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包载雷帕霉素的乳酸-乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞bcl-2、p27^(kip1)表达及细胞凋亡的影响

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中国医学科学院学报 2015年第6期37卷 633-640页

作者：苗立夫崔永亮尹燕平陈莲凤张华刘佩毛朱文玲宋存先杨菁清华大学第一附属医院心脏中心北京100016 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院心脏内科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理室北京100730 中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程所天津市生物材料重点实验室天津300192

目的观察雷帕霉素(RPM)及其乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)形成的载药纳米粒子(RPM-PLGA-NPs)在不同浓度和作用时间下对离体培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)细胞凋亡及调控基因bcl-2、p27kip1表达的影响。方法离体培养HUASMCs细胞并分别予不... 详细信息

目的观察雷帕霉素(RPM)及其乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)形成的载药纳米粒子(RPM-PLGA-NPs)在不同浓度和作用时间下对离体培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)细胞凋亡及调控基因bcl-2、p27kip1表达的影响。方法离体培养HUASMCs细胞并分别予不同浓度的RPM、RPM-PLGA-NPs作用12和24 h,设立生理盐水及空白PLGANPs对照组,免疫组织化学方法检测p27kip1与bcl-2表达阳性率和表达水平的差异,采用流式细胞仪、DNA片段琼脂糖凝胶电泳及末端原位标记法检测各组HUASMCs凋亡及细胞凋亡率,噻唑蓝比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA-NPs对HUASMCs存活率的影响。结果 RPM及RPM-PLGA-NPs组抑制HUASMCs增殖并呈剂量依赖关系,HUASMCs DNA电泳呈梯度条带阳性。流式细胞仪检测RPM 100 ng/ml和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的细胞凋亡百分率分别为(45.45±2.36)%和(35.04±5.64)%,显著高于对照组的(2.60±0.95)%(P细胞凋亡,并无下调抗细胞凋亡基因bcl-2表达的作用。相当载药量的RPM-PLGA-NPs较RPM促进血管平滑肌细胞凋亡的作用更明显,但与p27kip1表达水平无线性相关。

关键词：雷帕霉素乳酸-乙醇酸共聚物纳米粒子细胞凋亡人脐动脉平滑肌细胞

剪切修复基因XPD抑制Ox-LDL诱导人脐动脉平滑肌细胞的增殖

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中国病理生理杂志 2017年第12期33卷 2238-2244页

作者：夏子荣李青夏珍李菊香洪葵吴延庆吴清华程晓曙南昌大学第二附属医院心内科江西南昌330006

目的:探讨剪切修复基因——着色性干皮病D组基因(XPD)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法:将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs),实验分为空白对照组、空载质粒pEGFP-N2... 详细信息

目的:探讨剪切修复基因——着色性干皮病D组基因(XPD)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法:将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs),实验分为空白对照组、空载质粒pEGFP-N2组、重组质粒pEGFP-N2/XPD组、Ox-LDL组、Ox-LDL+pEGFP-N2组和Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组。用MTT法和Ed U法测定各组细胞的增殖率;流式细胞术检测各组细胞周期分布;利用Western blot法检测XPD、caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:Western blot实验结果发现,与空白对照组相比,pEGFP-N2/XPD组的XPD表达增加(P细胞增殖率较空白对照组降低(P细胞增殖明显被抑制(P细胞术的检测结果显示,与空白对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例明显减少(P细胞比例明显增多(P细胞比例减少(P细胞比例明显增多(P动脉粥样硬化治疗的靶点。

关键词：着色性干皮病D组基因氧化低密度脂蛋白人脐动脉平滑肌细胞动脉粥样硬化

小豆蔻明对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

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中国中药杂志 2010年第17期35卷 2318-2323页

作者：郑炜史道华纪相福韩莹廖琴南京军区福州总医院药学科福建福州350025 福建卫生职业技术学院药学系福建福州350101

目的:研究小豆蔻明(CAR)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的影响,探讨其可能作用机制。方法:采用高糖高胰岛素培养基模拟胰岛素抵抗(IR)诱导HUASMCs增殖,MTT法考察CAR对细胞增殖的作用,荧光实时定量PCR检测哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR... 详细信息

目的:研究小豆蔻明(CAR)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的影响,探讨其可能作用机制。方法:采用高糖高胰岛素培养基模拟胰岛素抵抗(IR)诱导HUASMCs增殖,MTT法考察CAR对细胞增殖的作用,荧光实时定量PCR检测哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其结合蛋白Raptor,Rictor mRNA表达,Livak法计算mRNA表达量。结果:高糖高胰岛素培养基明显促进HUASMCs的增殖。低剂量CAR(1×10-8,1×10-7,1×10-6mol.L-1)对正常及模拟IR培养的HUASMCs增殖无影响,而高剂量CAR(1×10-5,1×10-4mol.L-1)抑制细胞增殖。模拟胰岛素抵抗状态下,PD98059和LY294002干预后,CAR(1×10-5mol.L-1)对磷脂酸(PA)诱导的增殖具有抑制作用,可降低mTOR mRNA的表达,同时减少Raptor,Rictorm RNA的含量。结论:CAR抑制细胞增殖机制与mTOR通路密切相关,可能直接或主要作用于mTOR。

关键词：小豆蔻明胰岛素抵抗人脐动脉平滑肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白

雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

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中国医学科学院学报 2010年第1期32卷 32-38,139页

作者：苗立夫黄超联陈连凤朱文玲杨菁王以光张华刘佩毛佘铭鹏宋存先清华大学第一附属医院心脏中心北京100016 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院心脏内科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所天津市生物材料重点实验室天津300192 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理室北京100005

目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLG... 详细信息

目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照。采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响。结果10μg/L及以上浓度的RPM和50μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-smc生长,并呈浓度依赖性。细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24 h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P细胞周期进程于G_1/S期而抑制其细胞增殖。

关键词：雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子人脐动脉平滑肌细胞细胞周期细胞增殖 p27蛋白

西罗莫司对人脐带动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用

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中国药学杂志 2014年第22期49卷 1993-1996页

作者：周杰黄丽军张延柳陈晓娜曲福军哈尔滨医科大学附属第二医院药学部哈尔滨150086

目的考察西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用和对白细胞介素_6表达的影响。方法组织块贴壁法原代培养人脐动脉平滑肌细胞，利用传3代的细胞进行实验。四甲基偶氮唑蓝法分别测定西罗莫司在不同作用时间（3～96h）和... 详细信息

目的考察西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用和对白细胞介素_6表达的影响。方法组织块贴壁法原代培养人脐动脉平滑肌细胞，利用传3代的细胞进行实验。四甲基偶氮唑蓝法分别测定西罗莫司在不同作用时间（3～96h）和不同作用浓度（2．19—1090nmol·L^-1）下对人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用；采用逆转录一聚合酶链反应法和酶联免疫吸附实验分别法测定不同浓度的西罗莫司（2．19、10．9、109nmol·L^-1）对人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6mRNA和白细胞介素．6因子的影响。结果人脐动脉平滑肌细胞传3代后阳性细胞率〉90％。西罗莫司在不同作用时间和不同作用浓度下对人脐动脉平滑肌细胞增殖均有抑制作用（P〈0．05），作用时间为4,8h时抑制率为（30．25±2．40）％，药物浓度为164nmol·L^-1时抑制率为（42．88±3．84）％。高、中、低3种浓度的西罗莫司均可抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6mRNA（P〈0．05）和白细胞介素-6因子（P〈0．05），并呈剂量依赖性。结论西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞增殖有抑制作用，并能抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6mRNA和因子。

关键词：西罗莫司人脐动脉平滑肌细胞白细胞介素-6 四甲基偶氮唑蓝

不同fimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐动脉平滑肌细胞功能的影响

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不同fimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐动脉平滑肌细胞功能的影响

作者：喻丽遵义医学院

学位级别：硕士

目的:分析比较Ⅰ、Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)的增殖、迁移能力和表型转化的影响,探讨不同fim A型P.gingivalis-LPS感染在动脉粥样硬化(As)发生发展过程中的可能作用。方法:1.厌氧... 详细信息

目的:分析比较Ⅰ、Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)的增殖、迁移能力和表型转化的影响,探讨不同fim A型P.gingivalis-LPS感染在动脉粥样硬化(As)发生发展过程中的可能作用。方法:1.厌氧条件下培养Ⅰfim A型P.gingivalis(ATCC33277)和IVfim A型P.gingivalis(W83)。2.采用热酚-水法提取P.gingivalis-LPS,并通过鲎试验、SDS-PAGE对所提取的脂多糖进行鉴定。3.体外培养的HUASMCs 5代,加入96孔培养板,采用CCK-8检测不同终浓度的P.gingivalis-LPS(0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h对平滑肌细胞增殖的影响,酶标仪450nm处测定各组OD值。4.后续实验采用终浓度为10μg/ml的P.gingivalis-LPS,与HUASMCs共培养2h、8h、24h、48h后,采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验检测HUASMCs的迁移情况,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测收缩型标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(α-SM-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和合成型标志细胞视黄醇结合蛋白-1(cellular retinol bindingprotein-1,CRBP-1)的表达变化情况。结果:1.I、IV fim A型P.gingivalis-LPS对HUASMCs的增殖作用具有时间、浓度依赖性,随着刺激时间的延长、刺激浓度的增加,HUASMCs的增殖越强(P细胞数目高于I fim A型P.gingivalis-LPS组,差异具有统计学意义(P细胞体积较大,胞质内见大量线粒体、粗面内质网,高尔基体等细胞器增多,糖原等物质合成增多,肌丝成分较少,且吞噬体增多。在2h、8h、24h、48h时,IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激的HUASMCs均可见脂滴出现和增多。I fim A型P.gingivalis-LPS刺激的HUASMCs未见脂滴的出现,至观察末期48h,可见粗面内质网不同程度水肿。4.I、IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激后,上调HUASMCs的合成型标志分子CRBP-1的表达,下调HUASMCs收缩型标志分子ɑ-SMA、SM-MHC的表达,IV fim A型P.gingivalis-LPS上调CRBP-1表达的作用强于I fim A型P.gingivalis-LPS(P平滑肌细胞的表型由收缩型转换为更加活跃的合成型、并促进平滑肌细胞的增殖和迁移,从而可能参与和影响As的发生、发展;不同fim A型P.gingivalis-LPS对平滑肌细胞的促增殖、迁移和表型转换作用存在一定的差异。

关键词：牙龈卟啉单胞菌脂多糖人脐动脉平滑肌细胞动脉粥样硬化

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人脐动脉平滑肌细胞原代培养方法的比较

泰山医学院学报 2005年第3期26卷 187-189页

作者：綦惠商战平王家富张铭伟泰山医学院病理生理学教研室山东泰安271000 泰安市中心医院妇产科山东泰安271000

目的比较人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)两种原代培养方法的优劣.方法分离脐动脉,剥离中膜,将其剪成小块,贴块法将小块直接接种于培养瓶中;酶解法①单用胶原酶Ⅰ(0.2%)分别消化5小时、8小时、24小时后接种于培养瓶,②分别用胶原酶Ⅰ(0.2%)... 详细信息

目的比较人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)两种原代培养方法的优劣.方法分离脐动脉,剥离中膜,将其剪成小块,贴块法将小块直接接种于培养瓶中;酶解法①单用胶原酶Ⅰ(0.2%)分别消化5小时、8小时、24小时后接种于培养瓶,②分别用胶原酶Ⅰ(0.2%)消化3小时和胰蛋白酶(0.25%)消化2小时,接种于培养瓶.结果贴块法6天可以见到细胞从组织块周围游出,20～30天后可以进行传代;单用胶原酶Ⅰ消化24小时可以见到少量细胞,但由于细胞数少,无法进行传代;单用胶原酶Ⅰ消化5小时和8小时以及用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶联合消化均未见到贴壁生长的细胞.结论HUASMC原代培养贴块法较酶解法简便经济且成功率较高.

关键词：人脐动脉平滑肌细胞原代培养贴块法酶解法

人脐动脉平滑肌细胞培养及转染TFPI基因的实验研究

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国际生物医学工程杂志 2010年第5期33卷 293-296,324页

作者：董霞朱敦皖宋丽萍刘兰霞张海玲冷希岗中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所天津300192

目的探讨组织因子途径抑制因子（TFPI）基因对人脐动脉血管平滑肌细胞生长的影响,为TFPI基因用于血管再狭窄的治疗提供理论依据和实验基础.方法从人脐动脉分离平滑肌细胞,通过免疫组化方法进行细胞鉴定;用不同剂量pIRES-TFPI基因（分... 详细信息

目的探讨组织因子途径抑制因子（TFPI）基因对人脐动脉血管平滑肌细胞生长的影响,为TFPI基因用于血管再狭窄的治疗提供理论依据和实验基础.方法从人脐动脉分离平滑肌细胞,通过免疫组化方法进行细胞鉴定;用不同剂量pIRES-TFPI基因（分别为1,2,3 μg/mL）转染血管平滑肌细胞,采用RT-PCR测定细胞内TFPI表达以优化基因转染条件;通过MTT法测定TFPI基因对人脐动脉血管平滑肌细胞生长的影响.结果分离得到的血管平滑肌细胞的纯度高于90%;3个剂量的基因转染后,细胞内TFPI基因的表达水平无明显差异.采用2 μg/mL转染剂量时,TFPI基因转染后第5天,脐动脉血管平滑肌的生长受到明显抑制.结论通过基因转染的方式将TFPI基因导入细胞对人脐动脉平滑肌的增殖具有抑制作用.

关键词：人脐动脉平滑肌细胞组织因子途径抑制因子血管再狭窄

脉炎消口服液对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

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中国药房 2014年第31期25卷 2890-2893页

作者：白晓丹黄丽军柳玉杰张琪曲福军哈尔滨市中医医院哈尔滨150076 哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨150086 哈尔滨市食品药品监督管理局哈尔滨150021

目的：探讨脉炎消口服液在体外对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMCs）增殖的影响及其作用机制。方法：体外组织贴块培养HUASMCs，并传2～3代，免疫组化法进行鉴定；采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液（0．4％、4％、40％）对HUASMCs细... 详细信息

目的：探讨脉炎消口服液在体外对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMCs）增殖的影响及其作用机制。方法：体外组织贴块培养HUASMCs，并传2～3代，免疫组化法进行鉴定；采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液（0．4％、4％、40％）对HUASMCs细胞增殖的抑制作用；采用RT-PCR法检测不同体积分数脉炎消口服液（0．4％、4％、40％）对HUASMCs细胞IL-6mRNA表达水平的影响。结果：组织块贴壁法原代培养HUASMCs，传3代后，阳性细胞率为90％；脉炎消口服液对HUASMCs的增殖具有明显的抑制作用，且体积分数在一定范围内（0．4％～40％）呈浓度依赖性。结论：脉炎消口服液抑制HUASMCs增殖的作用是通过下调细胞IL．6mRNA的表达水平而实现的。

关键词：人脐动脉平滑肌细胞脉炎消口服液白细胞介素-6