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微分脉冲溶出伏安-偏最小二乘法同时测定代森锌和代森锰

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分析化学 2012年第1期40卷 155-158页

作者：邱萍倪永年南昌大学化学系南昌大学食品科学与技术国家重点实验室

采用循环伏安法讨论了两种常用的杀菌剂代森锰和代森锌在汞电极上的电化学还原反应机理,发现它们均具有良好的的伏安还原峰。采用微分脉冲溶出伏安法研究本体系时,获得的代森锰和代森锌的线性范围分别为0.005～0.07 mg/L和0.02～0.24 mg... 详细信息

采用循环伏安法讨论了两种常用的杀菌剂代森锰和代森锌在汞电极上的电化学还原反应机理,发现它们均具有良好的的伏安还原峰。采用微分脉冲溶出伏安法研究本体系时,获得的代森锰和代森锌的线性范围分别为0.005～0.07 mg/L和0.02～0.24 mg/L;检出限分别为4.10和12.8μg/L。由于这两种杀菌剂的分子结构很相似,它们的伏安波谱峰重叠严重,采用常规方法很难对它们分别进行测定。为解决波谱重叠的问题,本研究采用主成分回归和偏最小二乘法对波谱进行解析。结果表明,偏最小二乘法能得到较好的定量结果。利用本方法对几种蔬菜和水果样品进行分析,三氯甲烷作萃取剂的萃取率最大,回收率在95.5%～103%之间。

关键词：微分脉冲溶出伏安法偏最小二乘法代森锌代森锰杀菌剂

来源：博看期刊

百草枯和代森锰联合染毒对大鼠黑质纹状体系统的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2011年第1期29卷 33-38页

作者：许海燕陈瑞瑞蔡晓妍何德富华东师范大学环境科学系上海200062

目的观察百草枯（paraquat，PO）和代森锰（maneb，MB）联合染毒对大鼠运动行为和黑质纹状体系统神经元形态及电活动的影响，以探讨这两种农药与帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）发病的关系。方法37只大鼠随机分为对照组（11只）、P... 详细信息

目的观察百草枯（paraquat，PO）和代森锰（maneb，MB）联合染毒对大鼠运动行为和黑质纹状体系统神经元形态及电活动的影响，以探讨这两种农药与帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）发病的关系。方法37只大鼠随机分为对照组（11只）、PQ组（PQ10mg／kg，13只）、PQ（10mg／kg）和MB（30mg／kg）联合染毒组（PQ＋MB组13只），每周2次腹腔注射，染毒6周，观察动物在斜板试验、网格试验和开阔试验中运动行为的变化情况；HE染色观察黑质神经元形态；利用细胞外电生理学方法记录纹状体神经元白发电活动。结果与对照组或同组染毒前比较，PQ组及PQ＋MB组大鼠从斜板上下滑次数增加，在网格上移动潜伏期延长，在开阔试验中自发运动减少，差异均有统计学意义（P〈O．05或P〈0．01）。染毒后PQ组及PQ＋MB组大鼠黑质致密部神经元出现受损形态改变，PQ组及PQ＋MB组细胞密度分别为（82．17±12．91）和（41．15±6．44）个/mm2，与对照组【（143．10±20．85）个／mm2]比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。P0组纹状体神经元的平均放电频率为（5．97±7．30）Hz，PQ＋MB组为（6．95±9．87）Hz，较对照组[（1．78±5．05）Hz]明显提高，差异均有统计学意义（P〈0．01）；PQ＋MB组神经元混合簇状放电比例（22．3％）较对照组（9．8％）和PQ组（5．6％）明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论MB能加重PQ对大鼠黑质纹状体系统的损伤效应，表明这两种农药的协同毒性作用与PD发病相关联。

关键词：百草枯代森锰帕金森病纹状体电生理学

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代森锰原药对大鼠90d饲喂毒性

农药 2010年第10期49卷 744-747,752页

作者：由宇润邢立国胡翠清李梦茹王捷沈阳化工研究院有限公司国家沈阳新药安全评价中心沈阳110021

应用Sprague Dawley(以下简称SD)大鼠对90%代森锰原药进行了90d饲喂毒性试验研究。试验设计1个对照组及3个剂量组,分别为0、300、900、2700mg/kg饲料,每组20只动物,雌雄动物各10只。试验结果表明:经饲料给予90%代森锰原药900mg/kg饲料... 详细信息

应用Sprague Dawley(以下简称SD)大鼠对90%代森锰原药进行了90d饲喂毒性试验研究。试验设计1个对照组及3个剂量组,分别为0、300、900、2700mg/kg饲料,每组20只动物,雌雄动物各10只。试验结果表明:经饲料给予90%代森锰原药900mg/kg饲料则可引起受试动物食欲降低、体质量增长抑制毒性反应。经给予90%代森锰原药2700mg/kg饲料不但引起受试动物食欲降低、体质量增长受抑制,还引起受试动物双后肢麻痹。根据试验结果,在实验条件下,90%代森锰原药对SD大鼠90d喂饲给药最大无作用剂量:雄性(24.2±1.7)mg/kg体质量/day,雌性(24.9±1.5)mg/kg体质量/day。

关键词：代森锰毒性 Sprague Dawley大鼠

代森锰诱导神经细胞衰老及原花青素的保护作用和机制研究

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代森锰诱导神经细胞衰老及原花青素的保护作用和机制研究

作者：阮杭山东大学

学位级别：硕士

人体随着年龄的增长在逐渐衰老的过程中,大脑是最先开始衰老的器官之一。大脑在生理性衰老过程中,结构和功能会发生一系列变化。在某些内部和外部因素的共同作用下,大脑会从生理性衰老逐渐转变为病理性衰老,最终导致了神经退行性疾病的... 详细信息

人体随着年龄的增长在逐渐衰老的过程中,大脑是最先开始衰老的器官之一。大脑在生理性衰老过程中,结构和功能会发生一系列变化。在某些内部和外部因素的共同作用下,大脑会从生理性衰老逐渐转变为病理性衰老,最终导致了神经退行性疾病的发生。当前,人们对神经退行性疾病的发生机制仍然不是很清楚,临床上的治疗手段有限。目前,普遍认为衰老是神经退行性疾病的最大风险因素,因此,针对衰老制定的保护策略可能会成为抑制神经退行性疾病发生发展的有效方案。农用杀菌剂代森锰在农业生产中使用广泛,也因此对环境对人类产生了一定的危害,对其毒性的研究有流行病学研究的意义。本研究首先探讨了农用杀菌剂代森锰对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的衰老诱导效应,并对相关的分子机制进行探索。MTT实验检测代森锰对SH-SY5Y细胞3个时间梯度24h、48h和72h的细胞活性的影响。检测结果显示,代森锰对SH-SY5Y细胞产生毒性作用,对细胞活性起到了抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。SA-β-Gal染色实验发现,在同等浓度的代森锰处理下,随着时间地延长,显微镜下观察到蓝染细胞数量逐渐增多,说明衰老相关的β半乳糖苷酶活性增加,即衰老的细胞增多。根据衰老细胞的特征,我们进一步进行了活性氧含量的检测,用不同浓度（0-200μM）的代森锰对SH-SY5Y处理24h,再按照试剂盒进行处理,流式细胞术检测结果表明,代森锰降低了 SH-SY5Y的活性氧含量,且呈剂量依赖性。进一步,我们又对细胞周期分布进行了分析,结果发现,代森锰处理后,SH-SY5Y细胞呈S期阻滞,并呈浓度的依赖性。JC-1染色后,显微镜下结果显示,线粒体膜电势逐渐降低,呈现剂量依赖性,流式细胞术的检测结果与显微镜下观察结果一致。另外,我们在分子机制方面也进行了实验,蛋白质免疫印迹实验表明,随着代森锰浓度的增加,衰老相关蛋白p16和Rb表达量增加,呈现剂量依赖性。我们也对p16上游蛋白p38和ERK进行了检测,发现当代森锰浓度增加时,p38和ERK的表达量也是上升的。接着,我们又从RNA层面进行了 RT-PCR实验,PCR结果显示,在Maneb处理后,p16和Rb的mRNA表达量是逐渐增加的,且呈剂量依赖性。综上,农用杀菌剂代森锰可能通过p16-Rb信号通路诱导了人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y产生了衰老。我们的实验只是冰山一角,需要进一步体内体外实验深入研究。研究抑制衰老的策略,减少神经退行性疾病给人们带来的折磨是值得关注的热点。基于此,接下来我们利用葡萄籽提取物原花青素（OPC）对代森锰诱导的SH-SY5Y细胞衰老的保护性作用和机制展开了探索工作。我们首先用MTT法对OPC的细胞毒性进行了检测,实验结果表明OPC对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y毒性较小,几乎无毒。接着我们继续用MTT法检测OPC的保护作用,实验表明,OPC可以降低农用杀菌剂代森锰对SH-SY5Y细胞的毒性。我们先对实验组用不同浓度（0-50μM）的OPC对SH-SY5Y细胞预处理30min后,再用代森锰处理24h,再按照衰老检测试剂盒说明书进行处理,在显微镜下对各组进行了观察,可以看到随着OPC浓度的升高,蓝色细胞数量逐渐减少,即SA-β-Gal活性逐渐降低,衰老细胞数量逐渐减少。对SH-SY5Y细胞相同的处理方式,按照活性氧试剂盒进行后期处理,用流式细胞仪对各组进行检测,实验结果表明,随着OPC浓度的升高,活性氧含量降低。同样的前期处理后,检测细胞周期分布,流式细胞仪检测结果显示,随着OPC浓度升高,S期占比逐渐降低。JC-1染色实验结果表明,随着OPC浓度的升高,线粒体膜电势逐渐升高,流式细胞仪检测结果也与之一致,表明OPC升高了代森锰处理后SH-SY5Y细胞的线粒体膜电势。另外,蛋白质免疫印迹检测衰老相关蛋白的表达结果表明,随着OPC浓度的升高,p16、Rb、p38和ERK的表达量降低。我们初步证明,OPC对代森锰诱导人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的衰老效应具有保护作用。本文的研究可能会给神经退行性疾病的治疗提供一定的思路,同时也有一定的不足和局限,需要深入进行研究。

关键词：细胞衰老代森锰原花青素神经退行性疾病 SH-SY5Y

何首乌提取物对百草枯和代森锰模型小鼠行为及纹状体内单胺递质含量的影响

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沈阳药科大学学报 2006年第12期23卷 797-801页

作者：李霞左代英陈建军吴英良沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016

目的研究何首乌提取物对百草枯和代森锰引起的C57BL/6小鼠自主活动减少和脑纹状体内单胺递质含量降低的影响。方法应用智能自发活动测定仪记录小鼠自主活动情况;应用高效液相电化学的方法检测小鼠脑纹状体内单胺类递质的含量。结果何首... 详细信息

目的研究何首乌提取物对百草枯和代森锰引起的C57BL/6小鼠自主活动减少和脑纹状体内单胺递质含量降低的影响。方法应用智能自发活动测定仪记录小鼠自主活动情况;应用高效液相电化学的方法检测小鼠脑纹状体内单胺类递质的含量。结果何首乌明显抑制百草枯和代森锰引起的小鼠自主活动数减少和脑纹状体内单胺递质含量的降低。结论何首乌对百草枯和代森锰引起的C57BL/6小鼠行为学、神经化学的损害有显著的保护作用。

关键词：百草枯代森锰帕金森病多巴胺神经元

百草枯和代森锰慢性暴露对小鼠黑质纹状体多巴胺能系统的影响

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环境与健康杂志 2009年第7期26卷 590-592,F0003页

作者：王广鹤何德富许海燕华东师范大学环境科学系上海200062

目的研究农药百草枯(praquat,PQ)和代森锰(maneb,MB)单独和(或)联合暴露对小鼠黑质致密部(substanitial nigra compact,SNc)脑区多巴胺(dopamine,DA)能系统的影响,并探讨其与帕金森症(Parkinson’sdisease,PD)发病的关系。方法将120只健康清洁级5周龄昆明小鼠随机分为对照(生理盐水)组、PQ(5mg/kg)组、MB(15mg/kg)组、PQ(5mg/kg)+MB(15mg/kg)组,每组30只。采用腹腔注射方式进行染毒,染毒剂量为10ml/kg,每周染毒2次,连续染毒16周。采用爬杆试验和开阔试验检测小鼠运动行为的变化,对SNc区域进行组织病理学观察和神经元细胞计数。以荧光分光光度法检测纹状体(Caudateputamen,CPu)脑区中DA的含量。结果各组动物体重间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。染毒前和染毒8、16周后,各组小鼠的爬杆时间和跨格数间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,染毒8、16周后PQ+MB组小鼠中脑SNc区神经元呈现胞体固缩样退化形态,细胞数量显著减少(P0.05)。与对照组比较,染毒16周后第1天仅PQ+MB组小鼠纹状体脑区DA含量较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论单独PQ或MB低剂量长期暴露对SNc脑区的神经元无影响,二者低剂量联合暴露可导致SNc神经元损伤和丢失,表明PQ和MB的协同神经毒性可能与帕金森症发病有关。

关键词：农药百草枯代森锰帕金森症多巴胺黑质纹状体

基于百草枯和代森锰诱导的帕金森病大鼠模型的纹状体电生理学研究

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基于百草枯和代森锰诱导的帕金森病大鼠模型的纹状体电生理学研究

作者：许海燕华东师范大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson's disease, PD)是一种常见的神经退行性疾病。病因学研究表明PD发病与基因表达异常和环境因素作用相关联,但仅10%为家族性PD病例,而90%的原发性PD则由环境因子所诱发。研究显示部分农药暴露或接触与PD发病存在关联,... 详细信息

帕金森病(Parkinson's disease, PD)是一种常见的神经退行性疾病。病因学研究表明PD发病与基因表达异常和环境因素作用相关联,但仅10%为家族性PD病例,而90%的原发性PD则由环境因子所诱发。研究显示部分农药暴露或接触与PD发病存在关联,我们研究室前期工作也表明农药鱼藤酮(rotenone)、百草枯(Paraquat, PQ)和代森锰(Maneb, MB)暴露与PD关系密切。另外由于农药常常被重叠施用,导致局部环境中两种以上农药可能同时存在,因而农药的联合神经毒性效应尚需动物暴露实验证明。本文以SD大鼠为模式动物,观察PQ单独及与MB联合慢性暴露对动物运动行为的影响,检测神经毒性效应引起黑质神经元的变化,以此尝试建立PQ/MB诱导的PD大鼠模型。已有的研究表明PD运动调节功能障碍源于黑质多巴胺能神经元退变,并与基底神经节电生理活动关系密切,但研究多集中在苍白球和底丘脑,而相对于正常动物而言PD动物纹状体神经元电活动及DA受体是否发生变化尚较少涉及。本文在PQ/MB诱导的PD模式动物上进一步探讨纹状体神经元自发电活动的变化,并通过微电泳多巴胺D1或D2受体选择性激动剂,观察DA两种受体敏感性变化及与PD的关联。主要结果如下：1. PQ (10 mg/kg)单独及与MB (30 mg/kg)联合暴露6周引发大鼠的运动行为及黑质神经元病理学变化。行为学检测结果显示,大鼠从斜板上滑落的次数与对照组和同组暴露前相比均显著增多,在网格上的移动延迟时间均显著性延长。开阔实验中,暴露组大鼠的探洞次数较暴露前显著减少,联合暴露组大鼠直立时间较对照组和暴露前均显著缩短,与对照组和暴露前相比,大鼠静止型蹲坐时间显著增加而跨格次数明显增多。与PQ单独暴露相比,PQ和MB联合暴露后检测到的运动行为障碍有所加重。病理学结果显示,PQ单独及与MB联合暴露使得黑质致密部神经元发生进行性受损,神经元数量分别缺失了43%和71%。与大鼠运动行为变化一致,PQ与MB的联合较PQ单独暴露产生更严重的黑质神经元损伤效应。***单独及与MB联合暴露后,大鼠纹状体神经元自发放电的型式有所改变,呈规则单脉冲放电神经元增加,不规则单脉冲放电神经元减少,且联合暴露组动物混合簇状放电神经元比例较对照组和PQ组均显著性增加。单独及联合暴露后纹状体神经元自发放电频率较对照组显著提高,其中1 Hz以下的低频放电神经元显著减少,而10 Hz以上的高频放电神经元显著增多。且PQ与MB联合暴露使得纹状体中等多棘投射神经元、大胆碱能和快放电的中间神经元比例分布发生一定变化,且各神经元电活动均显著增强。3.对大鼠纹状体神经元微电泳D1受体激动剂SKF38393或D2受体激动剂LY171555后,纹状体神经元自发放电均可产生兴奋或抑制效应。进一步统计分析发现,激活D1受体可使PQ与MB联合暴露组纹状体神经元较对照组产生更强的抑制效应,而激活D2受体则产生更弱的兴奋效应。微电泳SKF38393和LY171555还使得产生兴奋效应的纹状体神经元放电波形发生变化,且两者在暴露组和对照组所产生的影响效应显示了不同的特征。上述结果表明：***单独及与MB慢性联合暴露均能诱发大鼠产生震颤、肌僵直、迟缓、运动减少等典型的类PD行为症状,使得黑质神经元发生进行性受损和缺失这一典型PD病理学变化。另外,行为学和病理学检测均显示PQ与MB联合暴露毒性效应较PQ单独暴露效应强,表明二者具有一定协同神经毒性作用。***单独及与MB联合暴露使得大鼠纹状体神经元自发电活动增强,纹状体内中等多棘投射神经元、大胆碱能和快放电的中间神经元电活动均呈现加强趋势,表明投射神经元和中间神经元的电生理活动均与PD运动功能障碍相关联。3.局部激活纹状体D1或D2受体,实验在PQ/MB诱发的模式动物和对照组动物上观察到对纹状体神经元电活动的差异性影响效应。在模式动物上,激活D1受体诱发更强的抑制效应,而激活D2受体则产生更弱的兴奋效应,表明D1和D2受体敏感性出现不同的变化。这就进一步支持纹状体D1和D2受体功能分别与基底神经节直接通路和间接通路功能关联,也表明与D1和D2受体关联的直接通路和间接通路的不平衡是导致PD运动调节功能障碍的重要原因。本研究工作从行为学和病理学角度探讨了PQ及与MB联合暴露对大鼠的神经毒性效应,证实了PQ具有诱发PD的神经毒性效应,MB具有一定的协同PQ的毒性作用。通过在体单细胞胞外记录结合微电泳技术,结果表明纹状体神经元电活动的变化与PD运动调节功能障碍相关,实验首次在PD模式动物上发现纹状体D1和D2受体敏感性发生了差异性变化。相关研究结果为PD环境病因学提供了实验证据,为阐明与PD关联的基底神经

关键词：百草枯代森锰帕金森病纹状体电生理学多巴胺受体行为学

百草枯、代森锰和鱼藤酮暴露对小鼠黑质纹状体系统的影响

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百草枯、代森锰和鱼藤酮暴露对小鼠黑质纹状体系统的影响

作者：王广鹤华东师范大学

学位级别：硕士

作为一种常见神经退行性疾病,帕金森症(parkinson's disease, PD)的病因与环境因素关系密切。相关研究显示包括农药在内的多种环境毒物在诱发PD中起一定作用。部分研究已经提及农药百草枯(paraquat, PQ)和鱼藤酮(rotenone, R)与PD发病... 详细信息

作为一种常见神经退行性疾病,帕金森症(parkinson's disease, PD)的病因与环境因素关系密切。相关研究显示包括农药在内的多种环境毒物在诱发PD中起一定作用。部分研究已经提及农药百草枯(paraquat, PQ)和鱼藤酮(rotenone, R)与PD发病相关联,但大部分的研究报告出自于流行病学调查,而实验室动物暴露的结果也存在很大不一致性。且以往研究工作主要集中在单种农药神经毒性效应的观察,较少涉及百草枯和鱼藤酮的联合作用的相关研究。考虑到PD病人接触环境毒物的多样性和复杂性,且是一个长期的过程,本文工作选择鱼藤酮、百草枯和代森锰(maneb, MB)三种典型农药,在小鼠上进行低剂量长时间的单独或联合暴露,观察其神经毒性效应对动物运动行为表现的影响,并分析对黑质区域DA能神经元和纹状体区域DA的含量的影响。主要结果如下：1.低剂量的PQ (5mg/kg)、MB (15mg/kg)单独暴露16周后,未引起黑质致密部(SNc)多巴胺(DA)能神经元数量和形态上的病理变化、并未使小鼠纹状体脑区DA含量降低和运动行为的改变。但同样剂量的两者联合暴露8周或16周后,黑质致密部DA能神经元分别缺失25%或40%,且SNc神经元表现出进行性损伤形态。2.较高剂量的PQ (8mg/kg)、鱼藤酮(1.0mg/kg)单独暴露12周后均可导致黑质致密部DA能神经元损伤,SNc细胞损失分别达到26%和15%。PQ暴露神经毒性虽未使纹状体DA含量显著降低,但动物在爬杆上所花时间较对照组显著延长,表明动物运动能力出现一定程度下降。鱼藤酮单独暴露后检测到纹状体DA递质显著较少24%,且动物在开阔试验中跨格次数较对照组显著降低,显示其较强的神经毒性效应。3. PQ (8mg/kg)与鱼藤酮(1.0mg/kg)联合暴露12周,可增强对黑质致密部区域的病理损伤,细胞极显著损失33%,且使纹状体内的DA含量减低达35%,动物在开阔试验中跨格次数较对照组显著降低,而且爬杆时间显著延长。以上结果表明：1.鱼藤酮和PQ均具有明显的诱发PD神经毒性作用,鱼藤酮或PQ暴露可导致小鼠黑质DA能神经元损伤和损失、纹状体DA递质含量降低及动物运动能力减弱。***的神经毒性表现出一定的剂量-效应关系,并在单独和联合暴露均观察到时间-效应关系。提示诱发PD的环境因素作用可能具有时间剂量阈值。***和MB、PQ和鱼藤酮均具有协同神经毒性效应,联合暴露对小鼠黑质纹状体系统产生更为严重的影响。研究表明环境中两种或以上的毒物共同作用可能是PD发病的重要诱发因素。本论文工作观察了百草枯、鱼藤酮和代森锰慢性暴露的神经毒性效应,从行为学、病理学和神经化学方面探讨了农药百草枯、鱼藤酮及代森锰与帕金森症发病的关系。实验首先发现百草枯和鱼藤酮联合的低剂量慢性暴露均可诱发动物的类PD运动行为异常,并证实黑质纹状体系统的病理化学改变是其神经毒性作用的机制所在。研究结果将为PD的环境病因学提供重要参考,为相关卫生预防提供依据。

关键词：帕金森症百草枯代森锰鱼藤酮多巴胺黑质致密部纹状体

农药代森锰暴露诱导的类帕金森病神经毒性作用及分子机制研究

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农药代森锰暴露诱导的类帕金森病神经毒性作用及分子机制研究

作者：刘泽华中南财经政法大学

学位级别：硕士

作为农业生产中最常见的化学制剂,农药的长期大量使用导致其在全球生态系统中广泛存在。而农药在环境中的积累和暴露会加剧环境污染,诱发人类健康问题。流行病学与毒理学研究表明农药暴露会明显增加患帕金森病（Parkinson’s disease,P... 详细信息

作为农业生产中最常见的化学制剂,农药的长期大量使用导致其在全球生态系统中广泛存在。而农药在环境中的积累和暴露会加剧环境污染,诱发人类健康问题。流行病学与毒理学研究表明农药暴露会明显增加患帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的风险,这一现象备受人们关注。PD是最常见的神经退行性疾病之一,会极大程度地降低患者的生活质量,并为家庭和社会带来沉重的负担。目前,PD的病因尚未明确,探明农药暴露诱发PD的过程可为PD的病因学及发病机制研究提供重要的依据。代森锰（Manganese ethylene-bis-dithiocarbamate,Maneb）是一种典型的二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂,在全球范围内被使用长达60年,广泛残留于环境介质中,具有潜在健康风险。大量流行病学研究证实Maneb暴露与PD的发病存在密切关联,但Maneb诱发PD的神经毒性作用及分子机制缺乏深入研究。本研究运用行为学、蛋白质组学、代谢组学及其他环境毒理学和分子生物学技术,在体内和体外模型中观察Maneb导致的类PD神经毒性损伤及相关机制,重点关注线粒体凋亡通路和蛋白激酶A（Protein kinase A,PKA）/环磷腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB）信号通路的关键作用。本研究将从新的角度阐明Maneb神经毒性的分子机制,为防治Maneb诱发的PD提供新靶点。具体方法上,本研究（1）采用环境相关剂量（0.05 mg/kg bw）和毒性剂量（60 mg/kg bw）的Maneb处理小鼠,对小鼠进行行为学评估,并提取其脑组织和血清进行蛋白质组和代谢组分析,通过蛋白免疫印迹验证组学结果,讨论Maneb诱导小鼠产生的神经毒性作用的关键蛋白和通路;（2）使用Maneb及其代谢产物氯化锰（Mn Cl2）、乙撑硫脲（Ethylene thiourea,ETU）、代森钠单独或联合暴露处理多巴胺能神经细胞,观察细胞活性、细胞凋亡率、活性氧水平的变化,明确Maneb发挥神经毒性的主要毒性成分;（3）采用0μmol/L,1μmol/L,10μmol/L,20μmol/L的Maneb处理多巴胺能神经细胞,观察细胞活性、细胞凋亡率、线粒体功能、氧化应激水平的变化,检测Maneb处理对线粒体凋亡途径中的关键蛋白以及PKA/CREB信号通路中关键因子的影响,同时在小鼠模型中进行印证,证实线粒体凋亡途径的激活在Maneb诱导细胞凋亡中的关键作用。本文的主要研究结果如下:（1）Maneb能导致小鼠运动功能障碍,并干扰小鼠脑中与PD相关的关键通路,包括苯丙氨酸和色氨酸代谢通路、多巴胺能神经突触、突触囊泡循环、线粒体功能障碍及氧化应激;（2）Maneb的有机部分和金属离子成分单独暴露不具有明显的毒性作用,联合暴露具有协同效应,且对细胞活性的抑制程度与同一浓度水平的Maneb相当;（3）在多巴胺能神经细胞中,Maneb浓度依赖性地损伤线粒体功能、产生活性氧自由基（Reactive oxygen species,ROS）,进而降低细胞活性、触发细胞凋亡。同时,Maneb通过PKA/CREB信号通路介导的线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。本研究充分诠释了Maneb通过干扰神经递质的代谢合成及神经传递系统产生神经毒性作用,明确了Maneb的毒性来源于其有机部分和金属成分的协同毒性作用,探明了Maneb通过PKA/CREB介导的线粒体凋亡途径诱导多巴胺能神经细胞凋亡的机制。该研究将为揭示Maneb诱发PD的毒性机制提供新的理论基础,为农业生产中规范使用Maneb提供新的科学依据,更为环境毒素诱导的PD的预防和治疗提供参考。

关键词：代森锰帕金森病神经毒性蛋白质组学线粒体凋亡途径