检索结果-南通市图书馆

作者：李丽娟天津农学院

学位级别：硕士

研究选用的试验材料为光谱发射波长530nm（绿光）和625nm（红光）两种CdTe量子点，粒径为3～5nm，其荧光量子产率达82%和半峰宽度为27nm。试验将这两种CdTe量子点对仔猪空肠上皮细胞（piglets intestinal epithelial cell line，IPEC-1... 详细信息

研究选用的试验材料为光谱发射波长530nm（绿光）和625nm（红光）两种CdTe量子点，粒径为3～5nm，其荧光量子产率达82%和半峰宽度为27nm。试验将这两种CdTe量子点对仔猪空肠上皮细胞（piglets intestinal epithelial cell line，IPEC-1）标记并进行蛋白基因表达的研究，为其在临床应用中作为药物标记载体或组织细胞的示踪物对动物疾病的诊断和治疗提供依据。试验主要内容如下： 1． CdTe QDs对仔猪空肠上皮细胞活性的影响：试验采用MTT法和细胞计数法对比检测两种CdTe QDs对IPEC-1细胞作用24h时细胞生长的影响，设置的浓度水平为0.72μmol/L，1.8μmol/L，3.6μmol/L和18μmol/L，每个浓度和对照组均设3个重复。结合电子显微镜(Electron microscope, EM)和倒置显微镜观察细胞形貌及核质变化，最终确立CdTe QDs对细胞标记的最佳浓度和分析细胞代谢活性的影响因素。结果表明：（1）CdTe QDs的浓度与细胞的增殖活性呈明显的剂量-效应关系;与对照组相比，0.72μmol/L和1.8μmol/L的细胞存活率差异不显著(P＞0.05)，3.6μmol/L的细胞存活率差异显著（P细胞存活率差异极显著（P细胞的生长抑制作用小于530nm（绿光）CdTe QDs的作用，低于1.8μmol/L剂量CdTe QDs对细胞的生长无影响。 *** QDs对仔猪空肠上皮细胞的标记研究：选取上述试验的四个浓度的CdTeQDs对IPEC-1细胞进行标记和HE染色。用荧光显微镜观察细胞。结果表明：细胞作用3h时，625nm CdTe QDs对细胞膜进行了良好的标记，能清晰分辨出细胞核质形态;530nm CdTe QDs标记的是细胞质;1.8umol/L的剂量浓度是较好的细胞标记浓度，不影响细胞的活性。 *** QDs作用仔猪空肠上皮细胞蛋白基因表达的研究：试验选取野猪金属硫蛋白基因（Metallothionein, MT-1）和肠三肽因子（Trefoil Factor3, TFF3）两种蛋白基因做mRNA表达分析。试验将两种不同最大发射波长的CdTe量子点530nm（绿光）和625nm（红光）作用于IPEC-1细胞中，对量子点的四个不同浓度在0h、3h、12h、24h和48h对MT-1和TFF3两种蛋白做mRNA表达分析。结果表明：（1）随着CdTe QDs浓度的增加，两种量子点的相对表达量均上调;（2）MT-1在24h出现了表达高峰，差异极显著（P细胞生长的抑制作用与CdTe QDs作用细胞的浓度、作用时间和本身的粒径大小有关;再次，625nm CdTe QDs对细胞膜进行了良好的标记，530nm CdTe QDs标记的是细胞质，1.8umol/L的剂量浓度是较好的细胞标记浓度。

关键词： CdTe QDs 荧光纳米材料仔猪空肠上皮细胞蛋白基因

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β-伴大豆球蛋白及其酶解肽对仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能损伤的比较研究

β-伴大豆球蛋白及其酶解肽对仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能损伤...

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作者：刘丹丹吉林农业大学

学位级别：硕士

大豆抗原蛋白能够破坏仔猪等幼龄动物的肠道屏障功能,引起吸收障碍和腹泻,影响动物的生长发育,从而给畜牧业造成了重大损失。因此,本文选取大豆中主要抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽为致敏原,以仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为体外研究... 详细信息

大豆抗原蛋白能够破坏仔猪等幼龄动物的肠道屏障功能,引起吸收障碍和腹泻,影响动物的生长发育,从而给畜牧业造成了重大损失。因此,本文选取大豆中主要抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽为致敏原,以仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为体外研究模型,通过三个试验,研究了不同浓度的大豆抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽对IPEC-J2机械屏障功能损伤的影响,为进一步探究大豆对肠道损伤的相关机制提供依据。试验I:大豆抗原蛋白β-Conglycinin酶解肽的分离、纯化及其免疫活性鉴定。本试验通过胃蛋白酶、胰蛋白酶连续水解β-conglycinin,采用凝胶层析技术及超滤法分离纯化酶解肽段,再通过SDS-PAGE电泳试验及Q-E质谱进行鉴定。结果表明:这三条酶解肽段的分子量分别为52kDa、30kDa、25kDa,并且均具有免疫活性,再通过凝胶层析技术分离纯化后,得到分子量为52kDa的酶解肽段,经超滤管超滤得到分子量为30kDa与25kDa酶解肽段的混合产物。试验II:不同浓度的大豆抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽对IPEC-J2通透性的影响。本试验分别采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1或2 mg/mL)β-Conglycinin及其酶解肽处理IPEC-J2不同时间(2 h、4 h、6 h、8 h、12 h或24 h)后,通过测定细胞存活力(MTT值),跨上皮细胞电阻值(TEER)以及细胞培养液中碱性磷酸酶(AP)的活性,检测β-Conglycinin及其酶解肽对细胞通透性的影响。结果发现25+30kDa混合酶解肽对IPEC-J2的破坏程度最强,酶解总产物次之,各处理组之间差异显著(P细胞增殖活力,从而对IPEC-J2屏障造成负面影响。试验III:β-Conglycinin及其酶解肽对IPEC-J2紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-3、Claudin-4和ZO-1)的分布与相对表达量的影响。为了进一步验证β-Conglycinin及其酶解肽对IPEC-J2机械屏障功能的损伤,本试验选用浓度为0.5mg/mLβ-Conglycinin及其酶解肽处理IPEC-J2 24h后,采用免疫荧光法和Western Blot法检测紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-3、Claudin-4和ZO-1)在细胞中的分布及相对表达含量;结果发现β-Conglycinin及其酶解肽刺激IPEC-J2后细胞间紧密连接处荧光染色程度降低且变得模糊和松散,通过Western Blot方法测得,紧密连接蛋白Occludin、Claudin-3、Claudin-4和ZO-1蛋白的相对表达量与对照组相比均有所下降(P上皮屏障及其防护功能受损。综上所述:β-Conglycinin经消化酶水解后,对IPEC-J2械屏障功能的损伤能力加强。即:酶解肽对IPEC-J2的损伤程度高于β-Conglycinin。而在各酶解肽段中,低分子量酶解肽破坏作用最为严重,酶解总产物次之、52kDa酶解肽较轻。以上研究结果为更进一步的揭示大豆的致敏机理提供依据。

关键词：大豆抗原β-Conglycinin β-Conglycinin酶解肽仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能紧密连接

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β-伴大豆球蛋白及其酶解肽对仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能损伤的比较研究

β-伴大豆球蛋白及其酶解肽对仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能损伤...

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会

作者：赵元刘丹丹张诗尧潘丽娜仁高娃吉林农业大学动物科学科技学院动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林省动物营养与饲料科学重点实验室

大豆抗原蛋白能够破坏仔猪等幼龄动物的肠道屏障功能,大豆抗原β-Conglycinin经消化酶酶解后可产生三条主要酶解肽。因此,本文选取大豆中主要抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽为致敏原,以仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为体外研究模型采用... 详细信息

大豆抗原蛋白能够破坏仔猪等幼龄动物的肠道屏障功能,大豆抗原β-Conglycinin经消化酶酶解后可产生三条主要酶解肽。因此,本文选取大豆中主要抗原蛋白β-Conglycinin及其酶解肽为致敏原,以仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为体外研究模型采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1或2 mg/mL)β-Conglycinin及其酶解肽处理IPEC-J2不同时间(2、4、6、8、12或24 h)后,测定细胞存活力(MTT值),跨上皮细胞电阻值(TEER)以及细胞培养液中碱性磷酸酶(AP)的活性,检测β-Conglycinin及其酶解肽对细胞通透性的影响,进而选用浓度为0.5 mg/mLβ-Conglycinin及其酶解肽处理IPEC-J2 24h后,采用免疫荧光法和Western Blot法检测紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-3、Claudin-4和ZO-1)在细胞中的分布及相对表达含量。结果显示,(25+30)kD混合酶解肽对IPEC-J2的破坏程度最强,酶解总产物次之,且各组之间差异显著(P细胞间紧密连接处荧光染色程度降低且变得模糊和松散,通过Western Blot方法测得,紧密连接蛋白Occludin、Claudin-3、Claudin-4和ZO-1蛋白的相对表达量与对照组相比均有所下降(P<0.05)。综上所述,β-Conglycinin经消化酶水解后,对IPEC-J2械屏障功能的损伤能力加强,即酶解肽对IPEC-J2的损伤程度高于β-Conglycinin。而在各酶解肽段中,低分子量酶解肽破坏作用最为严重,酶解总产物次之,52 kD酶解肽较轻。以上研究结果为更进一步的揭示大豆的致敏机理提供依据。

关键词：大豆抗原β-Conglycinin β-Conglycinin酶解肽仔猪空肠上皮细胞机械屏障功能紧密连接

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维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响

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浙江农业学报 2021年第11期33卷 2026-2033页

作者：杨菊邓俊良夏江英宋天浩庞莲凤任志华四川农业大学动物医学院/动物疫病与人类健康四川省重点实验室/环境公害与动物疾病四川省高校重点实验室四川成都611130

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障... 详细信息

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^(-1)大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P细胞活力(P细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加重了这种损伤。

关键词：大豆7S球蛋白维生素A 仔猪空肠上皮细胞通透性紧密连接蛋白

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对IPEC-J2细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响及其自噬机制

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 746-751页

作者：萧晟刘丹丹甘芳黄克和芜湖职业技术学院安徽芜湖241003 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L-1)DON处理IPE... 详细信息

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L-1)DON处理IPEC-J2细胞24h后,采用MTT、Hoechst33258、Westernblot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L^-1DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L^-1时,细胞活性显著(P细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3表达显著增加(P细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇仔猪空肠上皮细胞细胞凋亡紧密连接细胞自噬

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壳寡糖对LPS诱导IPEC-J2细胞氧化损伤的作用研究

壳寡糖对LPS诱导IPEC-J2细胞氧化损伤的作用研究

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作者：钟佳湖南农业大学

学位级别：硕士

目的：本项目研究通过用脂多糖(LPS)诱导仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化应激所建立的模型,来探讨壳寡糖(COS)的抗氧化活性及作用机理,为COS的临床应用提供理论基础。方法：1、采用MTT法检测LPS (0、0.1、1、10μg/ml)和COS(0、50、100、... 详细信息

目的：本项目研究通过用脂多糖(LPS)诱导仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化应激所建立的模型,来探讨壳寡糖(COS)的抗氧化活性及作用机理,为COS的临床应用提供理论基础。方法：1、采用MTT法检测LPS (0、0.1、1、10μg/ml)和COS(0、50、100、200、 400μg/ml)对IPEC-J2细胞作用12h、24h、48h后,细胞增值活性的变化。2、将试验分为对照组、LPS组、COS组、LPS+COS组,采用Western Blot法检测各组中Nrf2和HO-1蛋白的表达量：采用免疫组化的方法检测各组中P38、JNK、8-OHdG蛋白的表达量;采用硫代巴比妥酸比色法检测MDA含量、钼酸铵比色法检测CAT活性、黄嘌呤氧化酶比色法检测SOD活性。3、试验数据采用SPSS19.0统计分析软件的t-检验法,进行单因素方差分析比较,以P细胞增殖率为58.4%,为造模的最适浓度和作用时间;COS在一定浓度范围内对IPEC-J2有增殖作用,其浓度为200μg/ml时效果最佳,作用时间为24h时,细胞增值率达到126.3%。2、LPS+COS组较对照组的Nrf2和HO-1蛋白相对表达量显著升高(p0.05);LPS+COS组较LPS组的SOD、CAT活性升高,MDA含量降低,差异显著(p细胞中的表达差异不显著(p>0.05)。结论：COS可降低P38和8-OHdG蛋白的表达,诱导Nrf2和HO-1蛋白的高表达,同时,提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物含量,增强细胞对氧化应激的抵抗力,从而起到保护作用。

关键词：壳寡糖脂多糖仔猪空肠上皮细胞氧化应激抗氧化作用

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玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞屏障功能的损伤及谷氨酰胺的保护作用

玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞屏障功能的损伤及谷氨酰胺的保护作用

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会

作者：杨丽革李建平单安山东北农业大学动物营养研究所

本试验旨在研究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)致仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)屏障功能损伤的保护作用。选取不同浓度(0、5、10、15、20、25、30、35、40μg/mL)的ZEA处理IPEC-J2(12、24、48 h),通过测定细胞存... 详细信息

本试验旨在研究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)致仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)屏障功能损伤的保护作用。选取不同浓度(0、5、10、15、20、25、30、35、40μg/mL)的ZEA处理IPEC-J2(12、24、48 h),通过测定细胞存活率(CCK-8法),得出ZEA处理IPEC-J2 24 h时的半数抑制浓度为(23.68±0.83)μg/mL,最终选用20μg/mL ZEA处理细胞24 h。并在此基础上设计试验,试验分为5个处理,即0 mmol/L Gln+0μg/mL ZEA组(对照组)、0 mmol/L Gln+20μg/mL ZEA组、1 mmol/L Gln+20μg/mL ZEA组、2 mmol/L Gln+20μg/mL ZEA组、4 mmol/L Gln+20μg/mL ZEA组。分别用试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性和活性氧(ROS)含量;ELISA方法检测细胞中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、免疫球蛋白G(IgG)的含量;实时荧光定量PCR的方法检测细胞中Occludin、pBD-2、MUC-1 mRNA表达情况。结果表明:1)与对照组相比,20μg/mL ZEA能引起细胞中LDH活性和ROS含量显著增加(P细胞中sIgA和IgG的含量均显著降低(P细胞中sIgA的含量;分别添加1、2、4 mmol/L Gln后均能显著增加(P细胞中Occludin、Pbd-2、MUC-1 mRNA表达量均显著降低(P细胞的屏障功能损伤,且以2 mmol/L Gln添加效果最好。

关键词：玉米赤霉烯酮谷氨酰胺仔猪空肠上皮细胞屏障功能

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