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人骨髓间质干细胞治疗肌萎缩侧索硬化症模型小鼠的行为学和病理学研究

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中国病理生理杂志 2010年第1期26卷 101-106页

作者：赵翠萍张成黄慧周畅山东大学第二医院神经内科山东济南250033 中山大学附属第一医院神经科广东广州510080

目的:研究静脉移植人骨髓间质干细胞对肌萎缩侧索硬化症(ALS)模型小鼠生存期和病理变化的影响。方法:体外培养扩增人骨髓间质干细胞(hMSCs),流式细胞仪鉴定hMSCs的性质及纯度,微量尾静脉血提取模型小鼠DNA,PCR扩增鉴定肌萎缩侧索硬化症... 详细信息

目的:研究静脉移植人骨髓间质干细胞对肌萎缩侧索硬化症(ALS)模型小鼠生存期和病理变化的影响。方法:体外培养扩增人骨髓间质干细胞(hMSCs),流式细胞仪鉴定hMSCs的性质及纯度,微量尾静脉血提取模型小鼠DNA,PCR扩增鉴定肌萎缩侧索硬化症模型小鼠(SOD1-G93A阳性小鼠)。将3×106个第5代hM-SCs尾静脉移植入预放疗8周的SOD1-G93A阳性小鼠,用Weyd4分法进行评定移植小鼠和未治疗小鼠的生存期、发病时间,尼氏染色计数脊髓前角运动神经元,组织DNA提取、PCR检测人特异性基因β-globin基因来验证hMSCs在受体小鼠中的植入。结果:生存分析显示尾静脉移植hMSCs的ALS模型小鼠生存期比未治疗小鼠延长18d,延缓发病14d;尼氏染色显示在16周、20周移植小鼠脊髓前角大运动神经元计数多于未治疗小鼠;终末期hMSCs移植小鼠中,在中枢神经系统可检测到人特异性该基因。结论:hMSCs可经过尾静脉移植在ALS小鼠中长期植入,延长生存期,减少脊髓前角运动神经元的丢失,有一定的治疗作用。

关键词：人骨髓间质干细胞肌萎缩侧索硬化症 SOD1-G93A转基因模型小鼠移植

人骨髓间质干细胞治疗实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2007年第7期27卷 689-693,I0001页

作者：贾鹏曾彦英丁新生丁海霞张巧全邓晓萱姚娟南京医科大学第一附属医院神经内科江苏南京210029 南京脑科医院病理科江苏南京210029

目的:研究尾静脉注射人骨髓间质干细胞(hMSCs)移植治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效及移植后hMSCs在EAE大鼠体内的状况。方法:分离和纯化hMSCs。用豚鼠脑脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE大鼠模型,分别在免疫后10、15、21天... 详细信息

目的:研究尾静脉注射人骨髓间质干细胞(hMSCs)移植治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效及移植后hMSCs在EAE大鼠体内的状况。方法:分离和纯化hMSCs。用豚鼠脑脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE大鼠模型,分别在免疫后10、15、21天经尾静脉注射移植未分化的hMSCs入大鼠体内,通过电镜,动物模型神经功能评分,病理观察hMSCs对EAE大鼠的疗效,利用免疫组化方法观察移植后的hMSCs在EAE大鼠体内存活、迁徙、分化的状况。结果:免疫后10天和15天hMSCs移植组大鼠自移植后10天起其神经功能评分显著低于对照组(P细胞,CNPase(+)的少突胶质细胞比例随时间的延长而逐渐增多。结论:hMSCs移植能有效改善EAE动物的神经功能评分,减少脱髓鞘病灶数目,并且在体内微环境改变信号的影响下分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。

关键词：人骨髓间质干细胞移植实验性变态反应性脑脊髓炎

人骨髓间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究

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临床检验杂志 2003年第4期21卷 193-195页

作者：许文荣张锡然钱晖朱伟孙晓春胡嘉波顾可梁南京师范大学生命科学学院南京210097 江苏大学医学技术学院镇江212001

目的　分离纯化人骨髓间质干细胞 (MSC) ,研究其基本生物学特性。方法　用比密 1 .0 73Ficoll淋巴细胞分离液分离成人骨髓MSC ,体外扩增 ,观察细胞生长特性 ,流式细胞仪检测骨髓MSC表面抗原表达及细胞周期 ,染色体技术分析骨髓MSC遗传... 详细信息

目的　分离纯化人骨髓间质干细胞 (MSC) ,研究其基本生物学特性。方法　用比密 1 .0 73Ficoll淋巴细胞分离液分离成人骨髓MSC ,体外扩增 ,观察细胞生长特性 ,流式细胞仪检测骨髓MSC表面抗原表达及细胞周期 ,染色体技术分析骨髓MSC遗传特性。结果　成人骨髓MSC培养 3d后有散在呈针尖状的贴壁细胞 ,7～ 1 0d后形成集落或融合呈纤维状 ;体外扩增原代可获得 (4～ 6 )× 1 0 5个细胞 ,1 0代可获得 (1～ 5 )× 1 0 1 0 个细胞 ,5～ 6代以后的细胞增殖能力下降 ;流式细胞仪检测结果显示 :CD1 3、CD2 9、CD4 4、CD71表达阳性 ,CD3、CDl4、CD33、CD34、CD38、CD4 5、HLA DR不表达 ;染色体核型正常 ;细胞周期分析显示 ,G0 /G1 期 :79.4 8% ,G2 /M期 :6 .1 0 % ,S期 :1 4 .4 2 %。结论　人骨髓MSC体外具有较好的增殖更新能力 ,3～

关键词：人骨髓间质干细胞分离纯化生物学特性

人骨髓间质干细胞移植趋向小鼠脑胶质瘤的研究

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中华实验外科杂志 2013年第10期30卷 2111-2113页

作者：张弩林坚盛汉松尹波周辉温州医学院附属第二医院神经外科 325027

目的检测通过颈动脉注射人骨髓间质细胞（hMSCs）移植趋向小鼠脑胶质瘤.方法分离培养hMSCs,检测其CD73、CD105和CD90的表达；分析U87细胞条件培养基对体外hMSCs迁徙的作用,测定U87细胞培养液上清中转化生长因子（TGF）-β1和血管内皮... 详细信息

目的检测通过颈动脉注射人骨髓间质细胞（hMSCs）移植趋向小鼠脑胶质瘤.方法分离培养hMSCs,检测其CD73、CD105和CD90的表达；分析U87细胞条件培养基对体外hMSCs迁徙的作用,测定U87细胞培养液上清中转化生长因子（TGF）-β1和血管内皮生长因子（VEGF）的表达；通过颈动脉注射移植携带绿色荧光蛋白（GFP）的hMSCs,观察其向裸小鼠U87脑移植瘤模型趋向及肿瘤新生血管的生成情况.结果分离培养的hMSCs呈长梭形、折光性强的成纤维样细胞形态,高表达CD73、CD105和CD90; U87条件培养基可以促进hMSCs的细胞迁移,在培养3d时,U87细胞培养上清的TGF-β1为（0.633±0.096） μg/L,而VEGF为（4.065±0.189） μg/L;将GFP标记的hMSCs通过颈动脉注射移植,3d后在裸小鼠脑内可观察到带有绿色荧光的细胞.结论颈动脉注射移植的hMSCs能够趋向迁徙到裸小鼠脑胶质瘤,可能与肿瘤分泌的细胞因子相关.

关键词：人骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白胶质瘤微血管密度小鼠

人骨髓间质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的鉴定

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中国临床康复 2004年第2期8卷 236-237,T003页

作者：江逊崔鹏程曹云新陈文弦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东省广州市510632 解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科陕西省西安市710038 解放军第四军医大学免疫学教研室陕西省西安市710038

目的:为软骨组织工程寻求一种新的种子细胞来源,对从人骨髓中所分离培养的骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)进行鉴定。方法:利用流式细胞仪对所分离培养的细胞表面标志物(CD29,CD44,CD14,CD34,CD45)进行分析鉴定。结果:细胞... 详细信息

目的:为软骨组织工程寻求一种新的种子细胞来源,对从人骨髓中所分离培养的骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)进行鉴定。方法:利用流式细胞仪对所分离培养的细胞表面标志物(CD29,CD44,CD14,CD34,CD45)进行分析鉴定。结果:细胞表面抗原抗CD29,CD44抗体为阳性,抗CD14,CD34,CD45抗体为阴性。结论:采用流式细胞仪对人MSCs鉴定结果可为组织工程种子细胞的获得提供基础。

关键词：人骨髓间质干细胞软骨组织工程种子细胞 MSCs 流式细胞仪 FACS

高浓度他克莫司抑制人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2011年第3期25卷 223-228页

作者：韦鸿雁潘伟邱霓黄丽周宏灏肖洲生湖南省人民医院临床药学室湖南长沙410005 中南大学临床药理研究所湖南长沙410078

目的探讨他克莫司（FK506）对人骨髓间质干细胞（hBMSCs）增殖及向成骨细胞分化的影响。方法 FK506 0.001-5μmo.lL-1处理hBMSCs细胞中,雌二醇0.01μmol·L^-1或咖啡因100μmol·L^-1为阳性对照组,作用24 h后用BrdU掺入法检测细胞增殖,... 详细信息

目的探讨他克莫司（FK506）对人骨髓间质干细胞（hBMSCs）增殖及向成骨细胞分化的影响。方法 FK506 0.001-5μmo.lL-1处理hBMSCs细胞中,雌二醇0.01μmol·L^-1或咖啡因100μmol·L^-1为阳性对照组,作用24 h后用BrdU掺入法检测细胞增殖,在促成骨细胞分化液中作用8 d后用比色法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,作用12 d后用邻甲酚酞络合法检测钙沉积量;通过检测磷酸盐释放量间接反映钙调神经磷酸酶（CaN）活性,Western印迹法检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）表达。结果与DMSO对照组相比,FK506 0.001-0.01μmol·L^-1促进细胞增殖,但对ALP活性及钙沉积量无影响;FK506 0.5-5μmo·lL^-1呈浓度依赖性地抑制细胞增殖,显著抑制ALP活性及减少钙沉积量（P〈0.05）。此外,FK5060.1-5μmo·lL^-1浓度依赖性地降低CaN活性,与相同浓度FK506呈浓度依赖性地下调Cbfα1的表达效应相一致。结论高浓度FK506可通过CaN/Cbfα1通路抑制hBMSCs增殖及向成骨细胞成骨分化。

关键词：他克莫司人骨髓间质干细胞钙调神经磷酸酶核心结合因子α1亚基

人骨髓间质干细胞向成骨细胞诱导分化条件的建立

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新疆医科大学学报 2006年第11期29卷 1021-1025页

作者：李静何惠宇张保卫上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔修复科上海200011 新疆医科大学第一附属医院口腔科新疆乌鲁木齐830054

目的:探讨体外诱导培养人骨髓间质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的方法和技术,为骨组织工程研究提供理想的种子细胞.方法:抽取无系统疾病自愿捐献骨髓患者的骨髓,体外分离诱导培养BMSCs,按照诱导条件加入时间的先后次序分为早期诱导组(A... 详细信息

目的:探讨体外诱导培养人骨髓间质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的方法和技术,为骨组织工程研究提供理想的种子细胞.方法:抽取无系统疾病自愿捐献骨髓患者的骨髓,体外分离诱导培养BMSCs,按照诱导条件加入时间的先后次序分为早期诱导组(A组)和延迟诱导组(B组),镜下观察2组细胞形态学变化,计算倍增时间,并测定2组骨钙素的含量和Ⅰ型胶原的表达,研究该细胞生物学特性及其体外成骨能力.结果:(1)镜下观察:A组细胞贴壁,呈菱形,5～7 d融合,成纤维细胞集落样生长;B组细胞贴壁,呈梭形,3～5 d融合,呈指纹状生长方式.(2)倍增时间:A组第1、2、3、4代倍增时间分别为18.86、17.45、18.71、20.99 h;B组第1、2、3代倍增时间分别为17.54、19.59、25.46 h,第4代停止生长,2组各代倍增时间差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)骨钙素:A组各代均可检测到骨钙素,Ⅰ型胶原自原代就有阳性表达,第3、4代细胞达到最强;B组原代、第1代细胞中未检测到骨钙素,诱导后才分泌骨钙素,Ⅰ型胶原各代均有阳性表达,但不均匀,第4代细胞停止增殖,无阳性表达.结论:应用成骨细胞条件培养液在体外能够促进人BMSCs向成骨细胞分化,验证了BMSCs是一种比较理想的骨组织工程种子细胞.早期诱导是较为完善的体外诱导培养条件和方法.

关键词：组织工程种子细胞人骨髓间质干细胞

人骨髓间质干细胞ING4基因的克隆及其慢病毒表达载体构建

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江苏大学学报（医学版） 2007年第5期17卷 376-378页

作者：张蕾蕾许文荣乔纯钱晖朱伟李继刚周洪兴司煜安周宗海阴晴江苏大学医学技术学院江苏镇江212003 江苏大学附属医院检验科江苏镇江212003

目的:克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,构建其慢病毒表达载体PNL-ING4。方法:提取人骨髓间质干细胞(hMSCs)总RNA,经RT-PCR扩增出ING4cDNA,克隆至PMD19-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和测序,构建... 详细信息

目的:克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,构建其慢病毒表达载体PNL-ING4。方法:提取人骨髓间质干细胞(hMSCs)总RNA,经RT-PCR扩增出ING4cDNA,克隆至PMD19-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和测序,构建慢病毒表达载体PNL-ING4,用双酶切、基因测序进行鉴定。结果:RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确。结论:成功从hMSCs克隆了ING4基因并成功构建其慢病毒表达载体PNL-ING4,为进一步研究ING4基因的作用与抗肿瘤机制奠定了基础。

关键词： ING4 慢病毒表达载体人骨髓间质干细胞克隆

硝酸甘油通过一氧化氮途径促进人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化

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硝酸甘油通过一氧化氮途径促进人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞...

作者：黄丽中南大学

学位级别：硕士

目的：探讨硝酸甘油(Nitroglycerin，NTG)对人骨髓间质干细胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，HBMSCs)的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。研究方法：建立HBMSCs体外培养模型，在含10％胎牛血清的α-MEM培... 详细信息

目的：探讨硝酸甘油(Nitroglycerin，NTG)对人骨髓间质干细胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，HBMSCs)的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。研究方法：建立HBMSCs体外培养模型，在含10％胎牛血清的α-MEM培养基中加入β-甘油磷酸、维生素C和地塞米松，诱导HBMSCs向成骨细胞分化。测定一氧化氮(nitric oxide，NO)代谢产物，考察不同浓度NTG对HBMSCs的NO生成的影响;合用内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)拮抗剂L-NAME以及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)拮抗剂1400W，探讨NTG作用于HBMSCs的机制是否与eNOS或iNOS有关。给予不同浓度的NTG，考察其对HBMSCs的增殖及向成骨细胞分化的影响：检测5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入率反映细胞的增殖情况;测定细胞内碱性磷酸酶活性(alkaline phosphataseactivity，ALP activity)与钙沉积量(calcium deposition)的变化，反映不同浓度NTG对HBMSCs向成骨细胞分化的影响，探讨一氧化氮和ALP及钙沉积之间的关系。结果：硝酸甘油(0.1μM-10μM)可增加原代HBMSCs的NO生成量，该效应不能被eNOS抑制剂L-NAME及iNOS拮抗剂1400W所阻滞。NTG在0.1μM-10μM的浓度下可剂量依赖性地促进HBMSCs的增殖，而在0.5μM-10μM的浓度下可剂量依赖性地增加细胞碱性磷酸酶活性及钙沉积量。结论：硝酸甘油可通过NO途径促进HBMSCs的增殖及其向成骨细胞的分化，但其释放NO的效应在HBMSCs上并没有通过eNOS和iNOS起作用。

关键词：硝酸甘油人骨髓间质干细胞一氧化氮