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人血浆补体C_9的纯化

中国医学科学院学报 1992年第5期14卷 389-393页

作者：周凤兰张页中国医学科学院基础医学研究所

1969年,Hadding等首次发表了从人血浆中纯化C_9的方法,但该法步骤复杂,回收率只有0.3％左右。1980年,Biesecker等报道一种改进的方法,即采用聚乙二醇(PEG)沉淀,L-Lys-Sepha-rose亲和层析去除纤溶酶原(pg),DEAE-Sephadex柱层析和羟基磷灰... 详细信息

1969年,Hadding等首次发表了从人血浆中纯化C_9的方法,但该法步骤复杂,回收率只有0.3％左右。1980年,Biesecker等报道一种改进的方法,即采用聚乙二醇(PEG)沉淀,L-Lys-Sepha-rose亲和层析去除纤溶酶原(pg),DEAE-Sephadex柱层析和羟基磷灰石(HA)柱层析4个步骤,得到纯化的人C_9,使C_9回收率得以提高。本实验参考Biesecker等方法分离C_9,摸索和改进层析条件,对HA的制备方法进行改良,从而大大提高了HA柱的流速和分离效果,得到回收率高,高纯化而活性保持完整的人C_9,为探讨红细胞膜上自身限制因子的功能活性及末端补体复合物新抗原研究奠定了基础。

关键词：人血浆补体纯化 C9

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人血浆乙酰水杨酸酯酶动力学特性研究

中国药学杂志 2007年第16期42卷 1244-1247页

作者：徐济萍李军张鉴王建筑山东省立医院临床药理中心济南250021 山东大学药学院济南250021

目的研究中国成年人血浆乙酰水杨酸酯酶的酶动力学特性。方法应用反相HPLC测定培养体系中乙酰水杨酸(ASA)及其主要代谢物水杨酸(SA)的含量,以SA/(ASA+SA)的比值来表示乙酰水杨酸酯酶的活性。结果乙酰水杨酸酯酶的米氏常数Km=429.67nmol... 详细信息

目的研究中国成年人血浆乙酰水杨酸酯酶的酶动力学特性。方法应用反相HPLC测定培养体系中乙酰水杨酸(ASA)及其主要代谢物水杨酸(SA)的含量,以SA/(ASA+SA)的比值来表示乙酰水杨酸酯酶的活性。结果乙酰水杨酸酯酶的米氏常数Km=429.67nmol·L-1和Vmax=2.56mmol·min-1·L-1(血浆),最佳反应温度为37℃,培养缓冲液pH为7.4。结论该方法灵敏度高、简便、快速、可靠,该酶对pH的变化较敏感,对热极不稳定。

关键词：乙酰水杨酸酯酶酶促动力学高效液相色谱法人血浆

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亲和膜色谱法纯化人血浆纤溶酶原

分析化学 2001年第8期29卷 894-897页

作者：甘宏宇商振华秦国平刘学良王俊德中国科学院大连化学物理研究所!大连116012

首次以尼龙膜为基质 ,分别采用三氯三嗪和 1 ,4 丁二醇二缩水甘油醚活化法 ,制备了以L 赖氨酸为配基的亲和膜。首次使用亲和膜色谱法成功地从人血浆中快速纯化出了高纯度的纤溶酶原 ,电泳分析显示一个主要的谱带。为规模化快速纯化临床... 详细信息

首次以尼龙膜为基质 ,分别采用三氯三嗪和 1 ,4 丁二醇二缩水甘油醚活化法 ,制备了以L 赖氨酸为配基的亲和膜。首次使用亲和膜色谱法成功地从人血浆中快速纯化出了高纯度的纤溶酶原 ,电泳分析显示一个主要的谱带。为规模化快速纯化临床用高纯度纤溶酶原提供了新方法。

关键词：亲和膜色谱人血浆纤溶酶原纯化

人血浆中阿托伐他汀和5个代谢产物LC-MS/MS分析方法的建立及在药代动力学研究中的应用

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药物分析杂志 2024年第1期44卷 58-67页

作者：宋玉晨宫晓易欢张颖郭春莉中国中医科学院西苑医院基础医学研究所北京市中药药理重点实验室北京100091 中国中医科学院西苑医院脑病科北京100091

目的:建立液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定人血浆中阿托伐他汀及2个活性相关的羟基他汀酸代谢物和3个毒性相关的他汀内酯型代谢物的浓度,并应用于健康人药代动力学研究和患者血药浓度分析。方法:血浆样本酸化后通过蛋白沉淀法处... 详细信息

目的:建立液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定人血浆中阿托伐他汀及2个活性相关的羟基他汀酸代谢物和3个毒性相关的他汀内酯型代谢物的浓度,并应用于健康人药代动力学研究和患者血药浓度分析。方法:血浆样本酸化后通过蛋白沉淀法处理。液相色谱分离采用Zorbarx SB-C_(18)(50 mm×2.1 mm,5μm)色谱柱,以含0.05%甲酸的甲醇-乙腈(1∶1)和水-甲醇-乙腈(9∶0.5∶0.5)为流动相,梯度洗脱,流速0.35 mL·min^(-1)。采用电喷雾电离源,正离子模式、多反应监测扫描;检测离子对m/z分别为阿托伐他汀559.3→440.2、邻羟基阿托伐他汀酸(2-HAT)和对羟基阿托伐他汀酸(4-HAT)575.1→440.3、阿托伐他汀内酯(ATL)540.9→448.2、邻羟基阿托伐他汀内酯(2-HATL)和对羟基阿托伐他汀内酯(4-HATL)557.2→448.2及内标匹伐他汀422.2→290.0。对分析方法进行全面验证后检测健康受试者及临床患者服用阿托伐他汀钙片后血浆样品,分析阿托伐他汀和5个代谢产物的药代代动力学特征。结果:阿托伐他汀及其代谢物浓度在0.1~25 nmol·L^(-1)范围内线性关系良好,日内、日间精密度的RSD及准确度的RE均人血浆中阿托伐他汀及5个代谢物同时定量检测方法准确、快捷、灵敏、稳定,可用于临床药代动力学研究和血药浓度监测。临床试验结果表明毒性相关内酯型代谢物具有较高暴露水平,需关注可能带来的副反应风险。

关键词：人血浆阿托伐他汀阿托伐他汀内酯代谢产物液相色谱串联质谱健康受试者患者药代动力学

人血浆中YG-3LC-MS-MS 定量方法的建立

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分析测试学报 2001年第z1期20卷 31-32页

作者：胡玉芳王洪允胡蓓江骥中国协和医科大学北京协和医院临床药理中心北京100730 中国协和医科大学北京协和医院临床药理中心北京100730 中国协和医科大学北京协和医院临床药理中心北京100730 中国协和医科大学北京协和医院临床药理中心北京100730

YG-3是1种正在开发的核苷类抗乙肝病毒新药,它可抑制乙肝病毒的复制过程.由于YC-3是目前体外抗病毒活性最强的核苷类似物,其临床试验的用药剂量非常小,仅为μg级.因此为满足其药代动力学研究的要求,本实验室建立了1种具有非常高灵敏度的... 详细信息

YG-3是1种正在开发的核苷类抗乙肝病毒新药,它可抑制乙肝病毒的复制过程.由于YC-3是目前体外抗病毒活性最强的核苷类似物,其临床试验的用药剂量非常小,仅为μg级.因此为满足其药代动力学研究的要求,本实验室建立了1种具有非常高灵敏度的LC-MS-MS方法,可定量测定人血浆中pg级YC-3的浓度,并通过了方法学考核,为YG-3药代动力学研究提供了有利的条件.……

关键词：人血浆定量方法药代动力学研究抗乙肝病毒核苷类抗病毒活性用药剂量临床试验高灵敏度复制过程定量测定实验室类似物方法学新药前体浓度考核开发

人血浆作为真皮支架对自体皮肤增殖的影响:组织学和免疫组织化学试验(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第47期13卷 9211-9216页

作者： Stefano Negri Giada Federici Sara Farinato Chiara Fila Pathological Anatomy Service C. Poma Hospital via Albertoni 1 46100 Mantova- ITALY Immunohaematology and Trasfusion Medicine Service C. Poma Hospital via AIbertoni 1 46100 Mantova Italy

背景:组织工程是一个多学科研究的交叉学科,其目标是使人体损伤的组织和器官再生,通过这种假设,几乎所有的动物组织都可以在实验室进行培养。一般的方法是从需要移植的患者身上提取干细胞,在一定的支持条件下允许其生长、增殖、生产为... 详细信息

背景:组织工程是一个多学科研究的交叉学科,其目标是使人体损伤的组织和器官再生,通过这种假设,几乎所有的动物组织都可以在实验室进行培养。一般的方法是从需要移植的患者身上提取干细胞,在一定的支持条件下允许其生长、增殖、生产为可替换的组织。另一方面,寻找细胞能够互相联结并形成分层结构的合适的支持条件,如基质或支架等非常必要。目前用于烧烫伤治疗的材料有很多种,如胶原,透明质酸、纤维蛋白和聚乳酸及其共聚物。目的:讨论以新型的生物材料自体血浆为支架对自体成纤维细胞和角质化细胞生长、扩张、增殖的影响。设计:建立一种真皮再生的方法,将自体成纤维细胞浸于人血浆基质中,排除各种影响样本安全性和排斥反应的问题,应用同样的方法在新的真皮上获取角质化细胞。时间及地点:实验于 2008 年在意大利曼多瓦 C. Poma 医院动物工厂完成。材料:人角质化细胞和成纤维细胞取自 1 例58 岁乳房切除患者的皮肤碎片。实验得到C. Poma 医院独立伦理委员会批准,患者知情同意。方法:从自体活组织皮肤样本中分离人角质化细胞和成纤维细胞,置于培养瓶中增殖,随后将自体血浆作为皮肤移植形成构造的支架,免疫和免疫组织化学特征显示与正常皮肤相似。主要观察指标:将血浆样本用甲醛固定,埋入石蜡,苏木精-伊红染色,用显微镜进行细胞计数。所有样本均经免疫组织化学评估。结果:在血浆基质上获得了多层规则形状的角质化细胞和成纤维细胞,基底膜的形成说明自体血浆是角质化细胞和成纤维细胞的生长、分化、扩展的良好支架,真皮和表皮细胞联结重建皮肤移植与正常皮肤无异。结论:血浆作为角质化细胞和成纤维细胞分化、扩展的支架表现出良好的性能,同时实验还特别发现成纤维细胞浓缩血浆可以暂时替代皮肤,也是角质化细胞生长的强有力的支架。此外血浆还具有廉价,易于制备等优点。自体角质化细胞和成纤维细胞及自体血浆的应用,可以避免血种类型的免疫排斥反应。这种治疗方法给有慢性缺损并且需要连续移植的患者带来了希望。

关键词：免疫组织化学特征真皮支架自体皮肤人血浆增殖成纤维细胞角质化细胞组织学

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人血浆中硝呋太尔的HPLC-UV测定

药物分析杂志 2005年第11期25卷 1306-1308页

作者：马丽丽葛庆华周臻支晓瑾上海普洛康裕药物研究院有限公司上海201314 上海医药工业研究院上海200437

目的:建立测定人血浆中硝呋太尔血药浓度的方法。方法:采用反相 HPLC 法,以呋喃妥因为内标,血浆样品经乙酸乙酯提取后,氮气吹干,流动相复溶后进样测定。色谱柱:C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-四氢呋喃-水-磷酸-二乙胺... 详细信息

目的:建立测定人血浆中硝呋太尔血药浓度的方法。方法:采用反相 HPLC 法,以呋喃妥因为内标,血浆样品经乙酸乙酯提取后,氮气吹干,流动相复溶后进样测定。色谱柱:C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-四氢呋喃-水-磷酸-二乙胺(20:20:5:55:0.2:0.2),流速为1.0 mL·min^(-1);紫外检测波长:363 nm。结果:硝呋太尔的线性范围为1.0～80.0 ng·mL^(-1),定量限为1 ng·mL^(-1);日内、日间 RSD 均小于6.9%,相对回收率为97.1%～100.4%,提取回收率均大于83.6%。结论:该法准确、灵敏,可用于硝呋太尔的临床药代动力学研究。

关键词：硝呋太尔高效液相色谱人血浆测定

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人血浆中盐酸昂丹司琼的HPLC测定

中国医药工业杂志 2002年第12期33卷 603-605页

作者：郑杭生潘伟王燕毛世瑞毕殿洲上海中医药大学中药学院药剂教研室上海200032 沈阳药科大学药学院药剂教研室辽宁沈阳110016

建立了测定人血浆中盐酸昂丹司琼的 HPL C法。采用 C1 8色谱柱 ,以甲醇 - 0 .0 2 m ol/L磷酸钠缓冲液 (p H7.5 )(6 5∶ 35 )为流动相 ,检测波长为 310 nm。用液 -液萃取法提取血浆 ,少量酸性水相反提有机相后进样分析。线性范围为 3～ 3... 详细信息

建立了测定人血浆中盐酸昂丹司琼的 HPL C法。采用 C1 8色谱柱 ,以甲醇 - 0 .0 2 m ol/L磷酸钠缓冲液 (p H7.5 )(6 5∶ 35 )为流动相 ,检测波长为 310 nm。用液 -液萃取法提取血浆 ,少量酸性水相反提有机相后进样分析。线性范围为 3～ 30 ng/m l(r=0 .9995 ) ,方法回收率为 10 0 .0 %～ 10 2 .6 % ,最低检测限为 1.5 ng(S/N≥ 3) ,日内、日间精密度均小于 8%。

关键词：盐酸昂丹司琼人血浆 HPLC 5-羟色胺受体阻断剂血药浓度

人血浆N-糖链超高效液相色谱检测方法的优化

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分析科学学报 2018年第6期34卷 716-722页

作者：王婷陈海松李旺 Josef Voglmeir 刘丽南京农业大学食品科技学院江苏南京210095

优化了超高效液相色谱(UPLC)检测N-糖链的方法,并用于人血浆样品检测。人血浆样品直接加热后使用N-糖酰胺酶F消化释放糖链,N-糖链经2-氨基苯甲酸胺(2-AB)标记反应4h,采用60%的乙腈进样浓度进行色谱分离,共得到19个色谱峰,对各峰使用离... 详细信息

优化了超高效液相色谱(UPLC)检测N-糖链的方法,并用于人血浆样品检测。人血浆样品直接加热后使用N-糖酰胺酶F消化释放糖链,N-糖链经2-氨基苯甲酸胺(2-AB)标记反应4h,采用60%的乙腈进样浓度进行色谱分离,共得到19个色谱峰,对各峰使用离线基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测得到N-糖链结构40种,其中含具有末端唾液酸修饰的N-糖链27种。结合液相色谱、唾液酸酶消化和质谱结构分析发现:部分N-糖链末端唾液酸无论是在三氯乙酸(TCA)沉淀还是氯仿/甲醇沉淀的前处理过程中都发生了解离;80%的乙腈进样浓度会导致大部分含唾液酸N-糖链沉淀而影响色谱检测;而2-AB标记4h反应时间能够在提高检测灵敏度的同时减少唾液酸的损失。使用该方法仅需2.5μL血浆样品即可进行检测,日内和日间的重复性试验结果均无显著性差异。研究结果表明优化后的UPLC法适用于富含唾液酸的人血浆样品的检测。

关键词： N-糖链人血浆超高效液相色谱基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱