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两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

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南方医科大学学报 2007年第1期27卷 5-8页

作者：赵亮丁彦青梁莉李欣李雪华吴丽莎南方医科大学病理学教研室武警医学院病理学教研室天津300162 南方医科大学教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室/广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技... 详细信息

目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。

关键词：人血清蛋白质样品制备双向凝胶电泳蛋白质组

6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑荧光增敏探针法测定蛋白质

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台州学院学报 2008年第6期30卷 34-37页

作者：李芳陈定奔宋美芳贾文平台州学院医药化工学院浙江临海317000 浙江台州医院浙江临海317000

以6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑(MHMBM)作为荧光探针,利用蛋白质对MHMBM荧光增敏作用,建立了测定人血清总蛋白的新方法。结果表明,在中性水溶液中,MHMBM的荧光强度与牛蛋白(BSA)的浓度呈良好的线性关系,相关系数(r)为0.9995,检出限... 详细信息

以6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑(MHMBM)作为荧光探针,利用蛋白质对MHMBM荧光增敏作用,建立了测定人血清总蛋白的新方法。结果表明,在中性水溶液中,MHMBM的荧光强度与牛蛋白(BSA)的浓度呈良好的线性关系,相关系数(r)为0.9995,检出限2.3μg/mL,线性范围4.6-60.0μg/mL。本方法用于测定两种样品溶液中的总蛋白,RSD(n=6)分别为1.7%和1.3%,回收率95.5%和98.6%。

关键词： 6-甲基-2-(α-羟甲基)-IH-苯并咪唑荧光探针人血清蛋白质牛血清白蛋白

四种植物活性成分与血清蛋白相互作用机理研究

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四种植物活性成分与血清蛋白相互作用机理研究

作者：王晓萌浙江农林大学

学位级别：硕士

植物体内活性成分与生物体内蛋白质的相互作用机制、在生物体内的储存、转运和代谢方式已成为研究领域的热点问题。从分子水平研究植物活性成分与蛋白质之间的相互作用,不仅可以进一步了解植物活性成分与蛋白质的结构和功能,还能为靶向... 详细信息

植物体内活性成分与生物体内蛋白质的相互作用机制、在生物体内的储存、转运和代谢方式已成为研究领域的热点问题。从分子水平研究植物活性成分与蛋白质之间的相互作用,不仅可以进一步了解植物活性成分与蛋白质的结构和功能,还能为靶向给药提供一定的理论参考。本论文选取四种植物活性成分,通过几种光谱实验方法结合理论分子模拟法研究了它们与血清白蛋白之间的相互作用机理。论文首次尝试进行两种植物活性成分的混合物与血清蛋白的荧光猝灭研究,并定义了它们之间的相互作用指数。四种植物活性成分:松果菊苷(Echinacoside,ECH)及其单体毛蕊花糖苷(Verbascoside,VER),柚皮苷(Naringin,NAR1)及其苷元柚皮素(Narngenin,NAR2)。本论文的研究结果表明:1.分子对接构建的VER-HSA/BSA,ECH-HSA,NAR1/NAR2-BSA结合模型表明:VER与HSA/BSA之间,NAR1与BSA之间主要是通过氢键和范德华力相互结合;而ECH与HSA之间,NAR2与BSA之间结合的相互作用力主要是疏水作用力。2.光谱实验的结果表明活性成分VER与HSA/BSA之间的猝灭机理为生成复合物引起的静态猝灭;ECH与HSA之间的荧光猝灭机理为动态猝灭;NAR1/NAR2与BSA之间发生相互作用形成复合物,遵循静态猝灭的作用特点。3.根据能量转移理论,求得的VER与HSA/BSA,ECH与HSA,NAR1/NAR2与BSA之间的半径基本上都不超过7 nm,表明它们之间发生了非辐射能量转移。不同浓度的VER,ECH,NAR1/NAR2的引入会引起HSA/BSA物理以及化学结构的改变,而且HSA/BSA的这种物理以及化学结构的改变符合“二态模型”。4.热力学参数值表明:VER与HSA/BSA之间,NAR1与BSA之间的作用力确实是氢键和范德华力;ECH与BSA之间,NAR2与BSA之间的作用力主要是有疏水作用力,且反应都能自发进行,光谱实验结果与分子对接理论计算机模拟相一致。5.通过分析荧光偏振光谱,得出HSA/BSA与VER,HSA与ECH,BSA与NAR1/NAR2之间确实发生了相互作用生成非共价复合物。6.不同比例NAR1,NAR2混合物与BSA相互作用的结果表明相同浓度的NAR2对BSA的猝灭强度比同浓度的NAR1大,说明柚皮素与血清蛋白的结合强度比柚皮苷更大,即柚皮素比柚皮苷更易与血清蛋白结合。

关键词：毛蕊花糖苷松果菊苷柚皮苷柚皮素人血清蛋白质牛血清蛋白质作用机理分子模拟等温滴定微量热

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改进点样器对血清蛋白膜电泳分离效果的影响

山西农业大学学报（自然科学版） 2010年第6期30卷 564-567页

作者：冀华潘登奎山西农业大学文理学院山西太谷030801

在醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质实验中,为了使实验取得了廉价、简捷、分离效果更好的效果,改用毛细管以及自制点样器点样,经过多次试验,不仅同时结合GIS-2009(Tianneng)图谱分析仪成像和蛋白质指纹图谱分析,结果显示:改制订书针效... 详细信息

在醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质实验中,为了使实验取得了廉价、简捷、分离效果更好的效果,改用毛细管以及自制点样器点样,经过多次试验,不仅同时结合GIS-2009(Tianneng)图谱分析仪成像和蛋白质指纹图谱分析,结果显示:改制订书针效果优于毛细管和载玻片,而且点样量在3μL时效果优于2μL和1μL。确定最佳点样为:自制的订书针,点样量3μL。

关键词：醋酸纤维薄膜电泳点样器人血清蛋白质

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血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：赵亮丁彦青南方医科大学病理学教研室

目的:优化血清双向电泳的蛋白质样品制备方法,建立稳定且分辨率高的血清蛋白的2-DE图谱,为识别鉴定疾病相关蛋白质奠定基础。方法:筛选5例大肠癌血清标本,按等质量混合,分别利用直接溶解和热SDS法处理血清样品,应用固相pH梯度双向凝胶... 详细信息

目的:优化血清双向电泳的蛋白质样品制备方法,建立稳定且分辨率高的血清蛋白的2-DE图谱,为识别鉴定疾病相关蛋白质奠定基础。方法:筛选5例大肠癌血清标本,按等质量混合,分别利用直接溶解和热SDS法处理血清样品,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析双向电泳图谱。结果:应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。两种方法所得蛋白质点数分别平均为702±49和675±46。对热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,3块凝胶的平均蛋白质点数为695±59,平均匹配点数为623±52,匹配率达89.6%,且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.97±0.12)mm。结论:热SDS法是一种更好的血清蛋白质样品制备方法,利用热SDS法处理血清样品可以明显改善2-DE电泳图谱效果,并得到更多的蛋白质点。我们在此基础上建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱,为肿瘤血清蛋白质组学分析奠定了基础。

关键词：人血清蛋白质样品制备双向电泳蛋白质组

来源： cnki会议评论

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血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

第四军医大学学报 2006年第21期27卷 F0003-F0003页

作者：赵亮李欣李雪华丁彦青南方医科大学南方医院病理科广东广州510515 武警医学院病理学教研室天津300162

1材料和方法取2.5μL血清(约200μg)与含SDS和DTT的缓冲液混合,在95℃下加热5min,待冷却后用上样缓冲液(含7mol/L尿素,2mol/L硫脲,40mol/LCHAPS,65mmol/L DTT和5mol/L IPG buffer)稀释至350μL;取2.5μL血清直接与347.5μL的上样缓冲液混合.筛选5例大肠癌血清标本,按等质量混合,分别利用直接溶解和热SDS法处理血清样品,2-DE主要参照文献[1]和Bio-Rad仪器操作手册进行,实验重复三次,银染后凝胶通过UMAX PowerLook 1100投射扫描仪进行扫描,利用Melanie 4对图像进行分析。[第一段]

关键词：人血清蛋白质样品制备双向电泳蛋白质组