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人骨髓间充质干细胞向骨骼肌定向分化的研究

复旦学报（医学版） 2004年第4期31卷 403-405,i001页

作者：沙慧芳冯久贤顾伟勇史振余上海市胸科医院胸部肿瘤研究所上海200030

目的　研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法　在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤 ,取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处 ,术后 6d及 12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果　... 详细信息

目的　研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法　在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤 ,取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处 ,术后 6d及 12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果　在术后 6d可见Dil标记细胞向骨骼肌分化 ,Myoglobin阳性表达。术后12d后可见新生骨骼肌出现典型横纹 ,细胞核MyoD1阳性表达。结论　在裸鼠损伤肌肉的微环境中 ,人骨髓间充质干细胞可向骨骼肌定向分化。

关键词：人骨髓间充质干细胞骨骼肌定向分化免疫荧光标记

人骨髓间充质干细胞过表达白细胞介素-34对THP-1细胞的调节作用

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生物工程学报 2017年第4期33卷 642-652页

作者：高雪明张顺许兆军单艳王子鸿蔡挺江雪宁波市第二医院浙江宁波315010

构建人IL-34真核表达载体并将其转染到人骨髓间充质干细胞,观察高表达IL-34的骨髓间充质干细胞对THP-1细胞的影响。PCR扩增IL-34 DNA,并将其克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP;将构建成功的重组体转染到骨髓间充质干细胞,Western blotting... 详细信息

构建人IL-34真核表达载体并将其转染到人骨髓间充质干细胞,观察高表达IL-34的骨髓间充质干细胞对THP-1细胞的影响。PCR扩增IL-34 DNA,并将其克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP;将构建成功的重组体转染到骨髓间充质干细胞,Western blotting和ELISA分析IL-34在细胞中的表达;用高表达IL-34的骨髓间充质干细胞培养上清液来培养THP-1细胞,Real-time PCR分析THP-1细胞中IL-10和TNFα的表达变化。经双酶切和测序鉴定,成功构建了pIRES2-EGFP-IL-34重组体;转染至骨髓间充质干细胞的IL-34可以促进THP-1细胞表达IL-10和TNFα。结果表明,骨髓间充质干细胞表达分泌的IL-34对THP-1有调节作用。

关键词：人骨髓间充质干细胞白细胞介素-34 THP-1细胞白细胞介素-10 肿瘤坏死因子-α

人骨髓间充质干细胞向Leydig细胞或产类固醇激素细胞体外诱导分化的研究

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四川大学学报（医学版） 2012年第4期43卷 493-497,506页

作者：吴云剑董强李胜富魏鑫龙丹曾彦四川大学华西医院泌尿外科成都610041 四川大学华西医院移植免疫实验室成都610041

目的探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向睾丸Leydig细胞分化,并确定诱导条件。方法将分离培养所获得的第3代MSCs细胞经含黄体生成素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、血小板衍化生长因子(PDGF)及白介素-1α(IL-1α)的诱导液诱导,按... 详细信息

目的探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向睾丸Leydig细胞分化,并确定诱导条件。方法将分离培养所获得的第3代MSCs细胞经含黄体生成素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、血小板衍化生长因子(PDGF)及白介素-1α(IL-1α)的诱导液诱导,按诱导液中各因子浓度不同分为A、B、C组和对照组,分别于7d、14d、21d时观察细胞形态变化,并行3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫细胞化学染色和免疫荧光染色,检测各组细胞3β-HSD的表达。以人睾酮ELISA试剂盒检测诱导细胞分泌类固醇的功能情况。结果诱导10～14d后,细胞具有Leydig细胞的形态特点;免疫细胞化学染色及免疫荧光染色显示,本研究条件下,随着诱导液中各因子浓度加大及诱导时间延长,诱导细胞3β-HSD表达阳性数和阳性率逐渐增多,以A组浓度及21d为最佳诱导浓度及时间(P人骨髓MSCs经体外诱导后可以分化为Leydig细胞或产类固醇细胞。

关键词：人骨髓间充质干细胞诱导分化 Leydig细胞产类固醇激素细胞

人骨髓间充质干细胞体外分化为肝样细胞的实验研究

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南方医科大学学报 2006年第10期26卷 1439-1442页

作者：谢金敏陈建锋高毅姚坤厚南方医科大学珠江医院普外科广东广州510282

目的探索肝细胞生长因子(HGF)联合成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(HMSCs)向肝细胞方向分化的能力,为生物人工肝及肝细胞移植等找到新的种子细胞来源。方法分别用HGF、FGF-4、HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞;以... 详细信息

目的探索肝细胞生长因子(HGF)联合成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(HMSCs)向肝细胞方向分化的能力,为生物人工肝及肝细胞移植等找到新的种子细胞来源。方法分别用HGF、FGF-4、HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞;以未加诱导因素的HMSCs、L-02人肝细胞株为阴、阳性对照组。相差显微镜观察细胞形态的变化;在不同诱导分化阶段免疫细胞化学染色检测AFP和CK18,并用图像分析法计算HMSCs的分化比率;免疫荧光细胞化学染色法检测AFP、ALB的表达;RT-PCR检测AFP和ALBmRNA表达的情况。结果HMSCs经诱导向肝样细胞转化,变成纺锤形、不规则圆形或多角形细胞。免疫细胞化学染色各诱导组均可检测出AFP和CK18表达,图像分析表明HGF+FGF-4联合诱导分化的AFP、CK18阳性率最高,HGF次之,FGF-4则较弱;免疫荧光细胞化学染色发现各诱导组AFP、ALB均为阳性表达,而阴性对照组则为阴性表达;各诱导组RT-PCR均可检测出AFP和ALBmRNA的表达,而阴性对照组则没有表达。结论HGF、FGF-4、HGF+FGF-4均能诱导HMSCs分化为肝样细胞,分化的肝样细胞能分泌肝细胞特异性产物AFP、ALB、CK18等。以HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞的阳性率最高,HGF次之,FGF-4则较弱。

关键词：人骨髓间充质干细胞细胞分化肝样细胞

人骨髓间充质干细胞结合多孔β-TCP构建生物相容性人工骨

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中国生物医学工程学报 2009年第1期28卷 108-116页

作者：戴文达林红方涛林李熙雷董健陈峥嵘复旦大学附属中山医院骨科复旦大学上海医学院外科学系上海200032

研究人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)结合多孔β磷酸三钙(β-TCP)的生物相容性与体内成骨作用。密度梯度离心结合差异贴壁法分离HBMSCs,常规扩增传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-... 详细信息

研究人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)结合多孔β磷酸三钙(β-TCP)的生物相容性与体内成骨作用。密度梯度离心结合差异贴壁法分离HBMSCs,常规扩增传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR;分别在成骨、成软骨和成脂肪细胞培养基中定向诱导分化,验证其多向分化能力。将HBMSCs在低压下载入多孔β-TCP立方块,形成MSCs/β-TCP复合物,电镜观察材料内部与细胞结合情况。继续成骨诱导培养2周后植入裸鼠背部皮下,于植入4周和8周后取出复合物做组织学检查。设非成骨诱导培养复合物为对照。原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好;流式细胞仪检测间充质细胞来源表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,造血细胞来源表面标记物CD34、CD45和HLA-DR阴性;能成功高效定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞;细胞在β-TCP材料表面贴附、增殖良好;MSCs/β-TCP复合物植入皮下4周后即有少量新骨生成,至8周时更明显;对照组新骨生成量较少。本方法快速、高效分离扩增HBMSCs;HRMSCs与多孔可降解β-TCP材料生物相容性良好;二者结合能显著提高体内新骨生成,提示其可用于临床作为骨移植替代物,可提高骨移植修复骨缺损的疗效。

关键词：人骨髓间充质干细胞成骨细胞 β-TCP 组织工程骨生成

人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的超微结构

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吉林大学学报（医学版） 2009年第1期35卷 13-16,F0002页

作者：邓方阁张秀英李艳茹潘力李玉林吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室吉林长春130021 广州医学院第一附属医院广州呼吸疚病研究所广东广州510120

目的:培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外向心肌细胞(CMs)定向诱导分化,进行超微结构观察,为hMSCs体外向CMs诱导分化提供理论依据。方法:体外分离培养扩增hMSCs并进行流式细胞仪分析鉴定;选用生长良好,纯度高的P5代hMSCs,用5-氮杂胞苷(... 详细信息

目的:培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外向心肌细胞(CMs)定向诱导分化,进行超微结构观察,为hMSCs体外向CMs诱导分化提供理论依据。方法:体外分离培养扩增hMSCs并进行流式细胞仪分析鉴定;选用生长良好,纯度高的P5代hMSCs,用5-氮杂胞苷(5-Aza,10μmol.L-1)体外定向向CMs诱导分化,对其进行Desmin检测,在倒置显微镜及透射电镜下观察细胞形态学和超微结构。结果:流式细胞仪检测显示体外分离纯化培养扩增出细胞不表达CD34,高表达CD44,表明扩增细胞为hMSCs。hMSCs经5-Aza诱导分化后其形态发生改变,逐渐由长梭形变为多角形及星形,并表达Desmin。透射电镜下可见细胞大小不一致,细胞表面有许多微绒毛;细胞器丰富,胞质内可见丰富的线粒体、粗面内质网;部分细胞内可见大量糖原颗粒沉积,小部分细胞内可见髓样小体;胞浆内可见肌丝样结构,细胞间存在细胞连接。结论:体外分离培养扩增的hMSCs经5-Aza诱导,可分化成具有CMs超微结构特性的心肌样细胞。

关键词：人骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷心肌细胞超微结构

人骨髓间充质干细胞脑内移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1009-1014页

作者：樊建玲来晓瑜黄黎王艳曹军丽黄河浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心杭州310003 金华市人民医院血液科金华321000 浙江中医药大学附属第一医院儿科杭州310053

目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)移植对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠脑功能影响及其在脑组织中的迁移、分化过程,探讨hMSCs移植对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为后续研究奠定基础。方法:大鼠随机分为hMSCs移植组(n=18)、移植对照组(n=... 详细信息

目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)移植对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠脑功能影响及其在脑组织中的迁移、分化过程,探讨hMSCs移植对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为后续研究奠定基础。方法:大鼠随机分为hMSCs移植组(n=18)、移植对照组(n=18)、模型组(n=6)和假手术组(n=6)。前3组均建立幼年Wistar大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,3d后hMSCs移植组缓慢注射约5×105个hMSCs至大鼠的左背侧海马,移植对照组注射等体积的磷酸盐缓冲液,假手术组和模型组未移植。其中hMSCs移植组和移植对照组又随机分为5组,分别于移植后0d、3d、1周、2周(均n=3)和4周(n=6)处死。模型组与假手术组均于造模后31d(即移植后4周)处死。大鼠处死前均行交替电刺激Y迷宫行为学实验,处死后取脑组织行H-E染色观察病理变化;hMSCs移植组和移植对照组大鼠同时还行免疫组化染色检测hMSCs在脑内的分布。结果:免疫组化结果显示hMSCs移植后1周主要沿脑室系统迁移,部分沿胼胝体向对侧迁移,移植后4周细胞沿脑室向周围实质迁移,广泛分布于脑组织。Y迷宫实验显示hMSCs移植组总错误次数(TE)明显少于移植对照组(5.00±2.82 vs12.67±3.72),差异有统计学意义(P<0.05),提示hMSCs移植组大鼠空间记忆能力显著优于移植对照组。H-E染色结果显示hMSCs移植组大鼠脑组织损伤较移植对照组及模型组轻。结论:hMSCs脑内移植后可在大鼠中枢神经系统内存活并迁移,且hMSCs移植能在一定程度上促进损伤脑组织和脑功能的恢复,值得进一步研究。

关键词：人骨髓间充质干细胞细胞移植缺氧缺血脑

人骨髓间充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖及Treg细胞亚群的影响

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中华血液学杂志 2011年第6期32卷 416-418页

作者：侯十前袁军张学军张硕潘崚王福旭杨敬慈姚丽河北医科大学第二医院血液科石家庄050000 河北省人民医院血液科

间充质干细胞（MSC）可抑制移植物抗宿主病（GVHD），提高异基因移植的成功率，但具体机制尚不清楚。我们通过观察人MSC直接和间接对T淋巴细胞增殖及调节性T淋巴细胞（Treg）亚群的影响，探讨MSC抑制GVHD可能的作用机制。

关键词：人骨髓间充质干细胞 T淋巴细胞增殖细胞亚群调节性T淋巴细胞移植物抗宿主病异基因移植 GVHD

人骨髓间充质干细胞的生物学特性及向神经前体细胞分化的实验研究

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解剖学报 2009年第1期40卷 98-102页

作者：李秋明张喜梅单智焱张延清雷蕾金连弘哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第二医院血液科哈尔滨150086

目的观察体外培养的人骨髓间充质于细胞（hMSCs）的生物学特性，并探讨使其转分化为神经前体细胞（NPCs）的方法。方法以密度梯度离心和贴壁法相结合分离成人骨髓间充质干细胞，并观察细胞形态、生长、表面标记以及成骨和成软骨及成脂... 详细信息

目的观察体外培养的人骨髓间充质于细胞（hMSCs）的生物学特性，并探讨使其转分化为神经前体细胞（NPCs）的方法。方法以密度梯度离心和贴壁法相结合分离成人骨髓间充质干细胞，并观察细胞形态、生长、表面标记以及成骨和成软骨及成脂肪能力的情况。选用第3代细胞进行诱导，先经胚胎干细胞培养液扩增，再用加有5-氮胞苷和曲古菌素A的神经诱导液诱导，7d后，一部分样本进行Nestin、Sox2免疫荧光染色和RT—PCR检测；另-部分样本在含有B27，的神经培养液中继续培养7d，然后进行NF—L的免疫荧光检测。结果分离培养的hMSCs纯度较高，CD29、CD44的阳性率均在90％以上；具有明显的成骨、成软骨和成脂肪能力；经5．氮杂胞苷和曲古菌素A作用后能向神经前体细胞分化，免疫荧光染色及RT-PCR结果显示，诱导后的细胞能特异性表达神经前体细胞标志物Nestin和Sox2；在神经培养液中继续培养后检测神经细胞标记物NF-L，可见较多阳性细胞。结论hMSCs可在体外进行分离培养扩增，经药物修饰后具有向神经前体细胞分化的潜能。

关键词：人骨髓间充质干细胞神经前体细胞 5-氮杂胞苷曲古菌素A 免疫荧光