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武汉大学学报（医学版） 2010年第4期31卷 541-543页

作者：翁敬飚阮海兰韦玲陈长智海南省农垦总医院消化内科海南海口570203

目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)移植治疗失代偿期肝硬化的临床效果。方法:20例肝硬化失代偿期患者,采用人脐带血干细胞移植治疗,移植术后3 d,7 d,14 d、4周,8周,12周观察血清转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋... 详细信息

目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)移植治疗失代偿期肝硬化的临床效果。方法:20例肝硬化失代偿期患者,采用人脐带血干细胞移植治疗,移植术后3 d,7 d,14 d、4周,8周,12周观察血清转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)水平变化,同时观察临床症状的改善情况。结果:术后3,7 d,各项肝功能指标无显著性差异(P>0.05),术后14 d、4周,除外ALT有所改善(P<0.05),其余指标无明显改善,8周各项肝功能指标均有改善(P<0.05)。12周有显著的改善(P<0.01),腹水减轻75.0%(15/20),乏力好转占80%(16/20)。食欲改善者占65%(13/20),移植术中和术后未见明显不良反应。结论:HUCMSCs体外培养诱导、扩充后外周静脉移植是治疗失代偿期肝硬化一种安全有效的方法,可以显著改善失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状。

关键词：人脐带干细胞移植肝硬化

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不同处理时间50Hz 3.6mT正弦交变磁场对人脐带干细胞增殖与成骨性分化的研究

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重庆医科大学学报 2012年第1期37卷 51-55页

作者：周建葛宝丰王家琪陈克明朱瑞清兰州军区兰州总医院骨科研究所兰州730050

目的：研究50 Hz 3.6 mT不同处理时间的正弦交变电磁场（Sinusoidal electromagnetic field,SEMFs）对体外培养人脐带干细胞（Human umbilical cord stem cells,HUCSC）增殖与成骨性分化的影响。方法：体外分离培养HUCSC,传代后随机分为... 详细信息

目的：研究50 Hz 3.6 mT不同处理时间的正弦交变电磁场（Sinusoidal electromagnetic field,SEMFs）对体外培养人脐带干细胞（Human umbilical cord stem cells,HUCSC）增殖与成骨性分化的影响。方法：体外分离培养HUCSC,传代后随机分为6组。用频率50 Hz,3.6 mT的SEMFs分别每天处理HUCSC 0.0（对照组）、0.5、1.0、1.5、2.0 h和2.5 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞增殖,在磁场处理后的15 d和17 d分别用茜素红和vonkossa对钙化结节进行染色,在磁场处理后的第4天和第6天PCR检测胶原Ⅰ（Collagen-Ⅰ）和骨形态发生蛋白（Bone morphogenetic protein-2,BMP-2）mRNA表达量的变化,在磁场处理后的10、12、14 d和16 d测定ALP活性。结果：1.0、1.5、2.0 h和2.5 h组促进HUCSC增殖;磁场处理后的7~9 d细胞出现钙化结节;在SEMFs处理后的第14天和第16天0.5 h组和1.0 h组碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性显著高于对照;SEMFs处理组能增加HUCSC钙化面积,其中尤以0.5 h和1.0 h最为明显;SEMFs能增加Collagen-Ⅰ和BMP-2mRNA表达量,其中尤以0.5 h和1.0 h组作用最为明显。结论：50 Hz,3.6 mT 1.0、1.5、2.0 h和2.5 h促进HUCSC增殖,同时SEMFs组能促进体外培养HUCSC成骨性分化,尤以处理0.5 h和1.0 h促进成骨性分化最为明显。

关键词：人脐带干细胞增殖分化正弦交变电磁场

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干细胞治疗肌肉骨骼疾病的研究进展

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中华实验外科杂志 2024年第3期41卷 646-649页

作者：金文意陈俊文张宇标彭昊武汉大学人民医院关节外科武汉430060

肌肉骨骼疾病,包括股骨头坏死、骨关节炎等,是导致非致命性伤残的首要因素,因此,需要探索更为完善的治疗方案。目前,干细胞疗法,尤其是异体来源的脐带干细胞治疗策略,已被证实对各个肌肉骨骼疾病均具有显著治疗效果。本文综述当前MSCs... 详细信息

肌肉骨骼疾病,包括股骨头坏死、骨关节炎等,是导致非致命性伤残的首要因素,因此,需要探索更为完善的治疗方案。目前,干细胞疗法,尤其是异体来源的脐带干细胞治疗策略,已被证实对各个肌肉骨骼疾病均具有显著治疗效果。本文综述当前MSCs治疗肌肉骨骼疾病的研究进展,以进一步促进干细胞疗法的临床应用。

关键词：干细胞人脐带干细胞股骨头坏死骨关节炎

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60度斜交叠层纤维环支架纤维直径对HWJ-MSCs诱导分化的影响

60度斜交叠层纤维环支架纤维直径对HWJ-MSCs诱导分化的影响

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作者：李麒峰天津医科大学

学位级别：硕士

目的:1.采用熔融纺丝法制备60度斜交叠层纤维环支架,表面添加多巴胺改性后评估其理化特性及相容性。2.研究60度斜交叠层支架复合人脐带干细胞(HWJ-MSCs)诱导分化构建组织工程纤维环的可靠性。3.探究60度斜交叠层纤维环支架纤维直径对人... 详细信息

目的:1.采用熔融纺丝法制备60度斜交叠层纤维环支架,表面添加多巴胺改性后评估其理化特性及相容性。2.研究60度斜交叠层支架复合人脐带干细胞(HWJ-MSCs)诱导分化构建组织工程纤维环的可靠性。3.探究60度斜交叠层纤维环支架纤维直径对人脐带干细胞诱导分化的影响效果。方法:1.以聚已内酯(PCL)颗粒为材料,通过熔融纺丝法制备纤维环支架,采用体式显微镜、扫描电镜(SEM)、Micro-CT观察支架的丝间结构,测定支架的纤维丝直径、孔径、孔隙率。力学加载机测量其压缩和拉伸弹性模量。2.分离脐带组织获得原代人脐带干细胞,传代扩增至P3代接种到PCL纤维环支架上,分两组加诱导液组(诱导组)和加含胎牛血清(FBS)基础培养液(对照组)。通过SEM、死活染色、FITC标记的鬼笔环肽骨架染色,观察细胞在支架上的黏附、形态、增殖情况,分别体外诱导培养3周组织学染色观察,RT-PCR检测两组样品培养1、7、21天蛋白聚糖及collagenⅠ、collagenⅡ型基因表达,Western-blot检测Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白及Aggrecan蛋白表达。3.制备三种不同纤维直径支架,接种人脐带间充质干细胞,体外诱导培养。采用体式显微镜、SEM观察支架结构、细胞粘附分泌基质情况,测量三种支架的压缩弹性模量,通过RT-PCR、Western-blot检测培养7天、21天复合体基因、蛋白表达情况,通过力学测量仪测量三种支架的压缩模量和拉伸模量。结果:1.支架呈白色圆环形,内径2mm,外径7mm,纵截面丝间成角60°呈规则的菱形,横截面纤维丝均匀环绕分布。支架纤维直径(42.95±1.88)μm、孔径(74.94±3.73)μm、孔隙率(58.25±0.11)%、压缩弹性模量(1.73±0.44)MPa,拉伸弹性模量为(7.75±0.38)MPa2.大体可见诱导组光滑规则组织、对照组粗糙不光滑规则组织;SEM见诱导细胞粘附在熔融纺丝支架上分泌大量细胞基质;死活细胞染色见活细胞(绿色)无死细胞;FITC染色显示细胞骨架沿纤维方向排列延展;组织学观察细胞及细胞外基质均沿纤维丝延伸,3周后的染色结果诱导组比对照组好;Western-blot蛋白定量检测显示细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan蛋白分泌逐渐增加(P细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达逐渐增加(P细胞基质分泌,定量分析得出基因、蛋白相应增加,纤维直径为(42.95±1.88)μm处的基因、蛋白量表达较好,且压缩和拉伸模量接近人纤维环。结论:1.采用熔融纺丝法构建60度斜交叠层纤维环支架,支架孔径、孔隙率理想,压缩和拉伸模量接近人纤维环力学范围,是纤维环组织工程较理想的支架。2.60度斜交叠层纤维环支架复合人脐带干细胞体外诱导培养后,能够得到在组织结构、生化组成人纤维环较为接近的复合组织。3.通过定性定量分析比较得出纤维直径为(42.95±1.88)μm支架,人脐带干细胞诱导分化较好,得到的支架细胞复组织适用于以后的体内实验。

关键词：纤维环组织工程熔融纺丝聚己内酯支架人脐带干细胞斜交叠层

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人脐带间充质干细胞源性细胞外基质促进周围神经再生的研究

人脐带间充质干细胞源性细胞外基质促进周围神经再生的研究

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作者：饶烽石河子大学

学位级别：硕士

目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)源性细胞外基质(extracellular matrix,ECM)促进周围神经再生的效果。方法:采用正常足月产儿脐带培养h UCMSCs,经过流式细胞鉴定技术和多... 详细信息

目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)源性细胞外基质(extracellular matrix,ECM)促进周围神经再生的效果。方法:采用正常足月产儿脐带培养h UCMSCs,经过流式细胞鉴定技术和多向分化潜能鉴定后采用化学法去除h UCMSCs的细胞成分,保留h UCMSCs的细胞外基质,分别采用免疫荧光染色检测细胞外基质的成分及扫描电镜技术检测细胞外基质物理结构。将雪旺细胞(Schwann cells,SCs)接种在制备好的ECM上,培养48小时后采用免疫荧光,细胞流式,RT-PCR,Western-blot等方法,观察ECM对雪旺细胞增殖,生长周期及表型维持的影响;将背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元接种在制备好的ECM上,培养48小时后采用免疫荧光的方法观察ECM对神经元轴突生长的作用。结果:流式细胞鉴定技术定量分析发现,人脐带间充质干细胞表达标志物CD44(98.1%)、CD73(99.1%)、CD90(99.6%)和CD105(99.3%)表达阳性,CD34(0.04%)和C D45(2.88%)表达阴性;经扫描电镜检测超微结构发现ECM呈整齐的网络状长丝状且均匀分布;经化学方法检测h UCMSCs来源ECM富含层粘连蛋白、纤连蛋白、胶原等化学成分;h UCMSCs来源ECM能够显著促进SCs增殖及分泌脑源性神经营养因子、神经胶质细胞源性的神经营养因子、血管内皮生长因子等;h UCMSCs来源ECM能够加快DRG神经元轴突的生长。结论:h UCMSCs源性ECM能够显著促进周围神经再生。

关键词：人脐带干细胞细胞外基质周围神经再生

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人脐带间充质干细胞蛛网膜下腔移植治疗脊髓损伤的实验研究

人脐带间充质干细胞蛛网膜下腔移植治疗脊髓损伤的实验研究

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作者：高健伟泰山医学院

学位级别：硕士

第一部分人脐带间充质干细胞的培养、鉴定、冻存复苏和脊髓损伤模型的建立目的 1.探讨人脐带间充质干细胞原代培养方法和鉴定等，观察其生物学特性。 2.探讨干细胞爬片培养，GDNF和BDNF荧光表达。 3.探讨大鼠损伤脊髓模型的正确建立。... 详细信息

第一部分人脐带间充质干细胞的培养、鉴定、冻存复苏和脊髓损伤模型的建立目的 1.探讨人脐带间充质干细胞原代培养方法和鉴定等，观察其生物学特性。 2.探讨干细胞爬片培养，GDNF和BDNF荧光表达。 3.探讨大鼠损伤脊髓模型的正确建立。方法 1.原代细胞培养和流式鉴定 1.1获得足月、健康剖腹产产妇的新鲜、无菌的新生儿脐带，提取人脐带华尔通胶或叫沃顿胶（Whartoncs jelly，WJ），行组织贴壁法，应用DMEM/F12进行体外原代培养和传代培养，并对其分离、纯化和鉴定。 1.2将脐带华尔通胶剪成约1mm×1mm×1mm大小，行组织贴壁法放置于6孔培养板中，随后把培养板放在37°C温箱中1.5小时进行贴壁。组织贴壁后取出将预制不锈钢网（1mm×1mm大小框径）置于组织块上方，加入DMEM/F12进行培养，观察不锈钢网在培养过程中对细胞数量的影响。 1.3采用流式细胞仪检测鉴别CD24、CD34、CD44、CD90在干细胞表面的表达。 1.4细胞的冻存和复苏遵循慢冻速融的原则（4℃冰箱30min→-20℃冰箱冷冻室30min→－80℃低温冰箱过夜→-194℃液氮保存。）。细胞培养传代至2代时严格按照步骤原则进行细胞的冻存，储存于液氮中;移植时将其取出复苏，培养传代至第4代细胞进行标记移植。 2.人脐带间充质干细胞爬片培养，GDNF和BDNF荧光表达 3.脊髓损伤模型的建立 3.1Wistar大鼠脊髓损伤模型的建立参照Wamil等制作方法，按落体致伤原理制成一撞击装置，撞击体头端3mm，长度3.5cm，撞击体重量8g，下落高度2cm，撞击体致伤的冲击力8g×3.5cm×2cm。大鼠称重250g左右,10%水合氯醛0.7ml/100g的剂量行腹腔内注射麻醉，将大鼠四肢固定于自制的固定板上。行手术区域碘伏消毒，依次切开暴露脊髓，安装自制打击器，定位T10脊髓上方，按预定方案行脊髓打击伤。所有大鼠脊髓打击模型造模操作及结果均一致，B组、C组、D组、E组术后即刻进行BBB评分均为0.00±0.00，同时观察大鼠神智意识、精神状态、心率、呼吸和四肢活动灵活性，同时观察注射后有无异常不良反应。 3.2收集干细胞观察干细胞融合达80%-90%时0.25%胰酶-EDTA消化，离心1000转5分钟，重新加入培养基，显微镜下进行细胞计数，控制在1×106个/ml的浓度，收集备用移植。结果 1.脐带华尔通胶（Whartoncs jelly，WJ）组织贴壁法，DMEM/F12体外原代培养7天可见细胞游出，放射状生长，呈菱形或条索状，细胞扁长饱满，集落增殖明显，培养到20天左右可达90%以上融合，细胞最为旺盛;连续细胞传代增殖较快，2-3天细胞融合达90%以上，继续行细胞传代。 2.使用不锈钢网贴壁培养，细胞游出明显加快，干细胞数量明显增加，细胞增殖传代时间缩短;对其细胞形态变化无影响。 3.流式细胞仪检测干细胞高表达CD44、CD90;不表达或低表达CD24、CD34。 4.严格按照遵循慢冻速融的原则（4℃冰箱30min→-20℃冰箱冷冻室30min→-80℃低温冰箱过夜→-194℃液氮保存。）进行细胞的冻存和复苏;复苏后干细胞形态结构、生长状况、增殖情况等与冻存前一致。 ***和GDNF免疫荧光染色在人脐带间充质干细胞中的表达结果显示整个细胞都有明显表达，同个区域分布均匀一致，以胞浆表达最为明显;呈现绿色时，细胞核不明显;呈现棕褐色表达时，细胞核明显可见。 6.参照Wamil等制作方法，落体致伤原理制成一撞击装置;按照大鼠脊髓打击造模成功的标准：脊髓打击损伤后可见大鼠后肢及躯体回缩弓背抽动、甩尾，随后弛缓性瘫痪，后肢肌肉完全松弛，B组、C组、D组、E组术后即刻进行BBB评分均为0.00±0.00，说明造模成功。 7.造模成功后立即行DMEM/F12和第4代人脐带间充质干细胞注射，分别对B组、C组、D组、E组移植后对大鼠进行神智意识、精神状态、心率、呼吸和四肢活动灵活性等各项指标检查未见异常，注射后未见不良反应。结论 1.采用带不锈钢网组织贴壁法，可以获得大量充足的间充质干细胞，可进一步增加细胞数量，提高分离纯化和流式鉴定的特异性。 2.在-194℃保存的细胞复苏后同样可以得到形态良好的干细胞。 3.人脐带间充质干细胞可明显表达BDNF和GDNF。 4.自制打击器打击大鼠脊髓可成功制造大鼠脊髓损伤模型，进行下一步实验。第二部分人脐带间充质干细胞蛛网膜下腔移植治疗脊髓损伤的疗效观察目的探讨蛛网膜下腔移植对损伤脊髓的疗效观察。方法 1.随机分组：A组为假手术组：大鼠常规手术进行脊髓暴露，不进行打击损伤，不做任何的移植。B组为单纯DMEM/F12脊髓内局部移植组：大鼠急性脊髓损伤打击模型造模成功后，止血使视野清晰，在距离T10

关键词：人脐带干细胞流式鉴定脊髓损伤模型制作蛛网膜下腔移植排斥反应免疫组化和荧光神经修复

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