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人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2001年第5期22卷 98-101页

作者：李校堃吴晓萍郑青黄亚东许华姚成灿暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510632

目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.... 详细信息

目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.4 2℃温控诱导表达 .采用谷胱甘肽法 ,对重组蛋白进行复性 .通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白 .用MTT法测定重组蛋白的活性 .结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF - β1的表达量约为 15 %.重组蛋白的复性率达到30 %.经纯化获得了银染一条带的重组蛋白 .测活表明重组蛋白具有较强的生物活性 .结论 :人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达 ,获得了具有生物活性的重组TGF - β1.

关键词：人转化生长因子β1 分离纯化基因克隆基因表达重组蛋白生物活性大肠杆菌

人转化生长因子β1成熟肽基因的克隆及序列测定

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生物技术通讯 1996年第3期7卷 139-140页

作者：龙建银王会信军事医学科学院基础医学研究所北京100850

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了... 详细信息

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了人TGF β1基因的克隆及其在真核细胞中的表达后,准备进行其在大肠杆菌中的高效表达研究。

关键词：人转化生长因子β1 基因的克隆成熟肽高效表达肠杆菌免疫抑制序列测定创伤愈合肿瘤抑制哺乳动物

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 169-170页

作者：龙建银王会信刘莉军事医学科学院基础医学研究所北京100850

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组... 详细信息

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明。

关键词：分泌表达人转化生长因子β1 大肠杆菌共表达培养基重组蛋白改善转运通路 kil基因一级结构免疫印迹分析

人转化生长因子β1在大肠杆菌胞内表达的研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 168-169页

作者：刘莉龙建银王会信王芳军事医学科学院基础医学研究所北京100850

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFβ)是细胞增殖、分化的重要调节蛋白之一,同时还参与了细胞外基质形成、胚胎发育、骨重建等多项病理和生理过程,并在创伤愈合、免疫抑制。

关键词：人转化生长因子β1 胞内表达肠杆菌重组蛋白基础医学研究细胞外基质医学科学院胚胎发育免疫抑制包含体

抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定

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基础医学与临床 2020年第5期40卷 632-638页

作者：王玥李峥陈慧张建民何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005 北京格根生物科技有限公司北京100005

目的制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1(TGF-β1)的纳米抗体。方法构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进... 详细信息

目的制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1(TGF-β1)的纳米抗体。方法构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进行巢式PCR,扩增抗体重链可变区(VHH),并构建VHH噬菌体展示文库;利用ELISA筛选能与TGF-β1重组蛋白特异性结合的抗体株,原核表达并纯化抗TGF-β1的纳米抗体;利用免疫印迹、免疫荧光和ForteBio Octer等方法鉴定纳米抗体的特异性及亲和力。结果成功构建cFUGW-TGF-β1表达载体并纯化了3 mg TGF-β1蛋白;羊驼经过5次免疫后得到容量为1.2×108的TGF-β1-VHH噬菌体展示文库;通过4轮ELISA筛选,得到7株能与重组TGF-β1蛋白特异性结合的抗体株;免疫印迹及免疫荧光实验结果均显示原核表达纯化的TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性识别肺癌细胞系NCI-H520表达的天然TGF-β1;ForteBio Octer结果显示B3、C8与重组TGF-β1的亲和力分别达到1.48×10-9 mol/L、9×10-9 mol/L。结论TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性结合TGF-β1,特异性强、亲和力高,或可开发用于肿瘤的免疫治疗。

关键词：人转化生长因子β1 纳米抗体噬菌体展示文库

联合检测支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α及人转化生长因子β1的临床意义

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实用医院临床杂志 2014年第6期11卷 37-38页

作者：于露黄江刘跃建四川省医学科学院.四川省人民医院呼吸内科四川成都610072

目的探讨结缔组织疾病与其他病因所致间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和转化生长因子β1(transform growth factorβ1,TGF-β1)的差异。方法 2010年6月至2011年5月在我院诊治的13... 详细信息

目的探讨结缔组织疾病与其他病因所致间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和转化生长因子β1(transform growth factorβ1,TGF-β1)的差异。方法 2010年6月至2011年5月在我院诊治的13例结缔组织疾病所致间质性肺疾病(interstitial lung disease with connective tissue disease,CTD-ILD)患者(CTDILD组)、12例其他病因所致的间质性肺疾病(NCTD-ILD)患者(NCTD-ILD组)和21例同期健康体检者(对照组),均采用ELISA法测定BALF中TNF-α及TGF-β1水平。结果 CTD-ILD组和NCTD-ILD组两项因子均明显高于对照组,且CTD-ILD组高于NCTD-ILD组,差异均有统计学意义(P因子联合检测对于CTD-ILD的鉴别诊断亦有提示意义。

关键词：肿瘤坏死因子α 人转化生长因子β1 支气管肺泡灌洗液结缔组织疾病间质性肺疾病

人转化生长因子βlmRNA定量检测在肝纤维化病人中的应用研究

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检验医学教育 2004年第3期11卷 46-49页

作者：丁荣梅吕建新温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江温州325035

目的：建立实时定量RT—PCR检测人转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)的方法，对慢性肝炎肝纤维化患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中TGF-β1 mRNA进行定量检测。方法：在TGF-β1... 详细信息

目的：建立实时定量RT—PCR检测人转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)的方法，对慢性肝炎肝纤维化患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中TGF-β1 mRNA进行定量检测。方法：在TGF-β1基因的外显子1和2之间设计一对引物和一条TaqMan—MGB探针；构建TGF-β1质粒克隆，以T7 RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA作为标准品，根据10倍系列稀释cRNA标准浓度对数和其循环域值(Cycle threshold，Ct)制作标准曲线，检测PBMC中TGF—β1 mRNA含量；并对本方法进行方法学评价。结果：重组质粒测序显示插入的片断为TGF—β1 mRNA特异性片断，成功的建立了实时定量RT—PCR检测TGF-β1 mRNA方法，灵敏度达6．81拷贝，线性范围为6．81～6．81×10^8拷贝，且重复性好，批内、批间变异系数分别为1．28％-2．27％和2．56％-2．61％，临床应用显示，27例肝纤维化病人PBMC中TGF-β1表达量为1．20×10^8(1．80×10^7～9．80×10^7)拷贝数／10^5细胞，显著高于正常对照组3．30×10^7(7．24×10^6～5．00×10^7)拷贝数／10^5细胞(P<0．05)。结论：实时定量RT-PCR检测TGF-β1 mRNA具有敏感、特异、快速、高效等特点，为TGF—β1 mRNA作为肝纤维化的诊断指标提供方法学依据。

关键词：人转化生长因子β1 mRNA 定量检测肝纤维化 TGF-β1 RT-PCR 病理学

重组hTGF-β_1基因转染骨髓间充质干细胞及其表达

维普期刊数据库评论

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第10期27卷 1185-1188,1222页

作者：夏万尧丁文龙刘伟钟梅芳王丹茹周广东崔磊曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011 基础医学院人体解剖学教研室上海200025

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免... 详细信息

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附定量测定(ELISA法)hTGF-β1蛋白表达;MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,以验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性。结果转染后72 h,BMSCs能有效表达hTGF-β1mRNA,胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,其蛋白表达量是转染adeno-lacZ的2.65倍(P生长有显著抑制作用。结论重组adeno-hTGF-β1能够被导入BMSCs,并表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白。为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。

关键词：骨髓间充质干细胞基因转染腺病毒人转化生长因子β1

活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索

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活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索

作者：田园硕北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:本研究通过网络药理学方法筛选活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的作用靶点、信号通路;通过临床研究观察活血软坚扶正方对气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的有效性和安全性,并通过对人转化生长因子β 1、金属蛋白酶抑制因子1浓... 详细信息

研究目的:本研究通过网络药理学方法筛选活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的作用靶点、信号通路;通过临床研究观察活血软坚扶正方对气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的有效性和安全性,并通过对人转化生长因子β 1、金属蛋白酶抑制因子1浓度的测定,探讨活血软坚扶正方干预本病的可能疗效机制,为临床应用提供科学依据。研究方法:1.网络药理学研究:采用 TCMSP、TCMID、SwissTargetPrediction、PubChem、DisGeNET、OMIM、GeneCards等数据库筛选活血软坚扶正方活性成分及与乙肝后肝纤维化相关靶基因,采用Cytoscape软件构建“方药-成分-靶点-疾病”网络图,采用String数据库构建蛋白质相互作用网络,采用Metascape对活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化关键作用靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,获取活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的主要生物过程和信号通路。2.临床试验研究:采用随机数分组方法,将符合纳入标准、不符合排除标准的63例气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者随机分为中药组和对照组,中药组33例（后脱落3例）,对照组30例。在抗病毒治疗的基础上,中药组予活血软坚扶正方,对照组予复方鳖甲软肝片,连续干预6个月。两组均于治疗前后记录中医证候评分、检测肝弹性值,检查肝功能、血清蛋白、凝血功能、肝纤四项、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1,计算无创肝纤维化指标（APRI、FIB-4）,并在治疗前、治疗3个月、治疗6个月时检测血、尿、便常规等安全性指标。观察比较两组患者治疗前后的肝弹性值、肝纤四项、APRI、FIB-4、肝功能、血清蛋白、凝血功能、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1、中医证候评分以及相关安全性指标的变化,并统计分析。研究结果:1.网络药理学研究结果研究最终共筛选获取33个活性成分,129个作用靶点与活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化密切相关。活血软坚扶正治疗乙肝后肝纤维化主要涉及生物过程、细胞组成、分子功能等多层次功能,通过调节PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路、phospholipase D信号通路、HIF-1α信号通路、FoxO信号通路、JAK-STAT信号通路、IL-17信号通路、MAPK信号通路、AMPK信号通路、TNF信号通路、PPARγ信号通路等多个通路等来发挥治疗作用。2.临床试验研究结果（1）影像学肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能够显著降低患者的肝弹性值（P＜0.01）,且中药组疗效优于对照组（P＜0.05）。（2）血清学肝纤维化指标:中药组能显著降低血清中CIV的水平（P＜0.01）,对照组治疗前后CIV无明显差异（3）无创肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能降低FIB-4的水平（P＜0.05）,且中药组疗效优于对照组（P＜0.05）;中药组可显著降低APRI的水平（P＜0.01）,对照组治疗前后APRI无显著差异。（4）肝功能相关指标:中药组和对照组组内对比均能显著降低血清中TBIL的水平（P＜0.05）,且两组组间无明显差异;中药组可显著降低AST的水平（P＜0.01）,对照组治疗前后AST无显著差异。（5）血清蛋白相关指标:两组治疗前后组内对比ALB和GLO水平无显著差异。（6）凝血功能相关指标:中药组可显著升高的PTA和PLT的水平（P＜0.01）,对照组无明显PTA和PLT升高。（7）TIMP-1和TGF-β1:中药组可降低血清中TIMP-1的浓度（P＞0.05）,对照组能够降低血清中TGF-β1的浓度（P＞0.05）,但TIMP-1和TGF-β1组内、组间差异均无统计学意义。（8）中医证候指标:中药组和对照组均能明显降低患者的中医证候评分（P＜0.01）,且中药组疗效优于对照组（P＜0.01）。结论:1.网络药理学研究提示:活血软坚扶正方改善乙肝后肝纤维化具有多层次、多系统和整体干预的特点。2.通过影像学、血清学、无创肝纤维化指标三种方式的比较,发现:活血软坚扶正方可有效抑制乙肝后肝纤维化的形成。3.活血软坚扶正方能够显著改善气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的症状、减轻肝脏炎症,调节凝血功能。4.活血软坚扶正方干预血清中金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）和人转化生长因子β1（TGF-β1）的作用不显著,药物对其可能存在一定抑制作用,但是否是主要干预因子尚存疑,需进一步的研究进行验证。

关键词：乙肝后肝纤维化活血软坚扶正方金属蛋白酶抑制因子-1 人转化生长因子β1 网络药理学