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抑制人RAD51基因表达对人骨肉瘤细胞体内外增殖能力的影响

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肿瘤 2010年第11期30卷 904-907页

作者：杜利清白剑强刘强王彦王小春王月英张恒孟爱民樊飞跃中国医学科学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室天津300192 天津市天津医院脊柱外科天津300211

目的:通过抑制人RAD51修复基因(hRAD51)表达,研究hRAD51对骨肉瘤细胞和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:构建hRAD51基因沉默的骨肉瘤细胞株HOS-shA2,利用MTT和克隆形成实验从体外观察hRAD51基因沉默对HOS细胞增殖的影响,FCM法检测抑制hRAD5... 详细信息

目的:通过抑制人RAD51修复基因(hRAD51)表达,研究hRAD51对骨肉瘤细胞和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:构建hRAD51基因沉默的骨肉瘤细胞株HOS-shA2,利用MTT和克隆形成实验从体外观察hRAD51基因沉默对HOS细胞增殖的影响,FCM法检测抑制hRAD51基因表达后细胞周期的变化情况,裸鼠成瘤实验观察降低hRAD51表达对骨肉瘤移植瘤生长情况的影响。结果:成功构建了hRAD51基因沉默细胞株HOS-shA2;体外实验显示,HOS-shA2细胞的增殖能力较亲本及阴性对照细胞明显降低(P细胞比例增多(P细胞的裸鼠移植瘤生长速度缓慢,剥离瘤体质量明显轻于亲本HOS组和阴性对照组,差异有统计学意义(P骨肉瘤细胞增殖中发挥重要作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点。

关键词：抑制 RAD51 基因表达人骨肉瘤细胞体内外增殖能力 in vitro osteosarcoma 基因沉默移植瘤生长裸鼠移植瘤 HOS 阴性对照细胞增殖骨肉瘤细胞株克隆形成实验统计学意义 FCM法肿瘤治疗修复基因

耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其耐药机制探讨

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中国药理学通报 2008年第8期24卷 1103-1107页

作者：牛保华王建军席艳河南大学神经生物学研究所河南开封475004 河南大学附属淮河医院肿瘤内科河南开封475004

目的诱导并建立耐阿霉素(ADM)的人骨肉瘤细胞株并探讨其耐药机制。方法采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株;MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(DDP)、甲氨蝶呤(MTX)、异环磷酰胺(IFO)、表柔比星(EPI)... 详细信息

目的诱导并建立耐阿霉素(ADM)的人骨肉瘤细胞株并探讨其耐药机制。方法采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株;MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(DDP)、甲氨蝶呤(MTX)、异环磷酰胺(IFO)、表柔比星(EPI)、比柔比星(THP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)药物敏感性;利用光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化;RT-PCR和IHC法分别检测多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)基因及其相应蛋白(P-gp)、MRP的表达。结果经167d的诱导,建立Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株,其对ADM的耐药指数分别为原代细胞株的49.8和74.6倍;耐药细胞株对MTX、EPI、THP、PTX亦产生不同程度的交叉耐药(P0.05);光镜观察Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株细胞体积增大,多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加;透射电镜显示Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多;细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降。MDR1mRNA、MRPmRNA和P-gp、MRP在各耐药细胞株表达阳性。结论MDR1 mRNA、MRP mRNA及其相应蛋白参与了耐药细胞株耐药的形成,这些骨肉瘤耐药细胞株为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下了基础。

关键词：人骨肉瘤细胞阿霉素耐药性

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用

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中国药理学通报 2012年第12期28卷 1719-1723页

作者：刘跃亮罗进勇张彦何通川曾照芳重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 美国芝加哥大学医学中心分子肿瘤学研究室芝加哥60637

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色... 详细信息

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。构建β-Catenin荧光素酶报告基因(β-Catenin-Luc,p-Top)检测DHA作用143B后细胞内β-Catenin活性变化。不同浓度的DHA作用后,Western blot检测与细胞增殖(如PC-NA、Cyclin D1、c-Myc)、凋亡(如Bad、Bcl-2、Caspase-3)密切相关的标志物蛋白质表达变化。结果 DHA作用于143B细胞24 h后,MTT结果显示143B细胞的增殖活性受到明显抑制,且其克隆形成能力减弱(P人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能通过下调细胞增殖相关蛋白PCNA、Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bad和Caspase-3,启动凋亡程序,致143B细胞发生凋亡。

关键词：双氢青蒿素人骨肉瘤细胞细胞增殖细胞凋亡 Wnt信号通路 β-Catenin

反义寡核苷酸抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

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中华小儿外科杂志 2006年第4期27卷 214-215页

作者：阎天栋杨述华张其亮华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022

骨肉瘤是原发于骨骼系统的成骨性恶性肿瘤,约占所有骨肿瘤的20%,75%发生于12～25岁的青少年,其恶性度高,易早期转移,治疗后易复发,预后较差.现代分子生物学,尤其是肿瘤分子生物学理论和技术水平的发展为骨肉瘤患者带来新的希望.随着基... 详细信息

骨肉瘤是原发于骨骼系统的成骨性恶性肿瘤,约占所有骨肿瘤的20%,75%发生于12～25岁的青少年,其恶性度高,易早期转移,治疗后易复发,预后较差.现代分子生物学,尤其是肿瘤分子生物学理论和技术水平的发展为骨肉瘤患者带来新的希望.随着基因治疗,特别是反义核酸技术的发展,应用反义核酸技术治疗恶性肿瘤的实验研究已经成为了恶性肿瘤基因治疗的热点.关于反义基因疗法的靶点,目前已经作了很多相关的研究,但我们还需要更多更好的治疗基因,为骨肉瘤基因治疗提供物质基础.我们以增殖细胞核抗原为治疗靶点,应用脂质体介导PCNA反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞MG-63,并观察其对MG-63细胞PCNAmRNA、蛋白表达及细胞增殖活性的影响。

关键词：人骨肉瘤细胞反义核酸技术 PCNA表达实验研酸抑制寡核苷肿瘤基因治疗现代分子生物学分子生物学理论恶性肿瘤

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全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用

华中科技大学学报（医学版） 2007年第1期36卷 60-62页

作者：袁林郭风劲陈安民华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的研究全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法在培养液体系中加入不同浓度的全反式维甲酸（ATRA）进行不同时间长度的诱导，以MTT法，流式细胞术，TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果1～50μmol／LATRA均能抑制骨肉瘤细胞增殖。5、1... 详细信息

目的研究全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法在培养液体系中加入不同浓度的全反式维甲酸（ATRA）进行不同时间长度的诱导，以MTT法，流式细胞术，TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果1～50μmol／LATRA均能抑制骨肉瘤细胞增殖。5、10、50μmol／LATRA作用细胞4d后的凋亡率分别为（12．46±2．37）％、（18．36±1．32）％、（27．15±2．17）％，与对照组[（4．09±1．18）％]比较差异均有显著性意义（均P＜0．05）。ATRA浓度越高，抑制作用越明显，呈明显的剂量依赖效应。50μmol／LATRA作用细胞1、2、3、4d后的凋亡率分别为（7．35±1．28）％、（10．72±1．68）％、（17．65±2．14）％、（27．15±2．17）％，与对照组[（4．09±1．18）％]比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）。ATRA作用时间越长，抑制作用也越明显，呈明显的时间依赖效应。结论ATRA能够诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡，呈时间和剂量依赖效应。

关键词：全反式维甲酸人骨肉瘤细胞细胞凋亡

RGDS—GG—KLAKLAKK多肽对人骨肉瘤细胞黏附迁移和侵袭力的影响

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中华实验外科杂志 2009年第12期26卷 1713-1715页

作者：张敏杨大志钟森高飚湖北省医学会武汉430064 华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科湖北省十堰市妇幼保健院孝感市中心医院骨科

目的研究多肽RGDS—GG—KLAKLAKK对体外培养人骨肉瘤细胞MG-63黏附迁移和侵袭力的影响，并探讨其作用机制。方法将不同浓度（0、25、50、75、1130μmol／L）的多肽RGDS—GG-KLAKLAKK与MG-63细胞混合培养，用比色法测量多肽RGDS—GG-KLAK... 详细信息

目的研究多肽RGDS—GG—KLAKLAKK对体外培养人骨肉瘤细胞MG-63黏附迁移和侵袭力的影响，并探讨其作用机制。方法将不同浓度（0、25、50、75、1130μmol／L）的多肽RGDS—GG-KLAKLAKK与MG-63细胞混合培养，用比色法测量多肽RGDS—GG-KLAKLAKK对MG-63细胞黏附力的抑制作用，通过transwell小室侵袭模型检测多肽对MG-63细胞侵袭力的影响。观测多肽对骨肉瘤细胞自发肺转移模型抗肿瘤转移的影响。结果MG-63骨肉瘤细胞对纤维连接蛋白（Fn）的黏附被多肽GDS—GG-KLAKLAKK对明显抑制（P〈0．05）。25、50、75、100μmol／L的多肽RGDS—GG—KLAKLAKK对MG-63细胞侵袭力的抑制率分别为（18．3±2．9）％、（28．5±4．8）％、（40．4±5．6）％和（66．7±7．8）％，对比空白对照组（0μmol／L多肽）差异有统计学意义（P〈0．05），多肽RGDS-GG-KLAKK对MG-63骨肉瘤细胞浸润能力有明显抑制作用。MG-63骨肉瘤细胞接种于裸鼠后给予多肽RGDS—GG—KLAKLAKK治疗，与对照组比较，有明显的肺重减轻、肺转移灶减少（P〈0．05）。结论多肽RGDS-GG-KLAKLAKK能够抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外黏附、侵袭和转移。

关键词：多肽人骨肉瘤细胞肿瘤侵袭肿瘤转移

p21^(wafl)在1,25(OH)_2D_3调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用

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中国病理生理杂志 2003年第3期19卷 297-300,T002页

作者：陈玉霞刘宇健宋亮年卢建第二军医大学基础部病理生理教研室上海200433

目的 :探讨p2 1wafl在 1,2 5 (OH) 2 D3调节人骨肉瘤细胞系HOS - 860 3增殖中的作用。方法 :用定量RT-PCR法检测 1,2 5 (OH) 2 D3对p2 1waflmRNA表达的诱导作用 ,并构建稳定表达p2 1wafl真核表达载体的细胞系HOS -p2 1wafl进一步观察该... 详细信息

目的 :探讨p2 1wafl在 1,2 5 (OH) 2 D3调节人骨肉瘤细胞系HOS - 860 3增殖中的作用。方法 :用定量RT-PCR法检测 1,2 5 (OH) 2 D3对p2 1waflmRNA表达的诱导作用 ,并构建稳定表达p2 1wafl真核表达载体的细胞系HOS -p2 1wafl进一步观察该细胞的生长及分化情况。结果 :1,2 5 (OH) 2 D3作用 2h即可诱导HOS - 860 3细胞内源性p2 1wafl的表达 ,4h达高峰 ,2 4h仍未回降。细胞过度表达p2 1wafl后生长速度明显减慢 ,培养 6d时细胞数为未转染细胞的5 0 % ;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶 (AKP)的表达明显增强。结论 :表明 1,2 5(OH) 2 D3对p2

关键词： p21^wafl 1,25(OH)2D3 人骨肉瘤细胞 HOS-8603

HIF-1α抑制剂YC-1对人骨肉瘤细胞Saos2和U2-OS增殖和凋亡的影响

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现代肿瘤医学 2021年第9期29卷 1482-1486页

作者：刘云燕张瑞赵景玮任星光文艳华马琼空军军医大学第二附属医院骨科实验室陕西西安710038

目的:应用缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂YC-1处理人骨肉瘤细胞Saos2和U2-OS,观察不同药物浓度对人骨肉瘤细胞系Saos2和U2-OS细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响及其机制。方法:人骨肉瘤细胞系Saos2和U2... 详细信息

目的:应用缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂YC-1处理人骨肉瘤细胞Saos2和U2-OS,观察不同药物浓度对人骨肉瘤细胞系Saos2和U2-OS细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响及其机制。方法:人骨肉瘤细胞系Saos2和U2-OS分对照组和实验组。对照组细胞1%氧气浓度低氧培养,实验组细胞施加HIF-1α抑制剂YC-1干预,设浓度梯度。CCK-8法检测不同药物浓度对Saos2和U2-OS细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测YC-1对Saos2和U2-OS细胞周期和凋亡的影响;Western blot对FXR1、G3BP1、APAF1、Cleaved Caspase-3蛋白的表达进行相对定量分析。结果:CCK-8检测结果显示,YC-1对人骨肉瘤Saos2和U2-OS细胞有显著的增殖抑制作用,且呈明显的剂量依赖效应。不同浓度的YC-1处理细胞后,均可使各处理组G1期细胞增多,S期细胞减少,且呈剂量依赖效应(P细胞后,与对照组相比,各实验组FXR1、G3BP1、APAF1蛋白表达显著下降(P人骨肉瘤细胞株Saos2和U2-OS细胞阻滞于G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α对人骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响可能是通过上调FXR1、G3BP1、APAF1的表达而实现,而YC-1抑制了HIF-1α的表达从而使Cleaved Caspase-3的表达增高诱导细胞凋亡。HIF-1α及FXR1、G3BP1、APAF1、Cleaved Caspase-3有望成为骨肉瘤治疗的新靶标。

关键词：人骨肉瘤细胞缺氧诱导因子抑制剂增殖凋亡

反义寡核苷酸体外抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

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反义寡核苷酸体外抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

作者：闫天栋华中科技大学

学位级别：硕士

研究表明,恶性肿瘤的发生、发展与由于基因表达调控异常、生长因子分泌功能失常、信号传导异常、程序化死亡的衰减等方面密切相关。通过各种机制,肿瘤细胞逃避调亡不仅是其获得永生性,发生和演进的重要原因,而且可导致抗化疗/放疗细胞... 详细信息

研究表明,恶性肿瘤的发生、发展与由于基因表达调控异常、生长因子分泌功能失常、信号传导异常、程序化死亡的衰减等方面密切相关。通过各种机制,肿瘤细胞逃避调亡不仅是其获得永生性,发生和演进的重要原因,而且可导致抗化疗/放疗细胞株的形成。这些因素最终通过DNA的复制、转录和翻译导致肿瘤细胞的异常分化与无限增殖。我们研究与肿瘤细胞增殖和调亡的相关基因的表达及其与恶性肿瘤发生、演进之间的关系,对于进一步明确恶性肿瘤的发病机理、提高治愈率和开辟新的治疗途径有着重要的现实意义。骨肉瘤是除浆细胞骨髓瘤以外骨骼系统最常见的原发性恶性肿瘤,主要见于15～25青少年,男性多于女性。其发病率各国的统计数字差异较大,约1/10万～0.1/10万,在我国尚无关于其发病率和死亡率的精确统计资料。骨肉瘤恶性度高,易早期转移,治疗后易复发,预后较差,危害性大死亡率高。随着辅助化疗、外科手术技术、骨重建方法和改进临床分期方法的发展,越来越多的数患者接受了保肢手术,并有复原的希望。但目前的治疗方法,五年生存率从50-65%不等,仍有许多患者无法从中受益。复发和转移仍然是致命的结果,若发生转移,生存率更低（30%）。目前对骨肉瘤患者的总体治疗效果较差,如何提高骨肉瘤患者的治疗率、探索新的治疗方法始终是临床关注的焦点。反义核酸基因治疗主要依赖于Watson-Crick的核酸碱基配对原理,合成与特异基因互补的、小的单链寡核苷酸导入肿瘤细胞,与相应mRNA杂交,从而在翻译水平阻断某些异常基因的表达。反义核酸治疗技术因其具有高效简便、不需要载体等特点,已成为近年来肿瘤基因治疗的研究热点之一。增殖细胞核抗原（PCNA）是DNA聚合酶δ的辅助因子,是DNA合成必不可少的物质,参与细胞周期调控,与核酸代谢中的多种调节蛋白密切相关。研究表明,PCNA在骨肉瘤中高表达,与恶性程度和预后呈明显的相关性。目前已有以PCNA为反义基因治疗靶点的研究见诸报道,但是PCNA-ASODN作用于人成骨肉瘤细胞MG-63后对PCNA表达的影响尚未见报道。我们以增殖细胞核抗原为靶基因,应用脂质体介导PCNA-ASODN转染人骨肉瘤细胞MG-63 ,并观察其对MG-63细胞PCNA mRNA、蛋白表达及细胞增殖活性的影响。目的本试验主要是探讨PCNA-ASODN抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞株PCNA表达的效果。方法应用脂质体介导的PCNA反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞MG-63,RT-PCR、Western blot法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达,MTT比色法和集落形成试验检测细胞的增殖活性。结果ASODN组细胞的集落形成率显著低于空白组（p＜0.01）;ASODN能显著抑制PCNA mRNA、蛋白的表达,ASODN组24h后mRNA的表达为空白组的31.36%;蛋白表达为空白组的40.00%,细胞增殖抑制率为65.64%;结论PCNA-ASODN可显著抑制PCNA mRNA及蛋白的表达,抑制MG63细胞的增殖。

关键词：增殖细胞核抗原反义寡核苷酸人骨肉瘤细胞