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中国循证心血管医学杂志 2018年第9期10卷 1062-1065页

作者：康小荣张明升秦纲山西医科大学第一临床医学院太原030001 山西医科大学药理机能实验室太原030001 山西医科大学第一医院心内科太原030001

目的探讨莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉血内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并进一步研究莱菔硫烷在保护内皮细胞损伤中的机制。方法复苏由中国科学院上海细胞库提供的人脐静脉内皮细胞株,37℃、5%CO2... 详细信息

目的探讨莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉血内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并进一步研究莱菔硫烷在保护内皮细胞损伤中的机制。方法复苏由中国科学院上海细胞库提供的人脐静脉内皮细胞株,37℃、5%CO2条件下培养细胞至80%以上融合度时,分组进行干预。实验分组:(1)空白对照组(对照组):细胞正常培养2.5 h;(2)过氧化氢组(H_2O_2组):分别给予100、200、400、600、800μmol/L浓度培养细胞2 h,选择400μmol/L为其最佳干预浓度(后续各组如未特殊注明,默认H_2O_2浓度为400μmol/L);(3)莱菔硫烷+过氧化氢组(SFN+H_2O_2组):不同浓度SFN(2.5、5、10μmol/L)预孵育30 min后,加入400μmol/L的H_2O_2继续培养2 h。收集干预后的各组细胞,用MTT法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞内ROS水平,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)测定细胞内转录因子核因子E2(Nrf2)m RNA和血红素加氧酶-1(HO-1) mRNA表达情况。结果与对照组相比,H_2O_2组MTT法测定的细胞吸光光度值(A值)降低(P细胞吸光光度值高于H_2O_2组(P<0.05)。H_2O_2组ROS水平高于对照组(P<0.05),SFN+H_2O_2组ROS水平低于H_2O_2组(P<0.05)。H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05),SFN+H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平高于H_2O_2组(P<0.05)。结论莱菔硫烷对过氧化氢致HUVEC的氧化损伤有保护作用,其机制可能与莱菔硫烷在转录水平激活Nrf2/HO-1表达有关。

关键词：莱菔硫烷氧化应激人脐静脉血内皮细胞

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HiPSCs-KCs源性的外泌体在小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合中的作用及机制研究

HiPSCs-KCs源性的外泌体在小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合中的作用及机制...

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作者：薄云耀南方医科大学

学位级别：硕士

人和动物的皮肤是包裹在人和其他动物表面,直接同外界环境接触,具有保护、排泄、调节体温和感受外界刺激等作用的一种器官,是人类抵御外来侵扰的第一道屏障。因此,皮肤损伤后的修复是目前临床上较为常见的问题,例如:深Ⅱ度烫伤、Ⅲ度烫... 详细信息

人和动物的皮肤是包裹在人和其他动物表面,直接同外界环境接触,具有保护、排泄、调节体温和感受外界刺激等作用的一种器官,是人类抵御外来侵扰的第一道屏障。因此,皮肤损伤后的修复是目前临床上较为常见的问题,例如:深Ⅱ度烫伤、Ⅲ度烫伤等,由于无法自愈,需要医生干预治疗,伤口愈合时间很长,而且愈后皮肤功能恢复较差,会对患者造成身心的双重伤害。目前,寻求促进伤口快速愈合和改善皮肤愈后功能的新方法是科研人员研究工作的当务之急。外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡,可以参与细胞间通讯。近年来,随着科研人员的研究,人们对于外泌体的认识更加的深入,其在人体的各种生理活动中均发挥着重要的作用。进入21世纪,干细胞在严重烫伤治疗过程中发挥重要作用。诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。诱导多功能干细胞在应用的过程中没有普通干细胞存在的伦理学问题,促进了多种与炎症、组织损伤及再生修复相关疾病的治疗手段和策略的革新。目前,探究hiPSCs-KCs源性的外泌体为烫伤的修复提供了新的方向和希望。从而深化iPSCs在皮肤烫伤愈合中的研究和发展。***-KCs源性的外泌体对小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤愈合的作用(1)目的探讨hiPSCs-KCs-exosome对小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤愈合的影响。(2)方法1.培养hiPS细胞,对其进行分化处理,培养分化细胞之后,提取hiPSCs-KCs-exosome并将其进行鉴定分析。2.在小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤部位皮下注射hiPSCs-KCs-exosome。分析烫伤伤口的愈合情况。(3)结果1.所提取的物质具有外泌体的双层膜结构,且其粒径主要分布在70 nm左右,即 hiPSCs-KCs-exosome。2.与对照组相比较,hiPSCs-KCs-exosome能够显著性促进烫伤伤口的愈合和再上皮化。(4)结论hiPSCs-KCs-exosome显著性促进烫伤伤口的愈合和烫伤部位再上皮化。***-KCs-exosome促进小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤伤口愈合的机制(1)目的探讨hiPSCs-KCs-exosome对小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤伤口愈合的作用机制(2)方法1.通过细胞的EdU-488实验、细胞划痕和Transwell实验观察hiPSCs-KCs-exosome对HaCaT细胞、人脐静脉血内皮细胞(HUVEC)的增殖和迁移的影响。2.通过miRNA高通量测序筛选主要的miRNA分子,通过细胞划痕实验、Transwell实验、细胞EdU-488实验确定发挥作用的miR-762分子。(3)结果***-KCs-exosome可以被HaCaT细胞、HUVEC细胞吸收利用,可以促进HaCaT细胞、HUVEC细胞的迁移。***-KCs-exosome中miR-762分子含量丰富,发挥主要功能,可以促进HaCaT细胞、人成纤维细胞(HDF)、HUVEC细胞的迁移,同时可以促进HaCaT细胞、HDF细胞、HUVEC细胞的增殖。(4)结论hiPSCs-KCs-exosome可以显著性促进HaCaT细胞、HUVEC细胞的迁移。在hiPSCs-KCs-exosome分子中miR-762含量丰富,可以降低细胞粘附作用,从而促进HaCaT细胞、HDF细胞、HUVEC细胞的迁移,同时可以促进HaCaT细胞、HDF细胞、HUVEC细胞的增殖。***-762显著性促进小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤的愈合(1)目的确定miR-762是否可以促进小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤伤口的修复。(2)方法在烫伤部位皮下注射miR-762 agomir,治疗小鼠深Ⅱ度烫伤。通过大体图片分析、形态学染色和分析、免疫组化染色和分析,统计分析烫伤伤口的愈合和上皮化情况。(3)结果miR-762可以显著性促进小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤伤口的修复及愈合。(4)结论miR-762加速小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤伤口的修复及愈合。

关键词： miR-762 角质形成细胞成纤维细胞人脐静脉血内皮细胞外泌体深Ⅱ度烫伤烫伤愈合

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血小板浓缩生长因子对牙髓细胞和内皮细胞的促血管化作用研究

血小板浓缩生长因子对牙髓细胞和内皮细胞的促血管化作用研究

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作者：宦俊重庆医科大学

学位级别：硕士

牙髓血管再生/牙髓血运重建是治疗牙髓坏死的年轻恒牙的新方法,可达到促使牙根继续发育的临床效果,较传统的根管治疗具有明显的优越性。血小板浓缩生长因子(concentrate growth factors,CGF)是最新一代的血小板浓缩物,富含大量生长因子... 详细信息

牙髓血管再生/牙髓血运重建是治疗牙髓坏死的年轻恒牙的新方法,可达到促使牙根继续发育的临床效果,较传统的根管治疗具有明显的优越性。血小板浓缩生长因子(concentrate growth factors,CGF)是最新一代的血小板浓缩物,富含大量生长因子,能促进组织愈合,而且制备容易,生物相容性高,在口腔领域口腔种植,牙周手术等已有较多应用,但其在牙髓血管再生中的作用却鲜有研究。目的:以CGF体外作用于人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)和人脐静脉血内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。研究CGF对DPCs和HUVECs的成血管作用,为CGF在牙髓血管再生中的应用提供实验依据。方法:通过改良组织酶消化法分离获得人牙髓细胞后传代培养。取健康志愿者静脉血制成CGF,获得浓缩生长因子提取液(concentrate growth factors extracts,CGFe)。经剂量选择分为2%CGFe、5%CGFe、10%CGFe和15%CGFe不同浓度组为实验组,对照组培养基为仅含10%FBS的DMEM培养基,分别体外培养牙髓细胞和内皮细胞。CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;qRT-PCR检测牙髓细胞VEGF、PDGF、CXCR4的mRNA表达;western blotting检测牙髓细胞VEGF、CXCR4的蛋白表达量;transwell实验检测CGFe对内皮细胞迁移的影响;体外成血管实验检测内皮细胞形成血管状结构的能力。结果:CCK-8结果显示CGFe能够明显促进牙髓细胞和内皮细胞的增殖,10%以内的CGFe促进牙髓细胞和内皮细胞增殖效果呈浓度依赖性(P细胞增殖影响与10%CGFe无明显差异(P>0.05);CGFe培养内皮细胞36h时,10%CGFe组较15CGFe组促进内皮细胞增殖作用更强(P细胞VEGF,PDGF,CXCR4 mRNA表量和VEGF,CXCR4蛋白表达量均较对照组明显升高,以10%CGFe基因表达上调最明显,且结果呈浓度依赖性(P内皮细胞的迁移,并促进体外形成血管状结构,10%CGFe作用效果最明显,且结果呈浓度依赖性(P细胞体外增殖和成血管分化;CGF能促进内皮细胞的增殖,迁移和体外形成血管状结构。

关键词：血小板浓缩生长因子牙髓细胞人脐静脉血内皮细胞血管再生

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葛根芩连汤对高糖诱导HUVECs线粒体影响研究

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湖北中医药大学学报 2023年第6期25卷 9-13页

作者：陈俊葛亚梅林晓钱紫星朱梦杨冉凤柳源湖北省中医院湖北武汉430061 湖北中医药大学湖北武汉430065

目的观察葛根芩连汤(GQD)对于高糖处理的人脐静脉血内皮细胞(HUVECs)线粒体功能、结构、线粒体动力学相关蛋白的影响,探讨GQD对血管内皮的保护作用及机制。方法制备GQD含药血清,体外培养HUVECs,高糖诱导HUVECs损伤模型,以CCK8法筛选出... 详细信息

目的观察葛根芩连汤(GQD)对于高糖处理的人脐静脉血内皮细胞(HUVECs)线粒体功能、结构、线粒体动力学相关蛋白的影响,探讨GQD对血管内皮的保护作用及机制。方法制备GQD含药血清,体外培养HUVECs,高糖诱导HUVECs损伤模型,以CCK8法筛选出最佳给药浓度及时间并将细胞分为对照组、模型组、含药血清组和阳性对照组。以磷钼酸比色法检测HUVECs三磷酸腺苷(ATP)含量,乳酸脱氢酶比色法检测HUVECs乳酸(LD)含量,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定HUVECs葡萄糖(Glu)含量,以流式法检测线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体结构,Wstern Blot法检测线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2和分裂蛋白Drp1表达。结果最佳给药浓度为5%,最佳作用时间为48 h。高糖处理的HUVECs细胞Glu及LD含量增加,ATP含量下降,线粒体膜电位降低,Mfn1、Mfn2表达下降,Drp1表达增加(P血清组及阳性对照组HUVECs Glu及LD含量下降,ATP含量增加,线粒体膜电位增加,Mfn1、Mfn2表达显著上调,Drp1表达下降(P血清能够改善高糖诱导的HUVECs细胞线粒体结构与功能,其机制可能与GQD能够调节线粒体动力学有关。

关键词：葛根芩连汤糖尿病人脐静脉血内皮细胞线粒体动力学

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