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蛋白质去泛素化酶USP7调控人脂肪间充质干细胞成骨向分化的作用和机制研究

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蛋白质去泛素化酶USP7调控人脂肪间充质干细胞成骨向分化的作用和...

低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

2017全国口腔生物医学学术年会

作者：汤祎熳葛雯姝周永胜北京大学口腔医院修复科

目的:人脂肪间充质干细胞是骨组织工程理想的细胞来源,表观遗传学机制在干细胞的自我更新及命运决定中起着至关重要的作用。本研究的主要目的是探索蛋白质去泛素化酶USP7(Ubiquitin specific protease 7)对人脂肪间充质干细胞(Human adi... 详细信息

目的:人脂肪间充质干细胞是骨组织工程理想的细胞来源,表观遗传学机制在干细胞的自我更新及命运决定中起着至关重要的作用。本研究的主要目的是探索蛋白质去泛素化酶USP7(Ubiquitin specific protease 7)对人脂肪间充质干细胞(Human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨向分化的体内外作用;探索USP7调控h ASCs成骨向分化的表观

关键词：人脂肪间充质干细胞成骨向分化蛋白质去泛素化酶USP7 表观遗传学

来源： cnki会议评论

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江苏大学学报（医学版） 2014年第3期24卷 190-194页

作者：李兴天李小战马红许辉李淑李遇梅江苏大学附属医院皮肤科江苏镇江212001

目的:比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法:采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增... 详细信息

目的:比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法:采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增,将处于均一稳定生长状态的第3代hADSCs置于液氮中分别冻存1、3和6个月,复苏后台盼蓝染色检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,成脂成骨诱导后鉴定多向分化能力,RT-PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(peroxisome proliferator-activated receptorγ-2,PPARγ-2)和成骨特异性基因骨钙素(osteocalcin,OC)的表达情况。结果:随冻存时间的延长细胞存活率略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻存前后细胞均高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,低表达CD45和HLA-DR。冻存前后hADSCs均具有向脂肪细胞和骨细胞分化潜能,且RT-PCR结果显示,PPARγ-2和骨钙素mRNA的表达冻存前后差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:经液氮冻存后的hADSCs具有高存活率,生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。

关键词：人脂肪间充质干细胞冻存生物学特性干细胞库

非病毒、工程化人脂肪间充质干细胞产生BMP4可用于靶向性治疗脑肿瘤并延长患者生存期

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中国病理生理杂志 2016年第11期32卷 1995-1995页

作者：范冲竹

允许安全有效的非病毒纳米生物技术应用于基因治疗和细胞治疗是有利的,它可以用于治疗脑肿瘤等严重疾病。人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,h AMSCs）显示出高的抗神经胶质瘤的趋向性,可以作为脑肿瘤... 详细信息

允许安全有效的非病毒纳米生物技术应用于基因治疗和细胞治疗是有利的,它可以用于治疗脑肿瘤等严重疾病。人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,h AMSCs）显示出高的抗神经胶质瘤的趋向性,可以作为脑肿瘤靶向性治疗的递送载体。

关键词：病理学非病毒纳米生物技术脑肿瘤人脂肪间充质干细胞

牵张应力对5-氮杂胞苷诱导人脂肪间充质干细胞成心肌细胞的影响

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中国动脉硬化杂志 2011年第3期19卷 245-245页

作者：任刚边云飞李茂莲肖传实山西医科大学第二医院心内科山西省太原市030001

目的观察体外机械牵张应力对5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导人脂肪间充质干细胞(ADMSC)成心肌细胞的影响。方法取第3代纯化细胞接种于BioFlex培养板,用终浓度为10μmol/L5-Aza诱导干预24 h后,利用Flexcercell4000柔性基底拉伸系统,进行外力干预... 详细信息

目的观察体外机械牵张应力对5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导人脂肪间充质干细胞(ADMSC)成心肌细胞的影响。方法取第3代纯化细胞接种于BioFlex培养板,用终浓度为10μmol/L5-Aza诱导干预24 h后,利用Flexcercell4000柔性基底拉伸系统,进行外力干预。实验组接受力学信号波形为正弦波、频率为1 Hz及牵张应力大小为4%、8%、12%的力学刺激24 h,对照组不接受力学信号刺激,力加载过程在CO2培养箱内进行,加载程序由Flexcercell4000计算机软件自动控制。力学加载干预后,倒置显微镜观察细胞形态的变化和排列方向的改变。干预7天后RT-PCR测定心肌发育相关基因Nkx2.5的表达。结果力学加载干预后,细胞有被拉伸的迹象,细胞形态变长,并随着受力的增大而越发明显,细胞排列垂直于力的方向(受力环切线方向)。RT-PCR结果发现,Nkx2.5均阳性表达,但经过力学刺激后阳性条带更为明显。4%、8%和12%的力学刺激均可促进5-Aza诱导后的人脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化,但8%的力学刺激效果最为明显。结论适当的牵张应力可以提高人脂肪间充质干细胞向心肌细胞诱导分化。

关键词：人脂肪间充质干细胞 5-氮杂胞苷心肌细胞牵张应力

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改良法原代培养人脂肪间充质干细胞及其鉴定

中国组织工程研究 2022年第31期26卷 5002-5007页

作者：王慧王翠菊郑钧元王华郭宝娟陈培杨旭芳牡丹江医学院病理生理学教研室黑龙江省牡丹江市157000 牡丹江医学院形态学实验室黑龙江省牡丹江市157000 牡丹江心血管病医院放射诊疗中心黑龙江省牡丹江市157000

背景:采用常规酶消化法提取人脂肪间充质干细胞,由于消化的时间过长,导致获得的细胞活性变差,为满足组织工程对种子细胞数量的需求,该实验旨在寻找一种改良的人脂肪间充质干细胞培养方法。目的:胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取人脂肪... 详细信息

背景:采用常规酶消化法提取人脂肪间充质干细胞,由于消化的时间过长,导致获得的细胞活性变差,为满足组织工程对种子细胞数量的需求,该实验旨在寻找一种改良的人脂肪间充质干细胞培养方法。目的:胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取人脂肪间充质干细胞并进行相关生物学特性的鉴定。方法:将脂肪组织剪碎后分别应用胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法、常规胶原酶消化法进行培养;通过锥虫蓝拒染法计数细胞,比较不同方法获取细胞的产量、活力及增殖能力;利用流式细胞仪检测改良组细胞表面抗原CD105、CD73与CD44的表达;成骨或成脂诱导后,用碱性磷酸酶染色和油红O染色鉴定细胞分化能力。结果与结论:①胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取的细胞数量远多于常规酶消化法;②胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取的人脂肪间充质干细胞增殖能力强,细胞活力好,比常规酶消化法早1 d进入平台期,传代一次需5 d左右;③第3代改良组人脂肪间充质干细胞CD105、CD73与CD44表达均呈阳性,且纯度均达93%以上;④改良法获取的人脂肪间充质干细胞有良好的成骨与成脂分化能力;⑤结果表明,胶原酶Ⅰ消化法联合组织块培养法较常规酶消化法可获得数量多、活力好、增殖能力强的人脂肪间充质干细胞,且能够稳定传代,具有良好的分化能力,这满足了组织工程学的需求。

关键词：人脂肪间充质干细胞原代培养胶原酶Ⅰ消化法组织块培养法改良产量增殖活力分化

LL-37对高糖环境下人脂肪间充质干细胞生物学活性的影响及其机制研究

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LL-37对高糖环境下人脂肪间充质干细胞生物学活性的影响及其机制...

作者：刁杰林川北医学院

学位级别：硕士

目的:探讨LL-37对高糖环境下人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)增殖、迁移、分化能力、凋亡的影响,筛选差异表达基因(DEG)并对其进行功能分析与实验复证,以期为提高人脂肪间充质干细胞的治疗效果提供一种新的研究方法。方法:(1)采用CCK8法检... 详细信息

目的:探讨LL-37对高糖环境下人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)增殖、迁移、分化能力、凋亡的影响,筛选差异表达基因(DEG)并对其进行功能分析与实验复证,以期为提高人脂肪间充质干细胞的治疗效果提供一种新的研究方法。方法:(1)采用CCK8法检测不同浓度的LL-37对高糖环境下人脂肪间充质干细胞增殖的影响,确定实验浓度及作用时间。(2)划痕实验、成骨成脂分化相关基因检测、流式细胞术分别检测各组细胞经LL-37干预后细胞迁移、分化潜能和凋亡水平的变化;(3)运用高通量测序中RNA-seq技术分析筛选数据集中高糖环境下h ADSCs样本与高糖环境下经LL-37处理后h ADSCs样本之间的差异表达基因(DEG)。对筛选出的DEG分别进行生物学过程、分子功能、细胞组分的基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;根据基因组学分析中log2FC分数(相对表达量变化倍数的对数值)的大小对DEG进行排名,倾向于将高log2FC分数的基因视为关键基因。根据细胞的体外生物学行为及显著富集筛选,本研究将上调表达基因谱中log2FC分数排名前10的DEG视为关键基因,通过Gene Cards:The Human Gene Databases数据库及相关文献查找关键基因功能及所在通路,探讨在细胞生长发育方面密切相关的差异通路并加以实验验证。(4)实时荧光定量RT-q PCR检测各组中人即刻早期反应基因2(immediate early response 2,IER2)及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)m RNA的表达;结果:(1)经CCK-8法检测确定LL-37能在适宜范围的浓度和时间下促进在高糖环境下人脂肪间充质干细胞的增殖,确定实验浓度为25μg/m L(P细胞分化相关基因表达显著上调(P细胞凋亡比例明显减少(P细胞组分调控、生长发育过程/细胞增殖正向调控等方面显著富集(校正P值均细胞凋亡信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路和核转录因子kappa B(NF-κB)等方面显著富集(校正P值均细胞周期、细胞趋化、细胞增殖和转录等多种功能相关的几个基因(包括MATR3,IER2,UTP14C,ORAI2等)的水平。(4)LL-37干预组中IER2及ERK的表达显著高于未干预组,且高糖环境可能会在一定程度上抑制IER2及ERK的表达(P<0.05)。结论:1.经LL-37干预h ADSCs,可增加其在高糖环境下的增殖、迁移、分化以及抗凋亡的能力。2.LL-37可能通过IER2和MAPK/ERK途径促进h ADSCs的增殖、迁移、分化及抗凋亡能力。因此,LL-37可以调节并激活h ADSCs,并可能通过加强h ADSCs的功能(例如,增殖、迁移等作用),从而为提高h ADSCs的治疗效果提供了新方法。

关键词：糖尿病难愈合创面高糖环境人脂肪间充质干细胞抗菌肽 LL-37 差异表达基因

骨形态发生蛋白-2-磷酸钙共沉淀支架与人脂肪间充质干细胞构建新型组织工程化骨

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北京大学学报（医学版） 2017年第1期49卷 6-15页

作者：姜蔚然张晓刘云松吴刚葛严军周永胜北京大学口腔医学院·口腔医院修复科口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室口腔数字医学北京市重点实验室北京100081 Department of Oral Implantology and Prosthetic Dentistry Academic Centre for Dentistry Amsterdam(ACTA)Research Institute MOVEVU University and University of AmsterdamAmsterdamthe Netherlands 1081 LA

目的:构建可缓释骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的仿生磷酸钙(biomimetic calcium phosphate,BioCaP)共沉淀三维支架(BMP-2-coprecipitated biomimetic calcium phosphate,BMP-2-BioCaP),检测其理化特性,探究其对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)体内外成骨分化的影响,最终构建以h ASCs和BMP-2-BioCaP为基础的新型组织工程化骨。方法:构建BMP-2-BioCaP三维缓释支架,扫描电子显微镜观察表面形貌,体外检测其缓释能力。将BMP-2-BioCaP颗粒分别浸泡于增殖培养基(proliferation medium,PM)与成骨诱导培养基(osteogenic medium,OM)中,每2天提取上清液用于h ASCs的体外培养。CCK-8实验检测各组h ASCs的体外增殖能力,诱导7 d及14 d后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性定量检测,14 d及21 d进行茜素红染色及矿化沉积定量分析,4 d及14 d检测成骨相关基因的表达情况。体内实验使用6只裸鼠,于其背部正中做皮肤切口,向两侧共分离出4个皮下植入腔,分别植入:(1)单纯BioCaP支架,(2)BioCaP支架+h ASCs,(3)BMP-2-BioCaP缓释支架,(4)BMP-2-BioCaP缓释支架+h ASCs(实验组)。植入4周后取材,标本制成组织学切片进行HE染色观察。结果:BioCaP表面由不规则晶体组成三维立体多孔结构,孔直径约为5~10μm,加入BMP-2后,不影响BioCaP原有的立体结构。缓释曲线结果显示,蛋白质在前2天释放速度较快,随后释放速度放缓并于5 d后趋于平稳,之后每天释放量较稳定,至第21天仍有少量释放,累积释放量达20%。CCK-8结果显示,BMP-2-BioCaP缓释支架不会影响h ASCs的早期增殖。诱导7 d与14 d后,OM+BMP-2-BioCaP组ALP染色及活性定量检测均显著高于其他组(P细胞外基质呈强嗜酸性,出现类似骨陷窝的结构,并可见包含其中的类骨细胞。与BMP-2-BioCaP缓释支架组相比,实验组的细胞外基质嗜酸性更强,类骨组织的面积更大,结构更加典型,其他组未见矿化基质和类骨组织形成。结论:BMP-2-BioCaP支架能够实现BMP-2的良好缓释,并能显著促进h ASCs的体内外成骨分化,以h ASCs和BMP-2-BioCaP为基础构建的新型组织工程化骨具有潜在的应用前景。

关键词：骨形态发生蛋白质类磷酸钙类沉淀人脂肪间充质干细胞组织工程

改性丝素蛋白支架与生长因子基因修饰脂肪间充质干细胞构建组织工程脂肪

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中国组织工程研究 2014年第52期18卷 8450-8455页

作者：亢婷王刚刘毅刘刚强兰州大学第二临床医学院甘肃省兰州市730061 解放军兰州军区兰州总医院全军烧伤整形外科中心甘肃省兰州市730050

背景:构建工程化的脂肪组织,适宜的种子细胞和性能优良的支架材料缺一不可。目的:探讨携带重组人血管内皮细胞生长因子165基因的慢病毒载体感染人脂肪间充质干细胞后,与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体外构建组织工程脂肪的可行性。方法... 详细信息

背景:构建工程化的脂肪组织,适宜的种子细胞和性能优良的支架材料缺一不可。目的:探讨携带重组人血管内皮细胞生长因子165基因的慢病毒载体感染人脂肪间充质干细胞后,与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体外构建组织工程脂肪的可行性。方法:选取生长良好的第3代人脂肪间充质干细胞,用携带重组人血管内皮细胞生长因子165基因的慢病毒进行感染。将慢病毒感染与未感染的第3代人脂肪间充质干细胞成脂诱导14 d,油红O染色观察细胞的成脂能力;将慢病毒感染和未感染的第3代人脂肪间充质干细胞分别接种于壳聚糖修饰丝素蛋白支架材料上,MTT法检测细胞增殖能力;成脂诱导14 d后进行油红O染色,RT-PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶增殖物活化受体γ2的表达。结果与结论:成脂诱导14 d后,慢病毒感染与未感染的第3代人脂肪间充质干细胞均可见成熟脂肪细胞,组间差异不明显。慢病毒感染和未感染的第3代人脂肪间充质干细胞在改性丝素蛋白支架的生长曲线相近;成脂诱导后,油红O染色及RT-PCR均显示生成大量成熟脂肪细胞。表明携带重组人血管内皮细胞生长因子基因的慢病毒感染人脂肪间充质干细胞后,不影响其生长及成脂能力,与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料可成功构建组织工程化脂肪。

关键词：生物材料材料相容性人脂肪间充质干细胞慢病毒载体血管内皮细胞生长因子165 改性丝素蛋白

脂肪间充质干细胞移植上调肝脏增殖细胞核抗原表达促进肝细胞的再生

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中国组织工程研究 2017年第17期21卷 2690-2695页

作者：史光军张亚东胡音音谭雪莹青岛大学附属青岛市市立医院山东省青岛市266000 青岛大学医学院山东省青岛市266071 温州医科大学浙江省温州市325000

背景:脂肪间充质干细胞能够改善肝衰竭大鼠肝功能,在组织工程和细胞移植领域具有重要研究价值。目的:通过观察人脂肪间充质干细胞治疗肝衰竭大鼠的疗效,探讨其可能的相关生物学机制。方法:将肝衰竭模型大鼠随机分为模型组、脂肪间充质... 详细信息

背景:脂肪间充质干细胞能够改善肝衰竭大鼠肝功能,在组织工程和细胞移植领域具有重要研究价值。目的:通过观察人脂肪间充质干细胞治疗肝衰竭大鼠的疗效,探讨其可能的相关生物学机制。方法:将肝衰竭模型大鼠随机分为模型组、脂肪间充质干细胞组,分别通过尾静脉注射生理盐水或DAPI标记的人脂肪间充质干细胞(3.0×10~6个)。细胞移植后1,3,7 d,生化法检测各组大鼠血清肝功能,细胞移植后3 d,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素10水平,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化,Western blot检测大鼠肝组织内增殖细胞核抗原表达。结果与结论:(1)人脂肪间充质干细胞经尾静脉途径移植后可迁移至大鼠肝、肺组织;(2)细胞移植后1,3 d,脂肪间充质干细胞组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平较模型组显著降低(P细胞移植后3 d,脂肪间充质干细胞组大鼠血清白细胞介素10、肿瘤坏死因子α水平较模型组显著降低(P脂肪间充质干细胞组大鼠肝组织变性、坏死减轻;(5)脂肪间充质干细胞组增殖细胞核抗原蛋白表达较模型组显著上调;(6)结果表明,人脂肪间充质干细胞可明显抑制炎性反应,上调增殖细胞核抗原蛋白表达,促进肝细胞再生及肝功能恢复。

关键词：干细胞移植人脂肪间充质干细胞肝衰竭炎性反应肝再生增殖细胞核抗原