检索结果-南通市图书馆

作者：刘秋蕊山东农业大学

学位级别：硕士

农药作为一种化学制剂,被广泛应用于调节植物生长和防治农林牧业生产中的有害生物,但农药残留造成的土壤、水体的污染及对人体产生的危害也不容忽视。有机磷农药种类繁多且田间复配现象普遍,因此需要建立一个快速简便的农药多残留检测... 详细信息

农药作为一种化学制剂,被广泛应用于调节植物生长和防治农林牧业生产中的有害生物,但农药残留造成的土壤、水体的污染及对人体产生的危害也不容忽视。有机磷农药种类繁多且田间复配现象普遍,因此需要建立一个快速简便的农药多残留检测方法。传统的检测方法虽然灵敏度和精确度高,但材料消耗大,仪器昂贵,对操作人员要求高等缺点限制了其应用,而免疫分析方法具有灵敏、简便、快速的优点。同时量子点尺寸小且具有独特的光学性能和标记性能,其一元激发多源发射的特点为多残留检测提供可能。本实验结合量子点标记技术和分子印迹技术,建立了果蔬中有机磷农药多残留快速检测方法。主要研究结果如下:1.基于量子点标记仿生分析免疫检测敌百虫的方法。以敌百虫为模板分子,通过本体聚合法,直接在96孔酶标板表面合成亲水性水相分子印迹膜作为仿生抗体,通过直接竞争反应,建立仿生免疫(BIA)分析方法。实验表明,在最佳条件下,该BIA方法的最低检出限(LOD,IC)和灵敏度(IC)分别为9.0μg L和5.0 mg L。本方法对三个浓度水平的菠菜和油菜样品敌百虫添加回收率为83.3%-90.2%,该方法还应用于黄瓜、韭菜实际样中敌百虫的定量检测,与气相色谱结果对比,无显著差异。2.基于量子点标记仿生免疫农药多残留检测方法的研究。以敌百虫和毒死蜱为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,通过本体聚合方法,直接在96孔酶标板上合成复合分子印迹膜作为仿生抗体,用不同量子点分别标记敌百虫和毒死蜱半抗原作为抗原,建立仿生免疫分析方法。在最优条件下,该方法对敌百虫的最低检测线(LOD,IC)和灵敏度(IC)分别为19.0μg L和9.0 mg L,对毒死蜱的最低检测线(LOD,IC)和灵敏度(IC)分别为18.0μg L和11.0 mg L。本方法对橙子和胡萝卜的添加回收率为77.8%-92.0%。对苹果和香蕉实际样进行检测,与气相色谱所得结果有较好的一致性。

关键词：分子印迹量子点多残留仿生免疫有机磷农药

17β-雌二醇分子印迹仿生免疫快速检测方法研究

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17β-雌二醇分子印迹仿生免疫快速检测方法研究

作者：肖蕾山东师范大学

学位级别：硕士

目前食品安全问题已逐渐成为社会关注的焦点,其中农药残留、兽药残留、毒素等有毒有害物质的检测方法研究是对食品安全进行监督管理的技术保障。动物饲养过程中,雌激素类物质经常被添加入饲料中,用于提高动物性产品的产量和质量,缩短动... 详细信息

目前食品安全问题已逐渐成为社会关注的焦点,其中农药残留、兽药残留、毒素等有毒有害物质的检测方法研究是对食品安全进行监督管理的技术保障。动物饲养过程中,雌激素类物质经常被添加入饲料中,用于提高动物性产品的产量和质量,缩短动物的生长周期,提高生产效率。17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)作为环境雌激素中活性最强的物质之一,普遍存在于环境和动物源性食品中,若长期通过食物链在人体中富集,会对人体造成严重危害。目前对雌激素的检测主要采用仪器分析方法和免疫学方法。仪器分析方法需要借助大型的仪器设备,样品前处理过程复杂;免疫学方法需要借助抗体,但抗体的制备和筛选尤为复杂,且易失活。因此建立一种既能实现快速检测,方法简便,又无需借助抗体的检测方法十分重要。分子印迹聚合物(Molecular imprinting polymer,MIP)具有可以特异性识别待测物质的位点,可与待测物质特异性结合,类似于抗原抗体识别反应,称为仿生免疫。并且MIP具有耐高温、耐强酸碱环境、可长期保存等优点。论文针对17β-E2分子印迹仿生免疫快速检测建立了两种新方法:基于试纸条的分子印迹仿生酶联免疫快速检测方法,以及基于酶标板的分子印迹仿生免疫快速检测方法。这两种方法均可实现对17β-E2的快速检测,与传统方法相比较具有简单快速、价格低廉、容易操作等优点。本论文内容主要包括以下四个部分:第一章主要概述了17β-E2检测方法的研究进展,分子印迹技术的原理、步骤和分类,简单介绍了各类分子印迹制备方法。重点介绍了基于试纸条、酶标板的分子印迹技术研究进展,以及分子印迹技术在环境雌激素检测中应用。第二章建立了一种17β-E2分子印迹仿生酶联免疫试纸条快速检测方法。在试纸条表面制备一层分子印迹聚合物薄膜,聚合物上具有可特异性识别17β-E2的位点。通过17β-E2和酶标记17β-E2对结合位点的竞争结合作用,加入酶的底物显色,根据颜色深浅即可对17β-E2实现定性以及半定量检测。本章内容主要对试纸条类型的选择,合成条件的优化,灵敏度的提高,实验方法性能的考察及基质影响的消除进行了研究。结果表明,MIP合成的最佳聚合反应条件为:12 mL乙腈作为反应溶剂,模板分子17β-E2的添加量为0.1 g,功能单体3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的添加量为1014μL,交联剂四乙氧基硅烷(TEOS)的添加量为963μL,催化剂(0.1 mol·L-1乙酸)的添加量为100μL。在此最佳条件下合成的MIP具有较强的识别能力,可基本消除非特异性吸附,方法检测限可达到0.25μg·L-1。第三章建立了一种17β-E2分子印迹仿生免疫酶标板快速检测方法。在96孔酶标板表面合成分子印迹聚合物,通过17β-E2和荧光标记的17β-E2对识别位点的竞争结合作用,检测荧光强度,即可对17β-E2实现定量检测。本章内容主要对合成条件的优化,方法性能的考察,及基质影响的消除进行了研究。结果表明,MIP合成的最佳聚合反应条件为:10 mL无水乙醇作为反应溶剂,模板分子17β-E2的添加量为0.1 g,功能单体APTES的添加量为676μL,交联剂TEOS的添加量为642μL,催化剂(0.1 mol·L-1乙酸)的添加量为100μL,在此条件下合成的MIP具有较强的识别能力,可基本消除非特异性吸附。该方法的检测限可达到0.22μg·L-1,灵敏度可达到1.79μg·L-1。第四章对所建立的17β-E2分子印迹仿生酶联免疫试纸条快速检测方法和酶标板快速检测方法进行了总结。这两种方法分别以试纸条和96孔酶标板为载体成功在其表面合成MIP,并在此基础上建立了两种对17β-E2的快速检测方法。与传统检测方法相比较,具有快速、灵敏度高、操作简单、价格低廉、无需借助抗体等优点。

关键词： 17β-雌二醇分子印迹仿生免疫试纸条酶标板

基于分子印迹识别材料的三唑磷仿生免疫快速检测技术研究

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基于分子印迹识别材料的三唑磷仿生免疫快速检测技术研究

作者：洪思慧中国农业科学院

学位级别：硕士

三唑磷(Triazophos)是一种中毒、广谱有机磷杀虫剂,在谷物、水果和蔬菜上广泛使用。由于三唑磷化学稳定性好、半衰期长,使其在环境中极易残留,对环境和人类健康造成潜在危害。自2016年12月31日,我国明令禁止在蔬菜上使用三唑磷。目前三... 详细信息

三唑磷(Triazophos)是一种中毒、广谱有机磷杀虫剂,在谷物、水果和蔬菜上广泛使用。由于三唑磷化学稳定性好、半衰期长,使其在环境中极易残留,对环境和人类健康造成潜在危害。自2016年12月31日,我国明令禁止在蔬菜上使用三唑磷。目前三唑磷的检测技术主要有确证技术和免疫分析技术,但这些方法通常存在仪器昂贵、分析时间长、抗体制备困难等诸多缺陷。因此,设计合成具有特异性强、稳定性好、制备成本低的仿生识别材料,建立灵敏、简单、快速、稳定、廉价的检测方法具有重要的现实意义。基于以上背景,本文在合成分子印迹特异性识别材料基础上,开展了三唑磷分子印迹仿生酶联免疫、仿生荧光免疫及静电纺丝分子印迹膜层析技术的研究工作,具体如下:(1)以虚拟模板为设计理念,采用本体聚合和表面印迹法,获得了特异性识别能力好的分子印迹96孔阵列膜;合成三唑磷半抗原酶标记探针,建立了直接竞争仿生酶联免疫吸附检测方法,该方法线性范围为0.0010000μg/L(R=0.9770),灵敏度(IC)为428μg/L,检出限(LOD,IC)为0.006μg/L。对该方法进行实用性评价,在甘蓝和苹果中分别添加三个水平三唑磷农药(10、50、500μg/kg),回收率为70.5%19.8%,相对标准偏差为5.2%9.7%。并用HPLC-MS/MS对结果进行验证,相关性良好(R=0.9927)。(2)通过酯键耦合技术,合成三唑磷半抗原CdSe/ZnS量子点标记探针,以制备的分子印迹96孔阵列膜为识别元件,经过条件优化,建立了基于分子印迹识别技术的CdSe/ZnS量子点仿生荧光免疫方法。结果表明,该方法线性范围为0.10000μg/L(R=0.9817),灵敏度(IC)为3.63 mg/L,检出限(LOD,IC)为0.31μg/L。在甘蓝和苹果中添加三个浓度的三唑磷农药(10、50、500μg/kg),其回收率为109.6%18.9%,相对标准偏差为9.9%9.5%,并与HPLC-MS/MS获得的结果相关性良好(R=0.9995)。与传统荧光猝灭方法相比,使用CdSe/ZnS量子点作为荧光标记探针的竞争检测方法显示出良好的灵敏度、稳定性、快速响应和抗干扰能力。(3)利用静电纺丝制膜技术,合成了纳米纤维与分子印迹微球杂化的复合纳米膜,制备了三唑磷半抗原-IgG-FITC荧光探针,初步研制了特异性识别三唑磷农药的纳米膜层析试纸条,建立了对三唑磷农药快速响应的检测新方法。试验筛选和优化了纺丝液(种类、溶剂、浓度)、电纺条件、表面活性剂、MIPs浓度、荧光探针浓度、竞争方式等技术参数和制备条件。结果表明:该方法三唑磷浓度在2000μg/L范围内,具有好的线性相关性(R=0.9543),检出限为20μg/L。该方法解决了分子印迹作为仿生试纸条的识别元件存在的无法持久固定的技术瓶颈,拓宽了免疫层析试纸检测技术的应用范围,可为后续的研究提供新的思路。

关键词：三唑磷分子印迹仿生免疫试纸条静电纺丝

基于仿生酶联免疫分析技术检测氟喹诺酮类药物残留的研究

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基于仿生酶联免疫分析技术检测氟喹诺酮类药物残留的研究

作者：尹会敏河北北方学院

学位级别：硕士

氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQNs)是一类高效的抗菌药物,具有抗菌谱广、抗菌能力强、效率高、成本低、结构简单、组织通透性强、对其他常用抗菌药物无交叉耐药性等特点。然而,由于养殖和生产过程中的不合理用药和用药过量,当通过... 详细信息

氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQNs)是一类高效的抗菌药物,具有抗菌谱广、抗菌能力强、效率高、成本低、结构简单、组织通透性强、对其他常用抗菌药物无交叉耐药性等特点。然而,由于养殖和生产过程中的不合理用药和用药过量,当通过食物链摄入时,残留的FQNs对人体的中枢神经系统和肝肾器官有一定的危害和毒性。出于安全性考虑,世界各国都规定了动物源性食品中FQNs残留的最大限量,但是,动物源性食品中FQNs残留问题依然存在。因此,建立一种快速、简单、高通量的检测方法是十分必要的。本研究将分子印迹技术与酶联免疫分析方法相结合,建立了动物源性食品中FQNs残留的快速检测新方法。主要研究结果如下:(1)制备沙拉沙星(Saraflaxacin,SALX)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)酶标半抗原。采用活泼酯法,将SALX、OFLX标准品与辣根过氧化物酶偶联形成酶标半抗原。利用生物抗体绘制抑制率曲线,来评价酶标探针与抗体的亲和力,制备的酶标记物可以绘制抑制率曲线,表明酶标半抗原已成功合成。(2)仿生抗体的制备。采用分子印迹表面印迹法,在聚苯乙烯酶标板表面直接聚合形成分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymer,MIP)膜。采用傅立叶红外光谱、电镜扫描、吸附平衡结合和吸附动力学等方法对其性能进行了表征。实验结果表明,合成的MIP具有很好的印迹效果和较高的吸附性能,且传质速率较快。(3)优化实验条件,建立快速检测FQNs残留的仿生酶联免疫(Biomimetic Enzyme-linked Immunosorbent Assay,BELISA)新方法。对影响BELISA方法的条件进行了系统优化。实验结果显示,BELISA方法的最优条件是:以p H值为7.5的PBS作为缓冲溶液,酶标半抗原的稀释倍数为4500倍。在此条件下建立直接竞争BELISA方法,实验结果表明,该方法对SALX的灵敏度(IC)和最低检测限(LOD,IC)分别为317.84μg·L和3.66μg·L,对OFLX的灵敏度(IC)和最低检测限(LOD,IC)分别为190.83μg·L和0.71μg·L。为了验证方法的可行性,将该方法用于动物源性食品鸡肉、鱼肉和牛奶中SALX、OFLX添加回收实验,实验数据显示:SALX的回收率在83.40%～96.89%之间,相对标准偏差(RSD)小于7.22%;OFLX回收率在81.60%～95.30%之间,RSD小于7.59%。以上结果与高效液相色谱方法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测得的结果具有较好的一致性,表明该检测方法灵敏度较高,可应用于动物源性食品中SALX和OFLX抗生素残留检测。

关键词：沙拉沙星氧氟沙星分子印迹吸附性能仿生免疫

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面向主机系统的内生安全方法研究

面向主机系统的内生安全方法研究

作者：江致文东南大学

学位级别：硕士

目前网络空间安全防御体系受到各类攻击方式的极大挑战,信息系统的安全也受到了威胁。传统的安全防护体系越来越难以适应这些多样化的攻击。而生物系统与生俱来的防御风险的能力和自我生长能力为网络空间安全提供了新思路。本文提出一... 详细信息

目前网络空间安全防御体系受到各类攻击方式的极大挑战,信息系统的安全也受到了威胁。传统的安全防护体系越来越难以适应这些多样化的攻击。而生物系统与生俱来的防御风险的能力和自我生长能力为网络空间安全提供了新思路。本文提出一种基于仿生免疫机理的内生安全体系,通过模仿人体的免疫及神经控制机制,在信息系统的各个部分布置神经元,使得系统中每个基本模块都兼具功能性和安全性。在任务执行过程中不断通过神经元搜集模块的信息,经由大脑分析处理后对信息系统的资源进行统一调配或者局部优化,通过各模块之间的协作共同抵御风险和保障任务的执行,进而在信息系统的决策层设置策略解决问题甚至避免问题。本文通过对于信息系统模型分析和证明可以得知,这种基于仿生免疫的内生安全体系是有效的,通过构建原型系统,分析在不同策略下系统的运行状况,以及内生安全系统和传统防护技术受到攻击时的响应时间和稳定性对比结果,验证了该理论的正确性。本文对信息系统进行建模,仿造人体神经控制系统建立了以任务为导向的内生安全架构,通过形式化语言对模型的正确性进行了证明,提出了相应的异常检测和纠错算法。同时,设计并实现了基于内生安全方法的原型系统,验证了本文所提方法的有效性。本文的主要工作如下:1.研究了人体免疫机制和神经控制机制的相关细节,分析了人体系统和信息系统之间的相似性和区别,对现有信息系统进行建模,并提出了一种以任务为导向的内生安全架构。2.针对以上的模型,通过将任务分解为一系列基本动作序列,对内生安全模型做出了形式化的定义,通过基于无干扰模型的证明方法对内生安全模型的安全可运行性进行了证明。3.总结内生安全系统的异常行为,对系统的异常行为做出数学定义,并提出了异常行为检测算法和异常行为纠错算法,实验结果表明了信息系统如何调整整体的运行策略和统筹资源之间的协作解决异常,其在安全参数种类并不单一时具有较好的性能。4.设计并实现了基于内生安全方法的原型系统,包括通信模块、加解密模块和交互模块,通过布置在模块中的大量神经元采集系统运行信息,经由控制中心分析和处理后,统一调配系统资源协作应对攻击和完成任务,最后通过两个测试方案对本文的方法进行了验证。

关键词：内生安全仿生免疫功能与安全模型分析与证明资源协作

基于分子印迹及鲁米诺化学发光体系检测有机磷农药方法研究

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基于分子印迹及鲁米诺化学发光体系检测有机磷农药方法研究

作者：王守敏山东农业大学

学位级别：硕士

有机磷农药广泛应用于作物的病虫害防治以提高作物的产量和质量,但是其大量使用会使环境遭受污染,并危及人类的健康。因此建立有机磷农药残留的检测方法具有重要的意义。本实验基于分子印迹技术及鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,建立了两... 详细信息

有机磷农药广泛应用于作物的病虫害防治以提高作物的产量和质量,但是其大量使用会使环境遭受污染,并危及人类的健康。因此建立有机磷农药残留的检测方法具有重要的意义。本实验基于分子印迹技术及鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,建立了两种有机磷农药残留的检测方法,主要研究结果如下:1.采用本体聚合法,以久效磷为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,合成了久效磷分子印迹聚合物。静态吸附、动态吸附及选择性实验表明所制备的印迹聚合物对久效磷具有较好的选择性和特异吸附性。基于久效磷在碱性介质中能够增强鲁米诺-过氧化氢化学发光反应,以制备的分子印迹聚合物作为吸附剂,建立了一种久效磷的分子印迹固相萃取-流动注射化学发光分析方法。结果显示在最优条件下,化学发光增强值与久效磷浓度在0.0023～10mg/L呈良好的线性关系,最低检出限为0.001 mg/L。对油菜和小白菜分别在三个水平上进行了添加回收实验,两种样品的回收率为89.3%05.9%。2.以合成的敌百虫-BSA-鲁米诺作为化学发光标记物,本体聚合法合成的敌百虫分子印迹聚合物作为仿生抗体,建立了敌百虫流动注射化学发光仿生免疫分析方法,并对影响竞争性免疫反应的条件进行了优化。结果表明以pH 7.2的PBS作为样品稀释液,过氧化氢浓度为0.4 mol/L,该方法的灵敏度（IC50）为2 mg/L,最低检出限（LOD,IC15）为0.0024 mg/L,本方法对胡萝卜和卷心菜的添加回收率在76.7～89.7%之间。

关键词：有机磷农药分子印迹聚合物固相萃取化学发光仿生免疫