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微小RNA-335-5p调控BMP-2对人bmscs成骨分化的影响

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中国修复重建外科杂志 2020年第6期34卷 781-786页

作者：黄振明蔡卓钱静汪建雄胡宁武汉市第九医院创伤外科武汉430080 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430000 重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400000

目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-335-5p调控BMP-2对人bmscs(human bmscs,hbmscs)成骨分化的影响。方法体外培养hbmscs,随机分为对照组(A组)、miR-335-5p mimics(模拟物)组(B组)、miR-335-5p mimics阴性对照组(C组)、miR-335-5p inhibitor(抑制剂)组(D组)、miR-335-5p inhibitor阴性对照组(E组),分组处理后并诱导其成骨分化,行ALP及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-335-5p、BMP-2及成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达;采用Western blot检测各组细胞Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白表达情况。结果与A组比较,B组ALP阳性细胞相对比例,矿化结节相对比例,BMP-2、miR-335-5p、OCN、OPN、Runx2 mRNA相对表达量,Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白相对表达量均明显升高,D组各指标均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-335-5p可上调BMP-2表达,进而促进hbmscs成骨分化。

关键词：微小RNA-335-5p BMP-2 人bmscs 成骨分化

白血病抑制因子联合bFGF对人bmscs增殖及分化的影响

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中国修复重建外科杂志 2014年第9期28卷 1150-1155页

作者：施剑明曹俊殷明殷嫦嫦程细高谢荣辉林思文徐浚怀九江学院基础医学院江西九江332000 南昌大学研究生院医学部南昌大学第二附属医院骨科

目的研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)联合bFGF对人bmscs(human bmscs,hbmscs)增殖及分化的影响。方法取第4代hbmscs根据培养条件不同分为4组:A组为对照组,加入完全培养基(含10%FBS的α-MEM)常规培养;B组加入含10 ng/mL LIF的完全培养基;C组加入含10 ng/mL bFGF的完全培养基;D组加入含10 ng/mL LIF和10 ng/mL bFGF的完全培养基。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)测定各组第4代hbmscs生长曲线;倒置相差显微镜观察各组hbmscs形态变化;流式细胞术检测各组第8代hbmscs表面标志CD44、CD90、CD19、CD34表达情况。结果 4组细胞生长曲线均近似S形,且细胞增殖速率表现为D组>C组>B组>A组。各组细胞形态观察发现A组细胞较早出现衰老和分化现象;B组细胞早期形态维持较好,但增殖相对缓慢,后期出现部分衰老细胞;C组少量细胞呈神经样细胞分化,但增殖较快;D组细胞增殖迅速,且能长期维持hbmscs形态特征。流式细胞术检测示,A、C组骨髓基质标志CD44、CD90表达较B、D组低;各组造血细胞标志CD19、CD34均呈阴性,组间差异不明显。结论 LIF联合bFGF不仅可以维持hbmscs的多向分化潜能,而且能够促进其快速增殖。

关键词：白血病抑制因子 bFGF 人bmscs 细胞增殖细胞分化

腺病毒介导Wnt10b基因调控人bmscs成骨成脂分化的体外实验研究

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中国修复重建外科杂志 2014年第10期28卷 1284-1291页

作者：周勇邹昌闵理石锐张闻力罗翼彭静段宏屠重棋张晖四川大学华西医院骨科成都610041

目的体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人bmscs(human bmscs,hbmscs)成骨成脂分化的调控。方法取健康成人髂骨骨髓分离培养hbmscs,取第4代细胞并分为4组:A、B、C组分别加入Wnt10b基因表达腺病毒载体、Wnt10b基因沉默(Wnt10b... 详细信息

目的体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人bmscs(human bmscs,hbmscs)成骨成脂分化的调控。方法取健康成人髂骨骨髓分离培养hbmscs,取第4代细胞并分为4组:A、B、C组分别加入Wnt10b基因表达腺病毒载体、Wnt10b基因沉默(Wnt10b-shRNA)腺病毒载体和空病毒转染细胞,D组细胞不进行转染作为空白对照组。各组进行成骨、成脂和无诱导培养,通过ALP染色、茜素红染色和油红O染色检测Wnt10b对各组成骨成脂分化的影响,通过实时荧光定量PCR检测成骨和成脂相关基因表达,Western blot检测成骨和成脂相关蛋白表达,了解Wnt10b对hbmscs成骨成脂转录和蛋白水平的影响。结果成骨诱导培养后ALP染色4组均呈阳性,A组呈强阳性,B组染色最弱;茜素红染色A组出现大量片状融合褐色矿化结节,B组见少许点状褐色矿化结节,C、D组出现大量点状褐色矿化结节。成脂诱导培养后油红O染色B、C、D组呈强阳性表现,其中B组最强;A组散在小团状着色区,数量较其他组明显减少。荧光定量PCR和Western blot结果示:A组成骨转录因子和蛋白表达高于B、C、D组,B组低于C、D组;而成脂转录因子和蛋白表达与成骨转录因子及蛋白表达情况相反。结论 Wnt10b基因高表达促进hbmscs向成骨分化,低表达则促进成脂分化。

关键词： Wnt10b基因人bmscs 成骨分化成脂分化

低氧诱导因子1α及2α在人bmscs成软骨分化中的表达规律

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中国修复重建外科杂志 2015年第7期29卷 857-862页

作者：龚铭黄胜罗嘉全黄保丁周治宇代学俊高蔓蔓李亮平邹学农中山大学附属第一医院脊柱外科/骨科研究所广州510080 中山大学附属第六医院骨外科昆明市延安医院脊柱外科

目的通过诱导人bmscs(human bmscs,hbmscs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hbmscs进行离心沉淀... 详细信息

目的通过诱导人bmscs(human bmscs,hbmscs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hbmscs进行离心沉淀,形成细胞微球。将细胞微球分为2组,对照组加入含2%FBS的H-DMEM培养基,成软骨诱导组加入软骨诱导液,于低氧(2%O2)条件下培养。培养3周后行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,培养1周行Western blot检测HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,培养1、2、3周行实时定量PCR检测成软骨分化关键转录因子及相关标志基因表达。结果甲苯胺蓝染色示,对照组染色细胞核整体分布稀疏,而成软骨诱导组分布致密;成软骨诱导组细胞外基质染色明显较对照组深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示阳性信号主要位于细胞质内;与成软骨诱导组相比,对照组细胞核分布较稀疏且着色浅。Western blot检测示,培养1周成软骨诱导组HIF-1α和HIF-2α蛋白相对表达量均显著低于对照组(t=8.345,P=0.001;t=7.683,P=0.002)。实时定量PCR检测示,与对照组比较,成软骨诱导组HIF-1αmRNA相对表达量在培养1周时降低、2周时显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。成软骨诱导组培养各时间点HIF-2αmRNA相对表达量均显著低于对照组,Sox-9 mRNA相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义(Pbmscs成软骨分化过程,但HIF-2α表达在该分化过程中受抑制。

关键词：低氧诱导因子人bmscs 成软骨分化