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作者：王卓新乡医学院

学位级别：硕士

背景我国食管癌发病率和死亡率均居世界首位。90%患者确诊时已处于中晚期,化疗是治疗的重要方法之一,但顺铂、奥沙利铂等常用药存在疗效有限、不良反应较为严重等问题,化疗药物的研发依然是研究的热点。研究发现癌组织中铁、铜含量高于... 详细信息

背景我国食管癌发病率和死亡率均居世界首位。90%患者确诊时已处于中晚期,化疗是治疗的重要方法之一,但顺铂、奥沙利铂等常用药存在疗效有限、不良反应较为严重等问题,化疗药物的研发依然是研究的热点。研究发现癌组织中铁、铜含量高于其他组织,癌细胞的增殖和转移时对金属离子如铁、铜和锌的需求增加,使得螯合剂使用成为新的抗癌策略。二硫代氨基甲酸盐是一类对金属离子具有强螯合能力的含硫化合物,其衍生物吡咯烷二硫代氨基甲酸盐具有抗肝癌活性,二吡啶酮腙二硫代丁酸（Dpdtb A）对胃癌细胞的生长抑制机理已获得初步认知,但与食管癌细胞的生长抑制关系有待探究。目的评价二吡啶酮腙二硫代丁酸（Dpdtb A）对EGFR高表达的人食管癌细胞系KYSE450和KYSE 150生长的影响。探讨其机制,判断是否影响EGFR相关分子。方法1.常规培养人食管癌KYSE150和KYES 450细胞。***、集落形成、形态学观察来评估Dpdtb A对细胞的生长抑制作用,确定机制研究的药物浓度。3.机制研究中以Dmso组为对照,加入Dmso使其终浓度为0.7%,实验组主要为5μM组和10μM组,加入Dpdtb A药物,使其终浓度分别为5μM和10μM。药物作用24小时后,收取细胞进行后续检测。***、Annexin V/FITC、DCFH-DA染色的流式细胞技术分别检测细胞周期、细胞凋亡、细胞ROS的变化。***-8法检测总SOD酶活性的变化。*** Blot检测CDK2、BAX、Bcl-2、NCOA4、Ferritin、SOD、p53、p-p53、Stub-1、EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、LC-3、MDM2的变化。***-PCR检测p53 m RNA的改变。8.使用SPSS16.0和Graphpad Prism 7软件进行分析,实验数据用均数±标准差（（?）±s）表示,组间比较采用单因素方差分析,检验水准α=0.05。结果*** A对细胞均能抑制生长,KYSE 450细胞的IC50为5.497±0.53μM,KYSE 150细胞的IC50为5.005±0.39μM;0.5μM的Dpdtb A作用10天后,细胞集落数少于Dmso组（p＜0.05）。Dpdtb A作用24小时后,细胞密度降低、皱缩变圆、出现漂浮;5μM、10μM Dpdtb A组均有细胞存活。*** A诱导KYSE 450和KYES 150细胞周期S期阻滞,且随着药物浓度的增大,S期细胞所占的比率增大（p＜0.05）。Dpdtb A作用后细胞CDK2蛋白含量减少,且随着药物浓度的增大,减少越明显（p＜0.05）。*** A使KYSE 450和KYES 150细胞的凋亡率增多,随着药物浓度的增大,细胞凋亡率升高越明显（p＜0.05）。Dpdtb A减少KYSE 450细胞的Bcl-2表达（p＜0.05）,BAX表达改变不明显（p＞0.05）,10μM组细胞的BAX/Bcl-2比值高于DMSO组（p＜0.05）;KYSE 150细胞的BAX和Bcl-2表达均减少（p＜0.05）,Dpdtb A组BAX/Bcl-2比值低于DMSO组（p＜0.05）。*** A诱导KYSE 450和KYES 150细胞ROS增多,随着药物浓度的提高,ROS增多更明显（p＜0.05）。在KYSE 450细胞中,NCOA4下调、Ferritin上调（p＜0.05）;细胞内总SOD酶活性降低和SOD蛋白含量降低（p＜0.05）。*** A作用KYSE 450和KYES 150细胞后,EGFR和p-EGFR含量降低,且随着浓度的增加抑制更明显（p＜0.05）;EGFR的上游信号分子p53和下游信号分子AKT的表达都受到了抑制,且随着浓度的增加抑制更明显（p＜0.05）。*** A引起KYSE 450和KYES 150细胞的p53 m RNA上升（p＜0.05）。*** A使KYSE 450和KYES 150细胞MDM2蛋白含量也下降,且随着药物浓度的增加下降更明显（p＜0.05）;加入蛋白酶体抑制剂MG132后,细胞p53和MDM2蛋白含量依然下降（p＜0.05）。*** A引起KYSE 450和KYES 150细胞的Stub-1的降低和p-p53含量升高,且随着浓度的增加作用越明显（p＜0.05）,加入自噬抑制剂3-MA可以减弱Dpdtb A的作用（p＜0.05）。*** A使KYSE 450和KYES 150细胞Lc3的含量上升,Stub-1、p53含量下降,EGFR、AKT、p-AKT也下降（p＜0.05）;加入自噬抑制剂3-MA和氯喹后,Stub-1、p53含量回升,EGFR、AKT、p-AKT也回升（p＜0.05）。结论

关键词： Dpdtb A 人食管癌细胞系 p53自噬性降解 p53/EGFR/AKT通路

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6MV-X线对人食管癌细胞系EC-9706Bcl-2基因表达的影响

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中国实用医药 2014年第32期9卷 244-245页

作者：张海鸽郑州大学附属洛阳市中心医院放疗科 471000

目的：研究X线对人食管癌细胞系EC-9706 B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）基因表达的影响。方法采用RT-PCR法测人食管癌细胞系EC-9706经0、4、6 Gy的X线照射后1、6、24 h Bcl-2基因表达的变化。结果 X线照射可以显著降低人食管癌细胞株EC-9706Bc... 详细信息

目的：研究X线对人食管癌细胞系EC-9706 B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）基因表达的影响。方法采用RT-PCR法测人食管癌细胞系EC-9706经0、4、6 Gy的X线照射后1、6、24 h Bcl-2基因表达的变化。结果 X线照射可以显著降低人食管癌细胞株EC-9706Bcl-2基因的表达。结论 X线照射人食管癌细胞系EC-9706细胞后Bcl-2基因的表达在0～6 Gy无剂量依赖性，在不同的时间点上Bcl-2的表达稳定。

关键词：人食管癌细胞系 Bcl-2

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无线粒体DNA的人食管癌细胞系的建立

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基础医学与临床 1999年第5期19卷 92-95页

作者：高枫李晓东陈清棠北京医科大学第一医院神经内科北京100034

为了研究线粒体疾病呼吸键功能缺陷的分子遗传机制，我们用人食管癌细胞系制备无线粒体DNA的细胞系。在细胞培养液中加溴化乙院50ng／mL、尿嘧啶50μg／mL、丙酮酸100μg／nL，进行连续传代培养。Southern杂交及PCR结果均显示：线粒体DN... 详细信息

为了研究线粒体疾病呼吸键功能缺陷的分子遗传机制，我们用人食管癌细胞系制备无线粒体DNA的细胞系。在细胞培养液中加溴化乙院50ng／mL、尿嘧啶50μg／mL、丙酮酸100μg／nL，进行连续传代培养。Southern杂交及PCR结果均显示：线粒体DNA进行性减少，呼吸控制率渐降低，到溴化乙啶处理第12天时消失，细胞生长是营养缺陷型，成为无线粒体DNA的细胞系。

关键词：线粒体DNA 人食管癌细胞系

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亚硝胺诱发的人食管癌细胞系的建立

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中华肿瘤杂志 1994年第3期16卷 191-191页

作者：郭永军陆士新何立珍梁苑苑福建省血液病研究所中国医学科学院肿瘤研究所病因室

亚硝胺诱发的人食管癌细胞系的建立郭永军，陆士新，何立珍，梁苑苑为研究食管癌的发生发展机制，目前国内外已建立了一些人食管癌细胞系，但这些细胞系均来自食管癌患者手术切除标本，很难进行病因学联系。亚硝胺类化合物是我国食管癌... 详细信息

亚硝胺诱发的人食管癌细胞系的建立郭永军，陆士新，何立珍，梁苑苑为研究食管癌的发生发展机制，目前国内外已建立了一些人食管癌细胞系，但这些细胞系均来自食管癌患者手术切除标本，很难进行病因学联系。亚硝胺类化合物是我国食管癌的重要病因之一，我们曾用甲基苄基亚...

关键词：人食管癌细胞系郭永亚硝胺氨基化物食管癌食管肿瘤

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多西他赛对食管癌细胞系EC-9706放射增敏机制的研究

多西他赛对食管癌细胞系EC-9706放射增敏机制的研究

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作者：张海鸽郑州大学

学位级别：硕士

目的：1、在体外观察多西他赛对人食管癌细胞系EC-9706生长抑制的影响,初步探索多西他赛对细胞周期分布的影响及其作用机制。2、在体外观察多西他赛及X线联合作用对人食管癌细胞系EC-9706生长抑制的影响,探讨多西他赛的放射增敏作用及机... 详细信息

目的：1、在体外观察多西他赛对人食管癌细胞系EC-9706生长抑制的影响,初步探索多西他赛对细胞周期分布的影响及其作用机制。2、在体外观察多西他赛及X线联合作用对人食管癌细胞系EC-9706生长抑制的影响,探讨多西他赛的放射增敏作用及机制,为食管癌的放射增敏治疗提供新的思路和方法。3、通过RT-PCR检测照射后食管癌细胞系EC-9706Bcl-2基因的表达情况,探讨X线对细胞的生长抑制和诱导凋亡的机制。方法：1、用不同浓度的多西他赛处理食管癌细胞系EC-9706,以集落形成实验检测多西他赛对该细胞株的生长抑制作用。2、以0、0.25×10-9、0.5×10-9、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的多西他赛处理细胞24h、48h、72h后以流式细胞仪法检测细胞周期分布。3、以10-6mol/L的多西他赛处理细胞24h,再以6MV-X线0、2Gy照射细胞,分别于照射后24h和48h以流式细胞仪法检测细胞细胞周期的分布。4、以6MV-X线0Gy、4Gy、6Gy作用于细胞,于1h、6h和24h分别提取细胞总RNA,以RT-PCR法检测细胞Bcl-2基因的表达。结果：1、多西他赛在体外能抑制EC-9706细胞的增殖,并呈浓度依赖性。多西他赛可以诱导EC-9706细胞凋亡和G2/M期阻滞。2、多西他赛可以使细胞周期阻滞在G2/M期,并呈现出时间-浓度依赖性。3、2GyX线照射可以解除由于多西他赛处理而引起的G2/M期细胞周期阻滞,并且具有时间依赖性。4、X线作用后,Bcl-2基因的表达急剧下降,但未见明显的剂量依赖性和时间依赖性。结论：1、多西他赛在体外对食管癌细胞有放射增敏作用。2、4Gy、6GyX线作用可使EC-9706细胞系Bcl-2表达显著下降。

关键词：多西他赛人食管癌细胞系细胞周期流式细胞仪 Bcl-2 凋亡

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《包头医学院学报》2009年第25卷题名索引

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包头医学院学报 2009年第6期25卷 I0001-I0008页

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核酸及蛋白质合成、提取、纯化

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生物技术通报 1992年第11期8卷 20-21页

923833 新的启动子区ONA序列〔专,日〕/Kaji,A./J0 3250一855:30.03.90一JP一081030(***。91)30.03.90 as 081030.92、一035929/05(4页)〔译自 DBA,1992,11(8),92一04290〕新序列含启动子区,在一35区有TTACCC碱基序列,在一35区与一10区之间有15一20碱基的间隔区。一10区为TATACT,间隔区以 GTAATATGTTTAATCAGGGC为主。将此启动子序列整合到表达栽体(如pKK系列)中,产生强启动效应。例如,将含有质粒pLC6一32的大肠杆菌培养于含大肠杆菌素的L培养基中,直至静

关键词：蛋白质合成大肠杆菌素绿色木霉 DNA 人食管癌细胞系食管癌细胞碱基序列 Eppendorf 启动子脉冲场凝胶电泳

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气管食管科学

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中国医学文摘（耳鼻咽喉科学） 1989年第5期4卷 183-187页

891186 犬气管力学性能的初步研究/刘国津…∥中华医学杂志.-1988,68(11).-650～651 气管切除后的重建是一项没有根本解决的外科问题,这一问题的成功解决,取决于对气管自身的力学特性的进一步了解。本文报告对25只犬气管进行纵向拉伸试... 详细信息

891186 犬气管力学性能的初步研究/刘国津…∥中华医学杂志.-1988,68(11).-650～651 气管切除后的重建是一项没有根本解决的外科问题,这一问题的成功解决,取决于对气管自身的力学特性的进一步了解。本文报告对25只犬气管进行纵向拉伸试验,测定了犬气管应力-应变关系,并探讨了这种应力-应变关系对指导气管外科临床和人工气管设计的价值。

关键词：气管癌气管切除中华医学杂志人食管癌细胞系导气管应力-应变关系早期食管癌哈萨克族食管癌低张双对比造影力学性能

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