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人雄激素受体部分N端区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆及表达

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 156-157页

作者：王志强王学敏毛积芳卢建解放军第205医院外四科锦州121001 第二军医大学基础部上海200433

N端区是甾体激素受体氨基酸序列差别最大的区域,决定了甾体激素受体抗原的特异性,是制备特异性抗甾体激素受体抗体的首选部位。以前,由于雄激素受体(hAR)纯化的困难,hAR抗体主要是从部分患前列腺癌病人血液中存在的hAR自身抗体纯化获得... 详细信息

N端区是甾体激素受体氨基酸序列差别最大的区域,决定了甾体激素受体抗原的特异性,是制备特异性抗甾体激素受体抗体的首选部位。以前,由于雄激素受体(hAR)纯化的困难,hAR抗体主要是从部分患前列腺癌病人血液中存在的hAR自身抗体纯化获得,利用这种方法制备的hAR抗体不但量少,而且来源也非常有限。 hAR cDNA克隆成功后。

关键词：人雄激素受体 cDNA片段 N端区肠杆菌甾体激素受体多肽片段抗体制备前列腺癌氨基酸序列特异性

人雄激素受体的雄激素结合区cDNA在***中的高效表达

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动物医学进展 2000年第1期21卷 43-46页

作者：吴珍龄陈玮柳红杨盛山李跃民张家骅何明跃西南农业大学生化教研组重庆北碚400716 西南农业大学动物养殖学院

将编码人雄激素受体 ( h AR)的雄素结合区 ( LBD)的 c DNA片段 ( 1 0 0 5 bp)克隆到由 P1 启动子控制的硫氧还蛋白表达载体p Trx Fus上 ,构建了表达质粒 p Trx AR,并转化到大肠杆菌 G1 72 4中。经色氨酸诱导表达后 ,SDS- PAGE分析 ,可... 详细信息

将编码人雄激素受体 ( h AR)的雄素结合区 ( LBD)的 c DNA片段 ( 1 0 0 5 bp)克隆到由 P1 启动子控制的硫氧还蛋白表达载体p Trx Fus上 ,构建了表达质粒 p Trx AR,并转化到大肠杆菌 G1 72 4中。经色氨酸诱导表达后 ,SDS- PAGE分析 ,可观察到一高效表达的融合蛋白产物 ,此融合蛋白的分子量与理论值 ( 47KD)相吻合 ,氨基酸组分分析证明了L BD目的基因的表达。该融合蛋白的表达量可达菌体总蛋白量的 5 0 %左右。尽管采用不同温度诱导 ,该融合蛋白均以不溶的包含体形式存在。应用分子筛技术 ,该融合蛋白在变性剂 (尿素 )存在下 ,可一步分离纯化。此研究结果为进一步进行 LBD的蛋白质复性研究、免疫分析提供了材料 ,也为蛋白质的高效表达提供了实验途径及体系。

关键词：人雄激素受体雄激素结合区表达载体蛋白质

人雄激素受体激素结合区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆、表达及其活性检测

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 129-130页

作者：王志强毛积芳王学敏卢建第二军医大学基础医学部

人雄激素受体(hAR)为甾体激素受体超家族的成员之一,由一条多肽链组成,分三个功能区:N端区、DNA结合区和激素结合区。C端的激素结合区,是与雄激素结合并介导其发挥生物学效应的关键区域,在目前导致男性两性畸形的主要疾病雄激素抵抗症... 详细信息

人雄激素受体(hAR)为甾体激素受体超家族的成员之一,由一条多肽链组成,分三个功能区:N端区、DNA结合区和激素结合区。C端的激素结合区,是与雄激素结合并介导其发挥生物学效应的关键区域,在目前导致男性两性畸形的主要疾病雄激素抵抗症的研究中发现,该区域内的基因突变是导致雄激素与hAR结合异常的主要原因,但这种由基因突变引起的结合异常的分子机制尚不清楚。根据由hARcDNA推演的氨基酸序列分析表明,hAR分子中不存在二硫键,且氨基酸残基上无糖基化修饰。以前。

关键词：激素结合区人雄激素受体大肠杆菌活性检测 cDNA片段融合蛋白基因突变男性两性畸形基础医学部氨基酸序列分析

人雄激素受体LBD基因高效表达条件的优化及产物纯化

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西南农业大学学报（自然科学版） 1999年第3期21卷 209-214页

作者：陈玮吴珍龄杨盛山吴文彬王三根李帮秀何明跃西南农业大学生物化学教研室华西医科大学

人雄激素受体（ｈＡＲ）激素结合部（ＬＢＤ）的ｃＤＮＡ片段克隆到表达质粒ｐＴｒｘＡＲ内，在大肠杆菌ＧＩ７２４中可被诱导表达。通过改变诱导培养时间、诱导剂浓度、诱导温度及培养基的ｐＨ，在３４℃～３７℃，ｐＨ６．４～７．７... 详细信息

人雄激素受体（ｈＡＲ）激素结合部（ＬＢＤ）的ｃＤＮＡ片段克隆到表达质粒ｐＴｒｘＡＲ内，在大肠杆菌ＧＩ７２４中可被诱导表达。通过改变诱导培养时间、诱导剂浓度、诱导温度及培养基的ｐＨ，在３４℃～３７℃，ｐＨ６．４～７．７的培养基中，用１００μｇ／ｍｌＴｒｐ诱导培养４ｈ，可获得高效表达的ＬＢＤ融合蛋白产物。其最高表达量为５０～７０ｍｇ／Ｌ湿菌体。产物主要以包含体形式存在。经尿素溶解后，由ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析获得了电泳纯的目的产物。氨基酸组分分析和相对分子量测定表明与理论值一致。该表达条件的确定，为ｈＡＲ的ＬＢＤ基因表达和进一步研究提供了依据。

关键词：人雄激素受体激素结合部表达优化纯化

基于荧光素酶报告基因的CHO细胞(抗)雄激素样物质检测方法的建立

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卫生研究 2005年第3期34卷 281-284页

作者：赵海涛朱江波朱勇飞王征马玺里张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的　建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法　通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CH... 详细信息

目的　建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法　通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CHO细胞,检测报告基因lucferase的表达,给予DHT、FLU后检测该系统的有效性和特异性,并用2 ,4 DDT、METH等受试物进行验证。结果　转染后的CHO细胞对DHT呈明显的剂量-反应关系,1×10 - 1 0 mol LDHT可出现明显的兴奋效应,至1×10 - 7mol L可达到最大反应值,而未转染雄激素受体质粒与DHT无明显反应,FLU可以显著抑制二氢睾酮的激动效应,说明检测系统有效、特异。验证结果表明3×10 - 7mol L以上2 ,4 DDT及3×10 - 7mol L以上METH可对雄激素受体活性产生抑制作用,2 ,4 DDT的抑制作用强于甲氧氯。结论　本试验建立的基于报告基因的体外(抗)雄激素检测系统是可行的,2 ,4 DDT、甲氧氯有明显的抗雄激素活性作用。

关键词：抗雄激素样活性中国仓鼠卵巢细胞人雄激素受体报告基因方法

报告基因方法检测壬基酚、双酚A抗雄激素样活性的体外研究

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环境与职业医学 2006年第4期23卷 298-300页

作者：赵海涛马玺里万旭英王征朱勇飞张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转... 详细信息

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转染人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40的CHO细胞,在给予1×10-7mol/L二氢睾酮(DHT)后给予不同浓度的壬基酚(NP)及双酚A(BPA),检测报告基因表达活性。[结果]浓度均>1×10-6mol/L的NP、BPA可抑制1×10-7mol/LDHT产生的雄激素样作用,两者具有抗雄激素活性,但较雄激素拮抗剂氟他安(FLU)弱,BPA的抑制作用强于NP。[结论]NP、BPA有一定的抗雄激素活性,BPA的抑制作用强于NP。

关键词：壬基酚双酚A 抗雄激素样活性中国仓鼠卵巢细胞人雄激素受体报告基因方法

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意义不明的克隆性造血的研究进展

中华血液学杂志 2016年第6期37卷 542-544页

作者：丁亦含李玉峰南京医科大学附属淮安第一医院血液科 223300

一般认为，以血液系统相关肿瘤基因突变为标志的克隆性造血是血液系统恶性肿瘤的重要特征之一，但早在1997年，Champion等“’采用人雄激素受体（human androgen receptor，HUMARA）检测X染色体灭活的方法证实在健康女性体内存在克隆性... 详细信息

一般认为，以血液系统相关肿瘤基因突变为标志的克隆性造血是血液系统恶性肿瘤的重要特征之一，但早在1997年，Champion等“’采用人雄激素受体（human androgen receptor，HUMARA）检测X染色体灭活的方法证实在健康女性体内存在克隆性造血。近年来，采用更敏感的分子生物学检测技术发现克隆性造血在健康人群中颇为常见，但其临床意义以及预后尚不明确，Steensma等将其命名为意义不明的克隆性造血（clonal hematopoiesis of indeterminate potential，CHIP）。本文我们就CHIP的内涵、与骨髓增生异常综合征（MDS）的鉴别以及预后意义进行综述。

关键词：克隆性造血分子生物学检测技术血液系统恶性肿瘤骨髓增生异常综合征 receptor 人雄激素受体基因突变相关肿瘤