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兔角膜内皮细胞压力仿生培养及调控机制的研究

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兔角膜内皮细胞压力仿生培养及调控机制的研究

作者：胡晓琴南昌大学

学位级别：硕士

目的本研究拟通过体外压力培养平台,分析不同压力梯度下角膜内皮细胞的形态和结构特点,以及其生物学功能的变化规律。探讨正常眼压对角膜内皮细胞活性的正向调节作用,为建立旨在提高角膜内皮细胞培养质量的三维仿生培养系统提供理论依据... 详细信息

目的本研究拟通过体外压力培养平台,分析不同压力梯度下角膜内皮细胞的形态和结构特点,以及其生物学功能的变化规律。探讨正常眼压对角膜内皮细胞活性的正向调节作用,为建立旨在提高角膜内皮细胞培养质量的三维仿生培养系统提供理论依据,构建工程化角膜内皮细胞移植膜。阐明病理性高眼压下角膜内皮细胞损伤的病理基础和调控环节,为青光眼治疗策略中的内皮细胞保护提供实验依据。方法第一部分角膜内皮细胞培养技术的改良将带有兔角膜内皮细胞的后弹力层完整撕下,胰蛋白酶-EDTA联合酶化,纯化的角膜内皮细胞进行体外培养。倒置显微镜下观察细胞形态,描记细胞生长倍增曲线。神经元特异性烯醇化酶抗体进行细胞表型鉴定。苏木素-伊红(HE)染色以及茜素红-台盼兰联合染色分析细胞活性,流式细胞仪检测细胞体外生长过程中AnnexinⅤ-PE的表达情况,透射电镜和扫描电镜进行细胞超微结构形态的观察。第二部分角膜内皮细胞压力仿生培养的研究设计并制作自动充压范围为0～60mmHg的压力维持培养装置,测定预设压力的维持时间,确定自动充压的时间点。将接种了传代角膜内皮细胞的培养板放入压力预设为2KP(14.66mmhg)的压力维持培养装置中,进行持续培养。观察细胞的形态,形成单层的时间,描记细胞倍增曲线。形成单层后茜素红-台盼兰联合活性染色评价细胞活性,正常压力培养过程中,激光共焦显微镜检测细胞连接蛋白ZO-1表达部位和表达强度,评价细胞间连接功能的建立情况。免疫荧光法追踪Caspase-3表达,流式细胞技术检测压力培养下AnnexinV-PE阳性细胞的比例。第三部分三维压力仿生培养构建工程化角膜内皮细胞移植膜胰酶消化去除羊膜上皮细胞,保留基底膜作为载体,接种纯化兔角膜内皮细胞,在压力培养系统中,进行三维仿生培养,构建工程化角膜内皮细胞移植膜。HE染色,电镜观察构建移植膜的组织结构及形态,免疫荧光分析ZO-1蛋白的表达。第四部分高压力作用下角膜内皮细胞损伤机制研究增压培养装置内给予持续高压3.2kp～4.6kp (24.06mmhg～34.59mmhg)、5.4kp～6.8kp(40.60mmhg～51.29mmhg),观察角膜内皮细胞形态以及增殖活性的变化,评估角膜内皮细胞生物学活性与压力强度以及持续时间的相关性,检测早期凋亡因子Caspase-3、AnnexinV的表达规律。结果1.后弹力层撕除联合酶消化法获得大量纯化的角膜内皮细胞,快速贴壁生长并增殖,体外培养3～4 d即融合成单层细胞,表达神经元特异性烯醇化酶抗体阳性, HE染色及活性染色提示细胞功能良好。2.生理压力环境培养下的角膜内皮细胞生长活性良好,细胞立体感强、外形扁平,细胞间连接紧密,细胞膜及交界区ZO-1蛋白高水平表达,更接近机体生理状态下生长的内皮细胞。生理压力下未见明显的细胞凋亡现象。3.压力培养系统中,角膜内皮细胞接种于脱细胞羊膜后,快速生长并增殖,3～4d即融合成单层,其形态及生长密度优于单纯培养皿上培养的内皮细胞。HE染色及电镜显示构建的工程化内皮植片具有与生理角膜内皮组织相近的组织结构。4.高压环境下培养的角膜内皮细胞,增殖缓慢,胞体大而透明,胞浆内含较多的颗粒,细胞间隙增宽。随着培养时间的增长,Caspase-3、AnnexinV表达增强,凋亡细胞比例显著增加。结论1.角膜后弹力层撕除联合酶消化法可提高角膜内皮细胞的获取和培养效率,该方法提取的角膜内皮细胞纯,细胞数量较多,细胞生长良好,同时减少了上皮、基质引起细胞性污染的风险,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供稳定的种子细胞来源。2.低压力仿生培养环境,对角膜内皮细胞的功能有正向调节作用,可促进体外培养角膜内皮细胞之间连接功能的建立,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供了新的环境模式诱导平台。3.低压力三维仿生培养系统中,以脱细胞羊膜为载体,可构建细胞密度、形态以及组织结构与生理内皮相似的工程化内皮细胞移植膜,为角膜内皮细胞移植研究进行了前期技术储备。4.高压力对角膜内皮细胞有损伤作用,通过引起细胞凋亡的途径来实现,呈现出时间-量效曲线,Caspase-3、AnnexinV是细胞凋亡启动的关键因子。

关键词：角膜内皮细胞压力仿生培养羊膜生物组织工程细胞凋亡

环境胁迫对珊瑚共附生真菌Aspergillus ochraceus LCJ11-102次生代谢产物的影响

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微生物学报 2010年第8期50卷 1023-1029页

作者：周雅琳王乂刘培培王智颖朱伟明中国海洋大学医药学院青岛266003

【目的】研究环境胁迫对珊瑚共附生真菌Aspergillus ochraceus的次生代谢的影响,寻找活性代谢产物。【方法】采用仿生培养和高盐胁迫两种不同的发酵条件对菌株进行液体大发酵,运用HPLC指纹图谱考察发酵产物的化学多样性,采用硅胶柱色谱... 详细信息

【目的】研究环境胁迫对珊瑚共附生真菌Aspergillus ochraceus的次生代谢的影响,寻找活性代谢产物。【方法】采用仿生培养和高盐胁迫两种不同的发酵条件对菌株进行液体大发酵,运用HPLC指纹图谱考察发酵产物的化学多样性,采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用波谱和Mosher方法鉴定化合物的结构。【结果】发现菌株在两种环境胁迫条件下产生了不同的次生代谢产物,从中分别鉴定了4个(1-4)和1个主要化合物5:R(-)-mellein(1)、(5,6-trans,8,9-threo-)-9-chloro-8-hydroxy-8,9-deoxyaspyrone(2)、(5,6-erythro-,8,9-threo-)-9-chloro-8-hydroxy-8,9-deoxyasperlactone(3)、(5S,6R,9S)-dihydroaspyrone(4)和R(+)-semi-vioxanthin(5)。【结论】环境胁迫可以诱导海洋微生物产生不同的次生代谢产物,仿生培养是从海洋微生物中获得氯代产物的有效途径。

关键词：珊瑚共附生微生物赭曲霉仿生培养高盐胁迫次生代谢蕾二岐灯芯柳珊瑚

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粗糙表面对神经胶质细胞三维立体形状的影响

中国生物医学工程学报 2009年第2期28卷 280-284页

作者：王萍王仁芳方文军宁波大学医学院宁波315211 浙江万里学院计算机与信息学院宁波315100 浙江大学化学系杭州310027

模拟大脑内神经元和神经胶质细胞生长的分形环境,构筑具有分形特征的粗糙表面为神经胶质细胞生长提供一个仿生环境。本研究以C6神经胶质细胞为模型,分别在具有分形结构的烷基烯酮二聚体(AKD)表面,以及不具有分形结构的光滑AKD表面和传... 详细信息

模拟大脑内神经元和神经胶质细胞生长的分形环境,构筑具有分形特征的粗糙表面为神经胶质细胞生长提供一个仿生环境。本研究以C6神经胶质细胞为模型,分别在具有分形结构的烷基烯酮二聚体(AKD)表面,以及不具有分形结构的光滑AKD表面和传统的多聚赖氨酸(PLL)表面进行体外细胞培养,用相差显微镜和激光共聚焦显微镜分别观察细胞形状和细胞内微丝纤维排列,用Image J软件分析细胞的三维立体形状。结果显示,分形AKD表面诱导神经胶质细胞具有较好的三维立体形状,细胞内皮层肌动蛋白和应力纤维消失;光滑AKD表面与对照组PLL表面生长细胞的形状和细胞内微丝排列无明显差异。可见,粗糙的分形结构能够诱导C6细胞内微丝纤维重新排列,进而引起细胞具有较好的三维立体形状。

关键词：分形表面神经胶质细胞仿生培养微丝三维立体构建

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高压力对角膜内皮细胞损伤微观机制的研究

眼科 2018年第1期27卷 36-41页

作者：梁玲玲袁进幸正茂廖洪斐南昌大学医学院南昌大学附属眼科医院江西330006 中山眼科中心广州510060 南昌爱尔眼科江西330006

目的探讨高压力对兔角膜内皮细胞损伤的微观机制。设计实验研究。研究对象仿生培养的兔角膜内皮细胞。方法将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCEC)分为五组:A组30 mm Hg压力组,B组压力波动组,将压力... 详细信息

目的探讨高压力对兔角膜内皮细胞损伤的微观机制。设计实验研究。研究对象仿生培养的兔角膜内皮细胞。方法将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCEC)分为五组:A组30 mm Hg压力组,B组压力波动组,将压力设为15~25~20~10 mm Hg,每个压力持续6小时,C组50 mm Hg压力组,D组正常压力组,E组无压力组。免疫法鉴定原代角膜内皮细胞;流式细胞术检测细胞活性;Western蛋白印迹法检测细胞中蛋白Bc L-2和P^(53)表达;RT-PCR检测Fas/Fas L的表达;免疫荧光检测细胞胞浆细胞色素C(Cytc)的表达。主要指标兔角膜内皮细胞蛋白Bc L-2、P^(53)表达以及Fas/Fas L和Cytc的表达。结果获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。细胞分别培养24 h后,流式细胞术分析发现高压力组细胞存活率明显下降,而受损的细胞大部分处于凋亡状态;Western蛋白印迹法结果显示:在30 mm Hg组、50mm Hg组和压力波动组中蛋白P53相对表达量(OPTDI_(P53)/OPTDI_(actin))分别为(0.253±0.014)、(0.670±0.019)、(0.474±0.016),明显高于正常压力组(0.009±0.003)(F=1210,P=0.000);RT-PCR检测各组中各时间段Fas/Fas L的表达均为阴性;在高压力组中,免疫荧光检测发现细胞胞浆中Cytc呈阳性表达。结论高压力对角膜内皮细胞损伤是通过细胞凋亡介导,而压力调控下细胞凋亡途径的启动是角膜内皮细胞Cytc从线粒体释放入胞浆,通过激活凋亡的内源性途径实现。

关键词：超微机制压力仿生培养角膜内皮细胞

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仿生分形表面对神经胶质细胞体外生长的影响

仿生分形表面对神经胶质细胞体外生长的影响

第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议

作者：王萍王仁芳方文军宁波大学医学院浙江万里学院计算机与信息学院浙江大学化学系

大脑内的神经元和神经胶质细胞生长在典型的分形环境中,构筑分形表面可为神经胶质细胞生长提供一个仿生环境。本文以C6神经胶质细胞为模型,分别在具有分形结构的烷基烯酮二聚体(AKD)表面、以及不具有分形结构的光滑AKD表面和传统的多聚... 详细信息

大脑内的神经元和神经胶质细胞生长在典型的分形环境中,构筑分形表面可为神经胶质细胞生长提供一个仿生环境。本文以C6神经胶质细胞为模型,分别在具有分形结构的烷基烯酮二聚体(AKD)表面、以及不具有分形结构的光滑AKD表面和传统的多聚赖氨酸(PLL)表面进行

关键词：分形表面神经胶质细胞仿生培养微丝三维立体构建

来源： cnki会议评论

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波动的压力对兔角膜内皮细胞的影响

眼科新进展 2015年第12期35卷 1125-1128页

作者：幸正茂梁玲玲袁进南昌爱尔眼科江西省南昌市330006 江西新视界眼科医院南昌大学江西省南昌市330006 中山大学中山眼科中心广东省广州市510060

目的观察波动的压力对角膜内皮细胞的影响。方法将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为两组:A组为压力波动组(压力设置为:15 mm Hg^25 mm Hg^20 mm Hg^10 mm Hg,每个压力持续6 h;1 kPa=7.5 mm Hg);B组为30 mm Hg压力组;C组为无压力组。... 详细信息

目的观察波动的压力对角膜内皮细胞的影响。方法将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为两组:A组为压力波动组(压力设置为:15 mm Hg^25 mm Hg^20 mm Hg^10 mm Hg,每个压力持续6 h;1 kPa=7.5 mm Hg);B组为30 mm Hg压力组;C组为无压力组。三组细胞分别培养24 h。免疫细胞化学染色法鉴定原代角膜内皮细胞形态;台盼蓝-茜素红联合染色检测细胞活性,HE染色观察细胞形态;Western-blotting检测细胞中Bcl-2和P53蛋白的表达水平。结果获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。三组细胞分别培养24 h后,经台盼蓝-茜素红染色和HE染色证实:两个压力培养组的细胞活性较无压力培养组明显下降,其中压力波动组的细胞活性低于30 mm Hg压力组。同时无压力组、30 mm Hg压力组和压力波动组细胞中P53蛋白的相对表达量分别为0.150±0.005、0.253±0.014、0.670±0.019,差异有统计学意义(P<0.05)。结论证实了高压力及非生理性波动的压力对角膜内皮细胞均具有损伤作用。

关键词：压力仿生培养角膜内皮细胞微环境

载毛乳头细胞团的海藻酸钠/GelMA双网络活性凝胶构建及其在创面修复中的应用

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载毛乳头细胞团的海藻酸钠/GelMA双网络活性凝胶构建及其在创面修...

作者：萧学敏华南理工大学

学位级别：硕士

皮肤是人体与环境之间直接接触的界面,发挥着保护人体免受外部刺激维持人体内环境稳态的屏障功能,而从微观层面分析皮肤屏障功能其实主要由表皮承担,因而加速创伤部位再上皮化、形成更好的上皮结构对皮肤屏障功能维持至关重要。而毛乳... 详细信息

皮肤是人体与环境之间直接接触的界面,发挥着保护人体免受外部刺激维持人体内环境稳态的屏障功能,而从微观层面分析皮肤屏障功能其实主要由表皮承担,因而加速创伤部位再上皮化、形成更好的上皮结构对皮肤屏障功能维持至关重要。而毛乳头细胞（DPCs）是一类特化的成纤维细胞,在上皮-间充质作用中发挥着重要作用,能促进角质细胞迁移、分层分化形成结构更完整的人工上皮组织;但关于其促皮肤修复却少有涉及。为了探究毛乳头细胞促表皮组织修复性能并改善单纯凝胶促组织再生活性不足的问题,我们以毛乳头细胞作为活性介质构建了载毛乳头细胞团的活性凝胶材料,利用大鼠皮肤全层缺损模型探究了该活性凝胶对于创面修复的作用。具体内容如下:（1）分离鉴定毛乳头细胞探究了其促创面修复的潜能。结果表明毛乳头细胞有着较高的表皮生长因子（EGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和骨形态蛋白-4（BMP4）分泌,VEGF和BMP4分泌量比皮肤成纤维细胞分别高出4倍和20倍;同时其条件培养基可明显促进HUVCs增殖及迁移;（2）构建半球微阵列平台用于毛乳头仿生培养,探究该平台对毛乳头细胞团的影响。发现该平台有着快速、高效的促细胞聚集效果,聚集后细胞仍具有生物活性、仍特异性表达ALP,可用于长期培养及观察;同时毛乳头细胞在聚集培养与二维培养相比BMP4以及VEGF基因的相对表达量分别高2.2倍和3.7倍,实现蛋白直接浓缩简化富集操作避免蛋白损耗。（3）构建了海藻酸盐/GelMA双网络凝胶并实现毛乳头细胞团的成功包载,利用大鼠全层缺损模型探究了载毛乳头细胞团活性凝胶促创面修复的性能。结果表明活性凝胶有着最快的愈合速率和最小的遗留创口;在微观组织形成中毛乳头细胞的存在可以显著促进上皮舌的迁移,而细胞团可促进形成厚度更接近正常表皮的新生表皮,同时还促进腺体及血管网络成熟。本文从旁分泌水平验证了毛乳头细胞优异的促组织修复性能,并通过仿生培养平台得到了毛乳头细胞团并将其载入生物相容性优异的双网络凝胶中,构建了一种新型的载三维细胞团的活性凝胶材料,研究了其促创面修复性能,发现其能加速再上皮化进程,形成的表皮组织厚度也与正常表皮更接近,扩宽了毛乳头细胞的应用形式及范围。

关键词：创面修复毛乳头细胞仿生培养水凝胶海藻酸钠 GelMA

聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶的制备与性能研究

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聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶的制备与性能研究

作者：孟德悦吉林大学

学位级别：硕士

水凝胶材料具有亲水性强、含水率高、生物相容性良好及一定的成膜性、力学性能与弹性等优点,自20世纪60年代以来被广泛研究。聚乙烯醇(PVA)的链结构简单规整并含有大量的羟基、无毒副作用,由其制备的水凝胶易于成型、化学性质稳定,因此... 详细信息

水凝胶材料具有亲水性强、含水率高、生物相容性良好及一定的成膜性、力学性能与弹性等优点,自20世纪60年代以来被广泛研究。聚乙烯醇(PVA)的链结构简单规整并含有大量的羟基、无毒副作用,由其制备的水凝胶易于成型、化学性质稳定,因此以PVA为基质的水凝胶一直是水凝胶材料的研究热点,并被广泛应用在园林农艺、日用化工、环境保护及食品工业等领域。PVA水凝胶还具有优良的生物相容性与降解性,被视为是一种较理想的生物材料,在生物医学领域具有重要的潜在应用。目前,基于PVA水凝胶的研究,已经突破了单一基质与技术的局限,将PVA与天然聚合物、合成高分子及纳米粒子等材料进行复合,以克服单一水凝胶在力学性能与生物活性等方面的不足,并赋予其新的特性,拓展了PVA基水凝胶的应用范围。本研究将羟基磷灰石(HA)引入PVA水凝胶中,采用原位制备法在PVA水溶液中合成HA纳米粒子,结合循环冻融及辐射交联的成型技术,制备了PVA/HA复合水凝胶,并对产物的结构、力学性能、交联程度及生物活性进行了评价。取得的研究成果如下:1.将原位合成法与循环冻融成型技术相结合,制得一系列物理交联PVA/HA复合水凝胶。探讨了pH值为10的条件下,原位合成过程中PVA与HA的相互作用机理。通过调节PVA与HA的比例,实现对复合水凝胶的多孔结构、力学性能、含水率及吸水率的调控。在循环冻融前调节体系pH至中性,探讨了pH值对复合水凝胶结构与性能的影响。2.采用辐射交联与循环冻融相结合的方法,合成了一系列双交联网络PVA/HA复合水凝胶,并对其形成过程进行了研究。探讨了电子束辐射剂量对复合水凝胶结构、交联程度及力学性能的影响。辐射剂量的适量增加会促使PVA/HA复合水凝胶的结构更加致密、交联程度与抗拉伸性能逐渐提升;辐射剂量过高,降解作用逐渐明显,复合水凝胶的抗拉伸性能与交联度有所下降。3.配置模拟体液(SBF),对辐射-冷冻双交联PVA/HA复合水凝胶进行了体外培养。分析了培养过程中SBF与复合水凝胶间的相互作用。对不同培养时间下复合水凝胶的结构、形貌、含水量及抗拉伸性能的变化进行探究。在培养的过程中,HA的晶体结构进一步完善,PVA骨架逐渐增厚,孔隙率逐渐降低。PVA/HA复合水凝胶在SBF中能够保持一定的含水量与抗拉伸性能,稳定性较高,有望应用在骨组织工程领域。

关键词：水凝胶聚乙烯醇羟基磷灰石原位复合辐射交联仿生培养

角膜内皮细胞压力调控及高压力损伤机制的研究

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角膜内皮细胞压力调控及高压力损伤机制的研究

作者：梁玲玲南昌大学

学位级别：硕士

目的:本研究拟通过体外压力培养平台,分析不同压力梯度下角膜内皮细胞的形态和结构特点,以及其生物学功能的变化规律。探讨正常眼压对角膜内皮细胞活性的正向调节作用,为建立旨在提高角膜内皮细胞培养质量的三维仿生培养系统提供理论依... 详细信息

目的:本研究拟通过体外压力培养平台,分析不同压力梯度下角膜内皮细胞的形态和结构特点,以及其生物学功能的变化规律。探讨正常眼压对角膜内皮细胞活性的正向调节作用,为建立旨在提高角膜内皮细胞培养质量的三维仿生培养系统提供理论依据;阐明病理性高眼压下角膜内皮细胞损伤的病理基础和调控环节,为青光眼治疗策略中的内皮细胞保护提供实验依据。方法:第一部分角膜内皮细胞体外常规培养将带有兔角膜内皮细胞的后弹力层完整撕下,0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA联合酶化,纯化的角膜内皮细胞进行体外培养。倒置显微镜下观察细胞形态,神经元烯醇化酶抗体进行细胞表型鉴定, HE染色观察细胞形态结构,分析培养角膜内皮细胞的活性与纯度。第二部分角膜内皮细胞正常压力仿生培养设计并制作自动充压范围为0～75mmHg的压力维持培养装置,测定预设压力的维持时间,确定自动充压的时间点。将接种了传代角膜内皮细胞的培养板放入压力预设为2KP的压力维持培养装置中,进行持续培养。倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律, HE染色及扫描和透射电镜分析细胞结构的变化,茜素红-台盼兰联合染色和AnnexiV-PI流式细胞术分析细胞活性。第三部分高眼压对角膜内皮细胞损伤机制的研究通过体外仿生培养系统,模拟临床青光眼的病理过程,将压力分为压力急性增高组（50mmHg）、压力慢性增高组（30mmHg）、波动组（15mmHg5 mmHg 0 mmHg 0 mmHg）、正常压力组（15mmHg）作为对照组。倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律, HE染色分析细胞结构的变化,茜素红-台盼兰联合染色和AnnexiV-PI流式细胞术分析细胞活性, RT-PCR分析Fas/FasL在压力作用下的表达规律,Western-blotting检测不同压力组凋亡相关蛋白BcL-2和P53的时空量化曲线,免疫荧光观察凋亡启动后细胞内Cytc的表达强度及范围。结果:1、后弹力层撕除联合酶消化法获得大量纯化的角膜内皮细胞,快速贴壁生长并增殖,体外培养3～4 d即融合成单层细胞,表达神经元烯醇化酶抗体阳性, HE染色及活性染色提示细胞功能良好。2、生理压力环境培养下的角膜内皮细胞生长活性良好,细胞立体感强、外形扁平呈六边形,细胞间连接紧密,更接近机体生理状态下生长的内皮细胞。生理压力下未见明显的细胞凋亡现象。3、高压环境下培养的角膜内皮细胞,增殖缓慢,胞体大而透明,胞浆内含较多的颗粒,细胞间隙增宽。随压力越高,培养时间的增长, AnniexV表达增强,凋亡细胞比例显著增加。4、RT-PCR未检测到Fas/Fasl的表达,高压持续作用下凋亡相关蛋白P53的表达显著上调,Bcl-2表达则随之下降,使用抑制剂预处理的细胞,其蛋白P53的表达较未预处理的细胞明显下降,Bcl-2表达明显增加。高压组角膜内皮细胞胞浆中Cytc的阳性表达显著增加。结论:1.正常压力仿生培养环境,对角膜内皮细胞的功能有正向调节作用,诱导角膜内皮细胞骨架的改变,使其物理形态更接近体内的角膜内皮细胞,同时促进体外培养角膜内皮细胞之间连接功能的建立,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供了新的环境模式诱导平台。2.眼压的波动性与角膜内皮细胞的损伤之间存在相关性,高压力对角膜内皮细胞有损伤作用,导致细胞凋亡的发生,并且呈现时间-量效曲线。3.压力调控下细胞凋亡启动途径是角膜内皮细胞Cytc从线粒体释放入胞浆,通过激活凋亡的内源性途径实现。4. Caspase9可以作为青光眼高眼压对角膜内皮细胞损伤的药物干预靶点,为青光眼治疗策略中的内皮细胞保护提供实验依据。

关键词：角膜内皮细胞压力仿生培养凋亡