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卵巢癌抗独特型单链抗体的人源化——抗独特型微抗体的构建与表达

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第4期18卷 490-494页

作者：崔恒昌晓红冯捷刘蓓曹善津北京大学人民医院妇科肿瘤中心北京100044

为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人igg1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,... 详细信息

为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人igg1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,构建抗独特型微抗体的原核表达载体 .转化E .coliBL2 1(DE3)后用IPTG诱导表达 .经SDS PAGE分离显示 ,在 5 0kD左右处有一诱导蛋白带 .不连续非变性凝胶电泳显示 ,表达产物分子量为 10 0kD左右 .采用ELISA、竞争抑制实验、West ern印迹对其进行活性测定 .结果表明 ,人源化的抗独特型微抗体具有特异性双价结合卵巢癌单克隆抗体COC16 6 9和识别人免疫球蛋白igg1的活性。

关键词：卵巢癌抗独特型单链抗体人源化抗独特型微抗体构建表达人igg1 重组融合基因

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阿达木单抗治疗类风湿关节炎的进展

中华内科杂志 2010年第7期49卷 634-635页

作者：徐沪济长征医院风湿免疫科上海200003

阿达木单抗是一种可以与TNFα特异性结合的重组全人igg1单克隆抗体,临床研究证实,阿达木单抗在大多数类风湿关节炎（RA）患者中有效,能快速改善关节肿痛等临床表现,显著抑制结构性关节损伤,改善生存质量,提高劳动力,且具有良好的耐受性... 详细信息

阿达木单抗是一种可以与TNFα特异性结合的重组全人igg1单克隆抗体,临床研究证实,阿达木单抗在大多数类风湿关节炎（RA）患者中有效,能快速改善关节肿痛等临床表现,显著抑制结构性关节损伤,改善生存质量,提高劳动力,且具有良好的耐受性等,现就阿达木单抗的作用机制及其治疗RA的临床试验综述如下.

关键词：类风湿关节炎单抗治疗阿达木单抗单克隆抗体人igg1 特异性结合 TNFα 临床研究

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

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世界华人消化杂志 2005年第6期13卷 760-765页

作者：高巍周永兴张惠中聂青和中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊治中心陕西省西安市710038 中国人民解放军第四军医大学唐都医院中心实验室陕西省西安市710038

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人igg1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-igg1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克... 详细信息

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人igg1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-igg1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-igg1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-igg1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-igg1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

关键词： TGF-β1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体逆转录病毒载体可溶性重组DNA技术 PA317细胞 PCR方法病毒滴度测定基因治疗肝纤维化 TβRⅡ 重组质粒人igg1 pLXSN 脂质体介导限制性酶切构建表达融合蛋白目的基因产物纯化

模拟卵巢癌抗原的人源化抗独特型抗体的构建与表达

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中国妇产科临床杂志 2002年第1期3卷 44-47页

作者：崔恒昌晓红冯捷刘蓓曹善津李小平钱和年北京大学人民医院妇科肿瘤中心 100044

目的对模拟人卵巢癌抗原的鼠源性抗独特型单链抗体6B11scFv进行人源化改造和表达。方法采用重叠PCR和基因工程技术,将6811scFv基因与人igg1铰链区和CH3区的基因进行融合,构建人源化抗独特型抗体6811VHVLhC基因。用IPTG诱导大肠杆菌进... 详细信息

目的对模拟人卵巢癌抗原的鼠源性抗独特型单链抗体6B11scFv进行人源化改造和表达。方法采用重叠PCR和基因工程技术,将6811scFv基因与人igg1铰链区和CH3区的基因进行融合,构建人源化抗独特型抗体6811VHVLhC基因。用IPTG诱导大肠杆菌进行表达,并采用酶切法、DNA测序、SDS—PAGE电泳、ELISA和免疫印迹技术等进行鉴定。结果酶切和DNA测序表明插入片段正确;SDS—PAGE凝胶电泳显示融合蛋白分子量50 000 Da处有一诱导蛋白带;而不连续非变性凝胶电泳表达产物分子量为100 000 Da;ELISA和免疫印迹结果显示,表达出的6811VHVLhC人源化抗体仍具有6B11scFv和人igg1CH3的活性。结论已成功构建并表达出双价的可模拟卵巢癌抗原的人源化抗独特型抗体。

关键词：抗独特型抗体人源化人igg1 卵巢肿瘤融合蛋白

pSLX-CMV/TβRII-igg1Fc载体的构建

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胃肠病学和肝病学杂志 2005年第3期14卷 230-234页

作者：高巍周永兴张惠中聂青和西安市第四军医大学唐都医院西安710038

目的构建表达人TGFβ1II型受体细胞外结合区和人igg1Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。方法以RTPCR方法扩增目的基因TβRIIigg1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测... 详细信息

目的构建表达人TGFβ1II型受体细胞外结合区和人igg1Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。方法以RTPCR方法扩增目的基因TβRIIigg1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRIIigg1Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pSLXCMV中,重组质粒pSLXCMV/TβRIIigg1Fc在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度。结果经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确无误,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系。结论成功构建了重组质粒pSLXCMV/TβRIIigg1Fc,可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径。

关键词： Fc 逆转录病毒载体 RT-PCR方法重组DNA技术 PA317细胞病毒滴度测定基因治疗肝纤维化重组质粒人igg1 TGF-β 脂质体介导限制性酶切 1型受体构建表达融合蛋白目的基因产物纯化酶切鉴定阳性克隆包装细胞抗性克隆