检索结果-南通市图书馆

作者：金娟贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:剖宫产后子宫瘢痕愈合不良可导致不孕、胎盘植入、子宫破裂等不良结局,目前临床上尚无有效治疗方法。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是新疗法的有力候选者,主要通过旁分泌机制释放的外泌体(exosomes)发挥作用。充质干... 详细信息

目的:剖宫产后子宫瘢痕愈合不良可导致不孕、胎盘植入、子宫破裂等不良结局,目前临床上尚无有效治疗方法。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是新疗法的有力候选者,主要通过旁分泌机制释放的外泌体(exosomes)发挥作用。充质干细胞来源外泌体(mesenchymal stem cell-derived exosomes,MSC-exos)含有丰富的DNA、RNA及蛋白质,这些活性成分可以与受损细胞进行信息交流,对靶细胞进行生物学功能的调控,且外泌体具有稳定性、低毒性、生物相容性和良好的分子交换等生物学特性,因此已经成为组织修复再生的新选择。本研究旨在探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,h UCMSC-exos)移植对剖宫产后子宫瘢痕愈合不良大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:1.人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)的原代细胞进行培养、传代,选取第5-8代细胞进行后续实验。采用超速离心法从h UCMSCs的无血清培养上清液中提取外泌体,透射电镜观察外泌体粒子形态特征,Western Blot检测外泌体的特异性蛋白,BCA蛋白定量法检测外泌体蛋白浓度。2.将48只(n=96个子宫角)成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组:Normal组8只(n=16个子宫角)、Caesarean组10只(n=20个子宫角)、Model组10只(n=20个子宫角)、MSCs组10只(n=20个子宫角)、MSC-exos组10只(n=20个子宫角)。所有雌鼠与成年SD雄鼠按2:1比例同笼让雌鼠怀孕,除Normal组自然分娩外,其余各组孕鼠均在孕19天行剖宫产术。Caesarean组行普通剖宫产术,Model组、MSCs组、MSC-exos组采用感染+机械双重损伤法建立剖宫产后子宫瘢痕愈合不良模型,造模2周后再次进腹,Caesarean组、Model组在两个子宫角各注射0.2ml PBS,MSCs组在两个子宫角各注射5×10个/0.2m L h UCMSCs+PBS悬液,MSC-exos组在两个子宫角各注射50μg/0.2m L h UCMSC-exos+PBS悬液。治疗后8周,对每组5只大鼠(n=10子宫角)实施安乐死,除Normal组取全部子宫角外,其余各组每个标本仅选取瘢痕区段用于后续实验。HE染色用于评估子宫内膜厚度、肌层厚度,Masson染色用于评估子宫纤维化面积的变化,免疫组织化学及Western Blot检测α-肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平,q RT-PCR检测α-SMA、TGF-β1和VEGF m RNA表达水平。最后,在治疗后第8周,将每组的剩余大鼠(Normal组n=6个子宫角,其余组n=10个子宫角)与雄性大鼠交配,并在孕19天处以安乐死,以检查胎仔的数量、大小以及着床部位。3.为了探索h UCMSC-exos促进大鼠子宫切口愈合不良修复的分子机制,实验设立了联合注射β-catenin蛋白抑制剂ICG-001+外泌体的动物实验组(h UCMSC-exos+ICG-001组),SD雌鼠数量为5只(n=10个子宫角),我们进行Wnt/β-catenin信号通路上的相关主要分子表达的检测。通过免疫组织化学、Western Blot、q RT-PCR比较h UCMSC-exos组和h UCMSC-exos+ICG-001组β-catenin、VEGF蛋白及m RNA的变化,以评估血管生成的效果。结果:1.成功从h UCMSCs无血清培养上清液中分离提取外泌体,透射电镜观察h UCMSC-exos为圆形或椭圆形的杯口状囊泡,平均大小为30-150nm。Western Blot鉴定外泌体表面蛋白CD63和CD81有较高表达,BCA蛋白定量法测定的外泌体蛋白浓度为1.059μg/ul。2.子宫创面大体观察显示,治疗后8周所有组的手术区域均有不同程度的粘连,但Model组的粘连较广泛,部分子宫远端积水;MSCs组和MSC-exos组外观和质地与Normal组接近。HE染色显示,治疗后8周,Model组子宫内膜及肌层厚度明显小于Caesarean组(P0.05),但都小于Normal组(P<0.05)。Masson染色显示,治疗后8周,Model组瘢痕中纤维化面积明显大于Caesarean组(P<0.05),MSC-exos组和MS

关键词：人脐带间充质干细胞来源外泌体剖宫产后瘢痕愈合不良子宫瘢痕修复剖宫产生育力 Wnt/β-Catenin信号通路

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脐带间充质干细胞来源外泌体对大鼠放射性肺损伤作用及机制研究

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创伤与急危重病医学 2024年第4期12卷 216-221,226页

作者：杨紫恩欧阳明玥王丽丽刘硕孙凌燕阎英刘宇于卉影北部战区总医院基础医学实验室辽宁沈阳110016 北部战区总医院放射治疗科辽宁沈阳110016 北部战区总医院心血管外科辽宁沈阳110016

目的探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hUCMSC-Exo)对大鼠放射性肺损伤(RILI)的作用及机制。方法流式细胞术检测人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)表面标志物;蛋白免疫印迹法、纳米粒子跟踪分析及透射电子显微镜鉴定hUCMSC-Exo。根据随机数... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hUCMSC-Exo)对大鼠放射性肺损伤(RILI)的作用及机制。方法流式细胞术检测人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)表面标志物;蛋白免疫印迹法、纳米粒子跟踪分析及透射电子显微镜鉴定hUCMSC-Exo。根据随机数字表法将15只健康SD大鼠分为对照组、照射组和照射+Exo组,每组各5只,照射+Exo组大鼠在辐照后立即注射100μl的hUCMSC-Exo(剂量为1×10^(7)个/μl),其余两组注射100μl生理盐水,照射后4周处死大鼠并取材;苏木精-伊红(HE)和Masson染色法观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(INF-γ)表达;蛋白免疫印迹法检测大鼠右肺组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和IL-1β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测E-cadherin、Vimentin、IL-1β和IL-6的mRNA表达;免疫组织化学染色检测大鼠右肺组织中E-cadherin、Vimentin、TGF-β1和磷酸化Smad同源物(p-Smad)蛋白表达。结果与照射组相比较,照射+Exo组炎性细胞浸润减少,胶原沉积和纤维组织增生减少(P<0.05);血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α及INF-γ表达减少(P<0.05);肺组织中E-cadherin蛋白表达增加,Vimentin、TGF-β1、p-Smad和IL-1β蛋白表达减少(P<0.05);肺组织中E-cadherin的mRNA表达增加,Vimentin、IL-1β及IL-6的mRNA表达减少(P<0.05)。结论hUCMSC-Exo能够通过减少促炎因子分泌及抑制纤维化进展缓解RILI。

关键词：人脐带间充质干细胞来源外泌体放射性肺损伤促炎因子纤维化

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hucMSC-Exs缓解IBD恶性转化机制的研究进展(综述)

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安徽医专学报 2024年第3期23卷 89-91页

作者：方安宁严家来安徽医学高等专科学校安徽合肥230601

炎症性肠病(IBD)长期迁延不愈,易恶性转化导致结直肠癌(CRC)发生,目前临床上仍缺乏有效治疗IBD的方法。人脐带间充质干细胞(hucMSCs)及其来源的外泌体(Exs)能修复DSS诱导的小鼠IBD。人脐带间充质干细胞来源外泌体(hucMSC-Exs)抑制了由AO... 详细信息

炎症性肠病(IBD)长期迁延不愈,易恶性转化导致结直肠癌(CRC)发生,目前临床上仍缺乏有效治疗IBD的方法。人脐带间充质干细胞(hucMSCs)及其来源的外泌体(Exs)能修复DSS诱导的小鼠IBD。人脐带间充质干细胞来源外泌体(hucMSC-Exs)抑制了由AOM/DSS诱导的小鼠IBD恶性转化,可能是通过下调小分子泛素样修饰体-1(SUMO1)的表达进而影响相关信号通路的调控,但确切的机制亟待阐明。该文试图通过相关文献综述,阐明hucMSC-Exs作用的结直肠黏膜组织靶细胞及靶细胞对hucMSC-Exs的应答,揭示hucMSC-Exs下调靶细胞中SUMO1表达的关键分子及相关信号通路,深入探讨hucMSC-Exs抑制IBD恶性转化的作用机制,为hucMSC-Exs治疗IBD及其恶性转化提供新的思路。

关键词：炎症性肠病人脐带间充质干细胞来源外泌体恶性转化机制研究进展

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hUC-MSCs-exo的分离鉴定及对骨肉瘤Saos-2细胞作用的实验研究

hUC-MSCs-exo的分离鉴定及对骨肉瘤Saos-2细胞作用的实验研究

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作者：赵锦兵南昌大学

学位级别：硕士

目的:本次实验通过组织贴壁法从人脐带组织中分离得到脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),采用沉淀法分离出外泌体(exosomes)并鉴定,探索人脐带间充质干细胞来源外泌体(Human umbilical cord mese... 详细信息

目的:本次实验通过组织贴壁法从人脐带组织中分离得到脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),采用沉淀法分离出外泌体(exosomes)并鉴定,探索人脐带间充质干细胞来源外泌体(Human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes,hUC-MSCs-exo)的提取与鉴定方法,为以后研究奠定基础。再探究hUC-MSCs-exo对骨肉瘤Saos-2细胞生长的影响。方法:经医院伦理委员会批准于产房获取新鲜合格人脐带组织样本,采用组织贴壁法获得hUC-MSCs细胞,并对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)进行培养、传代、冻存及复苏等操作。后采用沉淀法分离出hUC-MSCs-exo,流式细胞术对外泌体表面标记蛋白CD63、CD81进行检测。再探讨hUC-MSCs-exo混悬液对骨肉瘤Saos-2细胞的作用。对Saos-2细胞用DAPI荧光核染色,外泌体进行PKH26荧光标记。将标记好的hUC-MSCs-exo液加入骨肉瘤Saos-2细胞培养液中培养24 h,荧光显微镜观察外泌体能否被骨肉瘤Saos-2细胞摄取。收集并配制不同浓度hUC-MSCs-exo混悬液,将实验分组:(1)外泌体组:分为滴加200、400、800μg/ml外泌体混悬液作用于骨肉瘤Saos-2细胞;(2)自噬抑制组:滴加200μg/ml外泌体悬液时,加入自噬抑制剂3-MA;(3)Control组:滴加相同体积的无血清培养基,余条件同上。使用细胞计数法、CCK-8实验、Transwell检测作用后的骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移及侵袭能力,MDC细胞自噬染色试剂盒检测Saos-2自噬水平变化,Western blot检测自噬标志蛋白Beclin1表达量。结果:组织块贴壁法成功分离出hUC-MSCs细胞,采用沉淀法成功分离hUC-MSCs上清液沉淀。使用流式细胞术鉴定上清沉淀,结果示本次提取的上清沉淀富集CD81及CD63蛋白,表示所提取的上清沉淀的hUC-MSCs-exo浓度较高。PKH26标记的外泌体与肿瘤细胞共培养24 h后,荧光显微镜观察证实Saos-2细胞对外泌体有摄取作用。细胞计数法和CCK-8实验表明MSCs-exo组与对照组相比可促进骨肉瘤Saos-2细胞增殖,并且Saos-2细胞增殖能力随着外泌体混悬液浓度增高而增强,然而exo+3-MA组细胞数目及OD值明显低于外泌体组。Transwell实验检测每组骨肉瘤细胞迁移及侵袭情况。镜下观察到外泌体组穿膜细胞量明显多于对照组,且随着外泌体浓度的升高骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力明显增强。而exo+3-MA组,Sao-2细胞迁移及侵袭能力较外泌体组明显下降。使用MDC染色法再次检验自噬情况,发现经外泌体处理后荧光斑点数量随浓度明显增加。Western blot检测示随着MSCs-exo的浓度升高,Beclin1蛋白的灰度值明显上升。结论:(1)本实验通过采用组织块贴壁培养方法获取hUC-MSCs,沉淀法分离MSCs-exo,以及对提取物的鉴定,表明我们团队成功掌握了能够提取出合适浓度外泌体的方法。(2)hUC-MSCs-exo通过激活自噬作用于骨肉瘤Saos-2细胞,对该种细胞的生长及侵袭具有促进作用,并且作用能力随着外泌体液浓度增加而增强。

关键词：人脐带间充质干细胞来源外泌体骨肉瘤生长侵袭自噬

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