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人降钙素在昆虫细胞中的表达

天津医药 2003年第7期31卷 448-451页

作者：刘颖王宝利郭刚梁东春张镜宇天津医科大学口腔医院 300070 天津医科大学内分泌研究所

目的 :利用昆虫细胞杆状病毒系统表达重组人降钙素 (recombinanthumanCalcitonin,rhCT) ,探索一条真核生物表达生物活性rhCT的新途径。方法 :将人降钙素基因重组到pFastBac杆状病毒穿梭载体(baculovirusshuttlevector ,Bacmid)中 ,构建... 详细信息

目的 :利用昆虫细胞杆状病毒系统表达重组人降钙素 (recombinanthumanCalcitonin,rhCT) ,探索一条真核生物表达生物活性rhCT的新途径。方法 :将人降钙素基因重组到pFastBac杆状病毒穿梭载体(baculovirusshuttlevector ,Bacmid)中 ,构建重组人降钙素杆状病毒表达载体即rhCTBacmid ,并将其转染昆虫细胞Sf9 ,表达目的蛋白。并对表达产物进行分子量及免疫反应性鉴定 ,在初步纯化后对人降钙素表达产物进行大鼠体内低血钙活性检测。结果 :证实目的基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物经大鼠体内低血钙活性测定具有生物活性。结论

关键词：人降钙素昆虫细胞表达真核生物表达生物活性基因工程降钙素杆状病毒科

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酪氨酸硝化修饰对人降钙素聚集的影响

酪氨酸硝化修饰对人降钙素聚集的影响

作者：位艳艳华中科技大学

学位级别：硕士

人降钙素(human calcitonin,hCT)是一种多肽激素,由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌,可用于治疗高钙血症、骨质疏松症等疾病。hCT不稳定、易发生淀粉样纤维聚集的特性降低了其生物活性并产生毒副作用,限制了hCT的临床应用。近年来,本课题组... 详细信息

人降钙素(human calcitonin,hCT)是一种多肽激素,由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌,可用于治疗高钙血症、骨质疏松症等疾病。hCT不稳定、易发生淀粉样纤维聚集的特性降低了其生物活性并产生毒副作用,限制了hCT的临床应用。近年来,本课题组重点关注了酪氨酸硝化对一些多肽活性的影响,发现将hCT酪氨酸硝化后聚集显著降低并维持降血钙能力,但酪氨酸硝化抑制hCT聚集的机理和对hCT激活受体能力的影响仍需进一步探究。因此本文系统地研究了酪氨酸硝化对hCT聚集的影响,并进一步地研究了酪氨酸硝化抑制hCT聚集的机理。主要研究结果如下:(1)酪氨酸硝化对hCT聚集的影响。首先通过硫黄素T(ThT)荧光光谱、动态光散射(DLS)、1-苯胺基-8-萘磺酸盐(ANS)荧光光谱、瑞丽光散射(RLS)等方法研究了酪氨酸硝化对hCT聚集的影响。结果表明酪氨酸硝化可以显著抑制hCT的淀粉样纤维聚集,但酪氨酸硝化后的hCT(3-NT-hCT)仍会缓慢地聚集产生无定型聚集物。细胞实验结果表明酪氨酸硝化不会影响hCT的药物活性(通过检测c AMP的分泌),却可以显著降低hCT聚集产生的细胞毒性(MTT实验)。(2)酪氨酸硝化抑制hCT聚集的机理。透射电镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)结果表明3-NT-hCT形成与hCT的纤维不同的无定型聚集体。圆二色光谱(CD)结果表明酪氨酸硝化对hCT形成α-helix的能力几乎无影响,但减缓了hCT从α-helix到β-sheet构象的变化。种子实验结果表明酪氨酸硝化会影响hCT聚集的伸长期和二次成核阶段。核磁共振氢谱(H-NMR)结果显示3-NT-hCT形成的寡聚体肽链相比hCT的寡聚体肽链更加松散。傅里叶变换红外光谱(FTIR)结果表明3-NT-hCT形成的无定型聚集体中含有无序的β-sheet结构。Zeta电位和Th T荧光实验结果表明静电斥力增加是酪氨酸硝化抑制hCT淀粉样纤维聚集的重要原因之一。迟滞期与浓度关系的结果表明,酪氨酸硝化不改变hCT的非典型聚集关系。本文研究结果表明酪氨酸硝化修饰对hCT重新进行药用具有重要的意义。

关键词：人降钙素淀粉样纤维聚集酪氨酸硝化

人降钙素(hCT)放免试剂盒的研制及其临床应用

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放射免疫学杂志 1995年第2期8卷 65-67页

作者：王达沈新义耿培兰孔宪涛上海长征医院临床免疫中心

作者在人血清降钙素的放免试剂盒研制过程中,hCT的^(125)I标记采用Iodogen法,以Sep—PakC_(18)柱分离纯化,通过优选建立了hCT放免非平衡竞争结合分析法。通过方法学和可靠性鉴定,说明了该方法具有较高的特异性、精密度、准确度和灵敏度... 详细信息

作者在人血清降钙素的放免试剂盒研制过程中,hCT的^(125)I标记采用Iodogen法,以Sep—PakC_(18)柱分离纯化,通过优选建立了hCT放免非平衡竞争结合分析法。通过方法学和可靠性鉴定,说明了该方法具有较高的特异性、精密度、准确度和灵敏度,在八周内观察,具较好的稳定性。100例正常人测定hCT水平为74.7±30.5ng/L,而75例肾炎、55例肺癌、34例乳腺癌和5例甲状腺髓样癌患者其检测值分别为385.3±159.6ng/L,206.5±77.3ng/L,157.3±65.2ng/L,579.5土357.5ng/L,均明显高于正常对照组(p<0.01)。经临床验证,该试剂盒符合稳定、可靠、灵敏、适用的要求。

关键词：人降钙素 hCT 放免试剂盒研制临床应用

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抑制人降钙素(hCT)聚集的方法

生命的化学 2022年第5期42卷 976-983页

作者：位艳艳高中洪李海玲华中科技大学化学与化工学院生物无机化学与药物湖北省重点实验室武汉430074

人降钙素(human calcitonin,h CT)是一种由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌的含32个氨基酸残基的肽类激素,参与体内骨质代谢的调节,临床可用于治疗骨代谢相关疾病。然而,hCT的易聚集特性导致其生物活性降低,并产生毒副作用,使其临床应用受... 详细信息

人降钙素(human calcitonin,h CT)是一种由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌的含32个氨基酸残基的肽类激素,参与体内骨质代谢的调节,临床可用于治疗骨代谢相关疾病。然而,hCT的易聚集特性导致其生物活性降低,并产生毒副作用,使其临床应用受到限制。因此,目前临床上使用不易聚集的鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT)替代。由于sCT与hCT只有50%的氨基酸序列同源性,异源所致的继发耐药性是sCT长期治疗中的一个重要问题。基于此,许多研究又将焦点集中到如何抑制hCT聚集方面,希望通过有效手段阻止hCT聚集,将其重新应用于临床。本文综述了近年来抑制hCT聚集的研究进展,为其临床替代sCT提供参考。

关键词：人降钙素聚集氨基酸突变抑制剂

人降钙素（hCT）三种放射性碘标记方法比较

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中华核医学杂志 1993年第2期13卷 124-124页

作者：韩佩珍陈昆明中国医学科学院放射医学所天津天津市内分泌所天津

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治疗Paget′s综合症药物人降钙素

医药导报 1988年第3期 45-46页

作者：袁华芳

瑞士(气巴·嘉基)公司最近推出的一种可治疗Paget’s综合症的新药——人降钙素(Calcitonin—human)是一个十分理想的品种,它可以改善因高钙等引起的剧烈疼痛以至骨骼畸形等。

关键词：人降钙素 Paget 药物

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人降钙素特殊抗原决定簇的单克隆抗体

细胞与分子免疫学杂志 1986年第3期 130-130页

作者： Amy M Sturmer,尚高峰 Unigene Laboratories Inc.110 littlc Ealls Road Fairfield N.J. 07006

人降钙素(Calcitonin)的单克隆抗体已经产生。根据免疫球蛋白分类和抗原决定簇的特异性,鉴定了其中四种单克隆抗体。异种类别是用过氧化酶标记的类特异性抗体以酶联免疫吸附试验确定的。单克隆抗体滴度是用Vand P Scicntfic Inc放射免... 详细信息

人降钙素(Calcitonin)的单克隆抗体已经产生。根据免疫球蛋白分类和抗原决定簇的特异性,鉴定了其中四种单克隆抗体。异种类别是用过氧化酶标记的类特异性抗体以酶联免疫吸附试验确定的。单克隆抗体滴度是用Vand P Scicntfic Inc放射免疫滤过分析系统确定的,这些单克隆有BALB/cJ抗人降钙素(H,Cal)#181-5-8-3-30IgM 1:3200,H,Cal#1-76-10-12-30,IgM 1:12,800,H Cal#1-133-1-2-12;IgM 1:1600和H,Cal #1-67-12-12-3-9 IgG2a 1:3200。所有这四种单克隆抗体对人降钙素和鲑降钙素有相同的亲合力。牛的血清蛋白和胰岛素被用做对照,并作为非特异性放射性本底计数。为了确定每个单

关键词：人降钙素单克隆抗体抗原决定簇

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人降钙素基因克隆表达和重组产物的纯化

生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 128-128页

作者：毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰王官将第二军医大学生物化学教研室上海200433

人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段... 详细信息

人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段化学合成,经磷酸化、连接反应,克隆于pGEM7z载体。DNA序列测定证明,hCT DNA结构与预期的一致。

关键词：基因克隆表达人降钙素生物化学 DNA序列测定军医大学骨质疏松骨肿瘤寡聚核苷酸基因工程技术制备和纯化

重组成肌细胞合成人降钙素促进大鼠成骨细胞增殖和分化(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第41期11卷 8385-8388页

作者：王烨明曾炳芳李晓林上海交通大学附属第六人民医院骨科上海市200233

背景:大剂量多次喷鼻或者肌注降钙素能有效地预防绝经后妇女脊柱骨的丢失。但是降钙素需要长时期反复用药、价格昂贵、且有弱的抗原性,限制了长期使用。基因治疗可以为骨质疏松症提供更加有效、经济的治疗方案,同时减少药物的副作用。目... 详细信息

背景:大剂量多次喷鼻或者肌注降钙素能有效地预防绝经后妇女脊柱骨的丢失。但是降钙素需要长时期反复用药、价格昂贵、且有弱的抗原性,限制了长期使用。基因治疗可以为骨质疏松症提供更加有效、经济的治疗方案,同时减少药物的副作用。目的:观察人降钙素基因在成肌细胞中的表达,分析重组人降钙素对体外大鼠成骨细胞的影响。设计:以基因为实验对象,对比观察实验。单位:复旦大学放射医学研究所。材料:实验于2005-12/2006-06在复旦大学放射医学研究所完成。选用健康SD胎鼠10只,由复旦大学放射医学研究所提供。人降钙素单克隆抗体购于美国Santa Cruz生物技术公司。L6成肌细胞由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所提供。方法:在L6成肌细胞培养基中分别加入pcDNA3.0-hCT脂质体转染混合物(转染组)和空载体pcDNA3.0脂质体混合物(对照组)进行培养。采用ELISA法、Western Blot和免疫组织化学鉴定目的基因的蛋白表达。在成骨细胞培养基中分别加入1×10-14,1×10-13,1×10-12mol/L重组人降钙素和MEM。主要观察指标:利用MTT和检测碱性磷酸酶活性的方法观察大鼠成骨细胞增殖和分化的变化。结果:ELISA法可在细胞培养液中检测到降钙素蛋白;Western blot及免疫组化均证实人降钙素在转染后的成肌细胞中获得稳定表达。当重组人降钙素的浓度为1×10-14,1×10-13mol/L时成骨细胞活性和成骨细胞碱性磷酸酶活性较对照组增高,但差异无显著性意义(P>0.05);浓度升高为1×10-12mol/L时,明显高于对照组(P人降钙素。重组人降钙素有促进骨形成的作用。

关键词：基因治疗人降钙素绝经后骨质疏松成肌细胞