2细胞中焦亡相关基因（NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD）的表达、肠道炎性损伤（肠道变短、肠绒毛受损脱落、肠道炎性因子表达增加）及肠细胞炎性反应。使用m TOR抑制剂Rapamycin促进自噬后,Fb暴露诱导的体内外焦亡相关基因（NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD）的表达被抑制,肠道损伤和肠细胞炎性反应得到缓解。此外,NLRP3特异性抑制剂MCC950的应用对m TOR磷酸化水平的影响甚微。本研究结果提示,自噬的进一步激活可以通过限制NLRP3炎症小体活化及抑制焦亡来缓解Fb暴露诱导的肠道炎症。本研究结果可为预防或治疗Fb肠毒性提供新靶点和新思路。试验三:Fb与DON联合暴露通过NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡加剧肠道炎症目前,Fb和DON混合污染阳性检出比例最高,探究Fb和DON对肠道的联合毒性及其潜在机制对提高饲料及食品中Fb和DON的限量标准具有深远意义。本研究结果表明,每日灌胃100μg/kg ***和25μg/kg *** 30天可导致严重的肠道损伤,表现为肠绒毛萎缩、肠上皮脱落等;促进小鼠血清中炎性因子（IL-1β、IL-18）的分泌,尤其是毒素联合组。进一步研究发现,小鼠空肠中炎性因子（IL-1β、IL-18、IL-6）与焦亡相关基因（NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD）的m RNA及蛋白表达水平在Fb和DON暴露后显著上调,尤其是在联合组中。我们在IPEC-J2细胞中观察到Fb和DON单

关键词：伏马毒素b1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇焦亡 NLRP3炎症小体自噬肠道炎症

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素b1快速定量检测卡的制备及应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

粮油食品科技 2022年第4期30卷 164-171页

作者：刘洪美郑梦瑶袁华山王平东赵皖肖理文叶金王松雪国家粮食和物资储备局科学研究院粮油质量安全研究所北京102629 南京中储粮粮油质监中心有限公司江苏南京211151 南京微测生物科技有限公司江苏南京210031

为了满足粮食谷物中伏马毒素b1快速定量检测的需求,以伏马毒素b1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的Fb1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测... 详细信息

为了满足粮食谷物中伏马毒素b1快速定量检测的需求,以伏马毒素b1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的Fb1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物(大米、玉米、小麦)中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37~37.17μg/kg之间,LOQ在117.9~123.9μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250~6000μg/kg,相关系数R2在0.9972~0.9995之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%~114.66%,变异系数(CV)小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素b1荧光定量快速检测卡同时检测Fb1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%~106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的Fb1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素b1现场化快速定量检测的需求。

关键词：伏马毒素b1 快速定量检测时间分辨荧光纳米微球荧光定量免疫层析

核酸适配体功能化磁珠在伏马毒素b1分离检测中的应用研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

核酸适配体功能化磁珠在伏马毒素B1分离检测中的应用研究

作者：邓梅南昌大学

学位级别：硕士

伏马毒素(Fumonisin,Fb)是由镰刀菌属产生的致癌性真菌毒素,主要污染玉米等粮食及其制品。Fb1是Fb中最常见且占比最高的一种,因其具有较强的毒性而被国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)列为2b类致癌... 详细信息

伏马毒素(Fumonisin,Fb)是由镰刀菌属产生的致癌性真菌毒素,主要污染玉米等粮食及其制品。Fb1是Fb中最常见且占比最高的一种,因其具有较强的毒性而被国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)列为2b类致癌物。目前检测Fb1的方法主要为仪器法和免疫学方法,但是存在操作复杂、成本高、受食品基质干扰或灵敏度低等缺陷。因此,建立准确、低成本且抗基质干扰能力强的Fb1检测方法具有重要意义。近年来,磁分离作为一种样本前处理技术,逐渐被应用于毒素样本的前处理,该技术具有操作简单、消除食品基质干扰及提高灵敏度等优势。本研究以适配体(Aptamer,Apt)作为识别分子,并引入聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)作为介导物来减小空间位阻和增加适配体负载量以达到更高的识别效率,制备PEG介导的适配体功能化磁珠(Magnetic beads,Mbs)(Apt-PEG-Mbs),并联合超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)、比色法和荧光法,建立富集和检测玉米粉中Fb1的方法,各章内容分述如下:第一章:介绍了检测Fb1的方法,并综述了核酸适配体功能化磁珠在真菌毒素检测中应用的研究进展。第二章:为了实现对玉米粉中Fb1的富集分离与检测,研究建立基于Apt-PEG-Mbs结合UPLC检测Fb1的方法。本研究以适配体作为识别分子,PEG作为介导物,合成了Apt-PEG-Mbs,其能够特异性地与目标毒素Fb1结合,得到Fb1@Apt-PEG-Mbs复合物,随后将该复合物在90C条件下加热10min,Fb1从Fb1@Apt-PEG-Mbs复合物中解离下来,最后通过UPLC实现对Fb1的检测。在最优条件下,该方法对磷酸盐缓冲液(Phosphate-buffered saline,PbS)中Fb1的检测限(Limit of detection,LOD)和定量限(Limit of quantitation,LOQ)分别为1.25 ng/m L、3.50 ng/m L,对玉米粉加标样中Fb1的LOD和LOQ分别为3.75 ng/m L、8.20 ng/m L。研究表明所建立的方法可用于玉米粉中Fb1的检测,且方法准确度高、特异性较好。第三章:为了实现对玉米粉中Fb1的快速灵敏检测,研究建立基于Apt-PEG-Mbs联合酪胺信号放大(Tyramine signal amplification,TSA)检测Fb1的方法。首先投入与适配体部分互补的生物素修饰的DNA(biotin-complementary DNA,biotin-c DNA),其能够与Apt-PEG-Mbs上的适配体结合,形成c DNA@Apt-PEG-Mbs复合物,再加入Fb1竞争c DNA结合位点,磁分离后加入链霉亲和素化的辣根过氧化物酶(Streptavidin-horseradish peroxidase,SA-HRP)与Apt-PEG-Mbs上剩余的c DNA通过生物素-亲和素系统(biotin-avidin system,bAS)结合。随后引入TSA技术,实现信号放大。在最佳实验条件下,Apt-PEG-Mbs结合普通比色法对PbS和玉米粉加标样中Fb1的LOD分别为0.49 ng/m L、0.61 ng/m L,且特异性较好,Apt-PEG-Mbs联合TSA比色法对PbS和玉米粉加标样中Fb1的LOD分别为0.02 ng/m L、0.03 ng/m L。研究表明所建立的方法可用于玉米粉加标样中Fb1的检测,且灵敏度得到了提高。第四章:为了进一步提高检测玉米粉中Fb1的灵敏度,研究建立基于Apt-PEG-Mbs和滚环扩增(Roll circle amplification,RCA)技术的荧光传感器,并将其用于Fb1的检测。首先投入与适配体部分互补的DNA,形成c DNA@Apt-PEG-Mbs复合物,再加入Fb1竞争c DNA结合位点,将竞争下的游离c DNA投入到RCA反应体系中,其能够作为引物引发RCA反应并产生大量能够形成G-四链体结构的RCA产物。随后向体系中加入硫黄素T(Thioflavin T,Th T),Th T嵌入G-四链体,荧光信号得到增强,从而实现对Fb1的荧光检测。结果发现该方法对PbS和玉米粉加标样中Fb1的LOD分别为0.011 ng/m L、0.014 ng/m L,且方法特异性较好。研究表明所建立的荧光传感器可用于玉米粉加标样中Fb1的快速检测,且该荧光传感器具有灵敏度高、便捷等优点。综上所述,本研究基于Apt-PEG-Mbs联合UPLC法、比色法以及荧光法建立了三种检测Fb1的方法,并用玉米粉加标

关键词：伏马毒素b1 适配体功能化磁珠超高效液相色谱酪胺信号放大滚环扩增

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

厚朴酚对伏马毒素b1致神经炎症的保护作用

厚朴酚对伏马毒素B1致神经炎症的保护作用

作者：刘思佳天津科技大学

学位级别：硕士

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）广泛存在于饲料原料及饲料中,并对人和动物造成严重的健康风险,目前仍难以彻底有效的清除其对畜禽机体的损害。因此,探寻Fb神经炎症的防控方法和策略已经成为畜禽养殖和人类食品安全的迫切需要。从中草药厚... 详细信息

伏马毒素b（Fumonisin b,Fb）广泛存在于饲料原料及饲料中,并对人和动物造成严重的健康风险,目前仍难以彻底有效的清除其对畜禽机体的损害。因此,探寻Fb神经炎症的防控方法和策略已经成为畜禽养殖和人类食品安全的迫切需要。从中草药厚朴中提取的厚朴酚已被证实对镰刀菌具有较强的抗真菌活性,且厚朴酚用于治疗焦虑、抑郁等神经损伤性疾病历史悠久并具有抗炎活性,因此本文以C6星形胶质细胞和斑马鱼为模型探究了厚朴酚对Fb诱导神经炎症的保护作用,并基于转录组学探讨了其分子机制。本研究首先探究了不同浓度厚朴酚对Fb诱导的C6细胞毒性保护作用。厚朴酚可以通过提高细胞存活率,恢复细胞形态及染色质分布发挥对Fb致C6细胞毒性的保护作用,且厚朴酚可以在一定程度上缓解Fb诱导的氧化损伤。通过对差异表达基因中的重合基因进行显著性分析,发现原癌基因Fos,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Camk2d、Taok2等基因在厚朴酚对Fb致C6细胞毒性的机制中起到关键作用,这些基因与PI3K信号通路、钙离子调节、细胞凋亡及TNF信号通路相关。随后我们选择80μM厚朴酚进行保护机制的进一步探究。我们发现厚朴酚可以缓解Fb诱导的细胞凋亡及细胞周期停滞。伏马毒素b损伤导致线粒体跨膜电位崩溃,厚朴酚干预之后,跨膜电位丢失情况得到改善;同时Fb处理后Ca水平升高,厚朴酚的加入使Ca水平降低。在蛋白水平及m RNA表达水平的验证中,我们发现厚朴酚可能会通过激活PI3K/Akt的磷酸化进程并抑制IKKα/NF-κb通路的表达,并使Fb诱导的C6细胞内促炎因子表达回调来缓解伏马毒素b诱导的神经炎症。最后我们利用野生Ab型斑马鱼进行体内保护作用的探究。选择50 mg/L的Fb及0.1、0.5、1 mg/L的厚朴酚作为给药剂量,从24 hpf-120 hpf的斑马鱼发育进程中,我们发现,血液凝固、脊柱弯曲等情况均有不同程度的发生。此外,Fb导致斑马鱼发生了心率迟缓,且体长发育缓慢和卵黄囊肿大,而厚朴酚可以显著调节此现象的发生。且厚朴酚使Fb诱导的细胞凋亡现象得到缓解。综上,本研究旨在探究厚朴酚对Fb诱导神经炎症的保护作用,通过对C6细胞体外培养结合转录组学技术进行机制探究,结合蛋白质表达水平及m RNA表达水平上的验证明确部分机制,最终在斑马鱼体内再次验证了厚朴酚的保护作用。实验结果为降低Fb暴露风险和毒性危害提供理论依据,进而保障食品安全与人类健康。

关键词：伏马毒素b1 厚朴酚转录组学信号通路分子机制

基于聚集诱导发光的伏马毒素b1定量免疫层析试纸条产品的开发

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于聚集诱导发光的伏马毒素B1定量免疫层析试纸条产品的开发

作者：徐舸南昌大学

学位级别：硕士

伏马毒素是一类主要由镰刀菌(Fusarium)产生的真菌毒素,常污染玉米等农作物。目前,已发现的伏马毒素有FA1、FA2、Fb1、Fb2、Fb3、Fb4、FC1、FC2等28种,其中伏马毒素b1(Fb1)是主要组分,也是毒性最强的成分。目前,Fb1主要通过仪器分析法... 详细信息

伏马毒素是一类主要由镰刀菌(Fusarium)产生的真菌毒素,常污染玉米等农作物。目前,已发现的伏马毒素有FA1、FA2、Fb1、Fb2、Fb3、Fb4、FC1、FC2等28种,其中伏马毒素b1(Fb1)是主要组分,也是毒性最强的成分。目前,Fb1主要通过仪器分析法进行检测,虽然该方法具有良好的准确性和可靠性,但需要昂贵的设备、复杂的程序和熟练的技术人员,限制了Fb1的现场即时快速检测。侧流免疫层析方法(Lateral flow immunoassay,LFIA)具有快速简单、灵敏度高、特异性好且成本低廉等优势,在食品安全及资源匮乏地区的现场快速筛查中发挥了重要的作用。基于荧光微球的LFIA因其能够实现食品安全的快速、灵敏监测而受到广泛关注。然而,传统荧光微球受到荧光染料聚集导致淬灭(Aggregation-caused quenching,ACQ)效应的限制,其荧光信号强度较低,检测灵敏度不高。本研究采用微乳液法将具有聚集诱导发射(Aggregation-induced emission,AIE)特征的绿色荧光团包裹在聚合物纳米颗粒中,成功制备了超亮AIE荧光微球(AIEMbs)。随后,以AIEMbs作为信号探针开发竞争性LFIA(AIE-LFIA)用于玉米样品中Fb1的快速高灵敏检测。在最优实验条件下,本研究所建立的AIE-LFIA检测玉米样本中Fb1的回归方程为y=-0.189ln(x)+0.1923,线性范围为0.024 ng/m L～3.125 ng/m L,半数抑制浓度(IC)为0.20 ng/m L,最低检出限(LOD)为0.024 ng/m L。加标回收实验显示该方法的批内和批间加标回收率为84.8%～114.0%,变异系数为4.05%～7.82%。此外,该方法与其他常见真菌毒素未见明显交叉反应。以上结果表明,该AIE-LFIA具有良好的选择性、准确性和可靠性,为Fb1的快速灵敏筛查提供了新的技术支撑。相比传统单信号LFIA,双信号LFIA可以整合不同检测信号的优点,基于双信号探针的免疫层析方法也因其优异的分析性能和巨大的应用潜力成为研究的热点。此外,双信号LFIA的检测结果间可以相互佐证,使检测结果更加准确可靠。本研究通过微乳液法掺杂油溶性金纳米粒子(OA-Au NPs)和聚集诱导发光染料(AIEgens)成功制备了荧光比色双信号微球(AIE@Au NPs)。该微球同时集成了AuNPs优异的比色信号和AIEgens优异的发光信号,从而实现比色荧光双模式信号输出。随后,本研究使用该AIE@Au NPs材料作为检测探针建立了高灵敏定量检测玉米样本中Fb1的比色/荧光双模式免疫层析方法(AIE@Au-LFIA)。在最优实验条件下,该AIE@Au-LFIA方法基于比色和荧光模式检测玉米样本中Fb1的IC值分别为0.20 ng/m L和0.23 ng/m L,线性范围分别为0.078～0.625 ng/m L和0.039～2.5 ng/m L。以上结果表明,本研究所建立的AIE@Au-LFIA方法两种检测模式的灵敏度相似,但荧光信号的线性范围更宽。因此,本研究基于AIE@Au NPs建立的比色/荧光双模式AIE@Au-LFIA方法因其具有更高的准确性,在现场快速检测中具有较好的应用潜力。

关键词：侧流免疫层析伏马毒素b1 聚集诱导发光微球双功能微球