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糖基化终产物对人肾小管上皮细胞Fractalkine表达的影响

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医学研究生学报 2010年第10期23卷 1042-1047页

作者：周燕孙子林周莉翟清第二军医大学长征医院南京分院内分泌科南京医学硕士210015 东南大学附属中大医院内分泌科南京210009 淮阴市第一人民医院内分泌科淮阴223300

目的既往实验已观察到糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)可增加人肾系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、RANTES等表达,fractalkine(FKN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用尚不明确。本实验探讨AGE对人肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells,TEC)株HK-2 FKN表达的影响。方法运用AGE-BSA按不同的时间和浓度干预HK-2,分别用RT-PCR和ELISA法检测FKN mRNA的表达及蛋白分泌;用AGE-BSA及AGE-BSA加FKN中和抗体分别干预HK-2,用Transwell小室、共培养及荧光染色法检测HK-2趋化和黏附单核细胞株U937的功能。结果AGE-BSA干预组的HK-2 FKN的mRNA表达和蛋白分泌较对照组显著增加(P肾小管间质病变的发生发展。

关键词：糖基化终产物糖尿病肾病人肾小管上皮细胞单核细胞

肿瘤坏死因子对人肾小管上皮细胞Fractalkine的表达及其对单核细胞趋化作用的影响

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武警后勤学院学报（医学版） 2017年第7期26卷 559-563,F0002页

作者：王珊珊马萍李辉孙奕武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309 河北医科大学河北石家庄050017 武警后勤学院组织学与胚胎学教研室天津300309

【目的】研究在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)刺激下人肾小管上皮细胞(human kidneyproxiamal tubular cells-2,HK-2)Fractalkine的表达特点及其对人单核细胞(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)趋化作用的影响。【方法】利用MTT法观察TNF-α对HK-2细胞代谢和增殖活性的影响;采用RT-PCR、Real-Time PCR和Western印记法检测TNF-α刺激下HK-2细胞Fractalkine的m RNA和蛋白水平表达;应用免疫荧光细胞化学技术确定Fractalkine的亚细胞定位。应用Transwell装置观察TNF-α上调HK-2细胞Fractalkine表达和应用抗Fractalkine抗体状态下对THP-1细胞趋化作用的影响。【结果】(1)正常培养的HK-2细胞仅表达少量的Fractalkine,40 ng/ml TNF-α干预24 h其表达量达到峰值。(2)倒置荧光显微镜下观察Fractalkine主要在细胞膜上。(3)TNF-α刺激后的HK-2细胞对于THP-1趋化作用增强,加入抗Fractalkine抗体后其趋化作用下降。【结论】(1)TNF-α以时间剂量依赖方式上调人肾小管上皮细胞的Fractalkine的m RNA和蛋白表达。(2)Fractalkine主要表达于细胞膜表面。(3)TNF-α可通过上调Fractalkine表达增强HK-2细胞对于THP-1细胞的趋化作用。

关键词： Fractalkine 人肾小管上皮细胞肿瘤坏死因子单核细胞细胞趋化

高糖环境下exendin-4对人肾小管上皮细胞CTGF、BMP-7表达的影响

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医学研究杂志 2012年第10期41卷 122-125页

作者：张继敏兰丽珍孔瑜山西医科大学太原030001 山西医科大学第一附属医院内分泌科

目的探讨exendin-4对高糖环境下人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)蛋白和mRNA表达的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为正常糖对照组(NG)、高糖组(HG)、甘露醇组(MG)、高糖+不同浓度的exendin-4... 详细信息

目的探讨exendin-4对高糖环境下人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)蛋白和mRNA表达的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为正常糖对照组(NG)、高糖组(HG)、甘露醇组(MG)、高糖+不同浓度的exendin-4组(分别exendin-4 10、20、40pmol/L),于培养48h后,采用免疫细胞化学、RT-PCR方法检测HK-2细胞CTGF、BMP-7蛋白和mRNA表达量。结果与NG相比,HG组HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白表达明显升高(P细胞CTGF表达较HG组均明显降低(P细胞CT-GF高表达,提高BMP-7的表达,改善糖尿病肾病。

关键词：胰高血糖素样肽-1 exendin-4 人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子骨形态发生蛋白-7

糖耐康对转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7mRNA表达的影响

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中国中医药信息杂志 2013年第11期20卷 37-39页

作者：李芳杨丽霞舒畅刘铜华吴丽丽孙文甘肃中医学院甘肃兰州730000 甘肃省中医药研究院甘肃兰州730050 北京中医药大学北京100029

目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单... 详细信息

目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。

关键词：糖耐康转化生长因子-β1 人肾小管上皮细胞 Smad 2基因 Smad 3基因 Smad 7基因

黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其机制探讨

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中国中西医结合肾病杂志 2009年第8期10卷 664-667页

作者：魏佳莉王畅彭佑铭刘虹刘映红刘伏友中南大学湘雅二医院肾内科中南大学湘雅二医院肾病研究所长沙410011

目的:探讨黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其可能机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮(HK-2)细胞株转板至细胞融合并同步后,分为空白对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(5ng/ml)、TGF-β1加黄芪100μg/ml组、TGF-... 详细信息

目的:探讨黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其可能机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮(HK-2)细胞株转板至细胞融合并同步后,分为空白对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(5ng/ml)、TGF-β1加黄芪100μg/ml组、TGF-β1加黄芪1mg/ml组。作用24h后半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测纤维连接蛋白(FN)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中FN的含量;Western blot检测PAI-1的表达。结果:(1)HK-2细胞表达少量FN和PAI-1;(2)HK-2细胞在5ng/mlTGF-β1刺激下分泌FN、PAI-1 mRNA及FN、PAI-1蛋白表达明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P细胞在TGF-β1和不同浓度的黄芪作用后,可使FN、PAI-1 mRNA及蛋白表达减少,与TGF-β1组比较差异有统计学意义(P细胞分泌FN和PAI-1,黄芪可部分拮抗TGF-β1的上述效应。这可能是黄芪预防或改善肾小管间质病变的作用机制之一。

关键词：黄芪人肾小管上皮细胞细胞外基质转化生长因子-β1

TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的实验研究

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中国中西医结合肾病杂志 2018年第4期19卷 292-295,I0002页

作者：梁师钢姚丽君王玉梅湖北省黄石市阳新县第三人民医院黄石435200 华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430000

目的:TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响。方法:以正常肾组织为对照,Western blot检测TRB3在糖尿病肾病中的表达;将实验分为低糖组、高糖组、siRNA-NC+高糖组、TRB3-siRNA+高糖组,Western b... 详细信息

目的:TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响。方法:以正常肾组织为对照,Western blot检测TRB3在糖尿病肾病中的表达;将实验分为低糖组、高糖组、siRNA-NC+高糖组、TRB3-siRNA+高糖组,Western blot检测TRB3-siRNA沉默效果;各实验组细胞培养48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA表达;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达。结果:糖尿病肾病中TRB3的表达显著高于正常肾组织(P细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著高于低糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著低于低糖组(P细胞存活率、细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达与高糖组比较差异无统计学意义(P>0.05);TRB3-siRNA组细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著低于高糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著高于高糖组(P人肾小管上皮细胞系HK-2细胞的增殖,抑制细胞凋亡及转分化,而沉默TRB3的表达能减弱这种效果,其机制与Notch信号通路的调控有关。

关键词： TRB3 糖尿病肾病 Notch信号通路人肾小管上皮细胞增殖凋亡

高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞增殖及T钙黏蛋白表达的影响

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中国药物与临床 2010年第1期10卷 48-49页

作者：史作鹏李兴山西医科大学第二医院内分泌科太原030001

脂联素（adiponectin，ADPN）是近年发现的对糖尿病肾病（DN）有保护作用的细胞因子，主要由脂肪细胞分泌，通过与其受体结合发挥抗炎、抗动脉粥样硬化、调节糖脂代谢、抗纤维化等多种保护作用。其中T钙黏蛋白是2004年Hug等’发现的一种... 详细信息

脂联素（adiponectin，ADPN）是近年发现的对糖尿病肾病（DN）有保护作用的细胞因子，主要由脂肪细胞分泌，通过与其受体结合发挥抗炎、抗动脉粥样硬化、调节糖脂代谢、抗纤维化等多种保护作用。其中T钙黏蛋白是2004年Hug等’发现的一种ADPN受体．在健康人肾小管上皮细胞有表达，介导ADPN对肾脏的保护作用。本研究旨在探讨高糖环境中ADPN对人肾小管上皮细胞增殖及T钙黏蛋白表达的影响，探讨ADPN对高糖环境下肾小管上皮细胞的保护作用机制。

关键词：肾小管上皮细胞增殖高糖环境钙黏蛋白蛋白表达脂联素保护作用机制人肾小管上皮细胞抗动脉粥样硬化

高糖通过ERK1/2通路对人肾小管上皮细胞脂联素表达的影响

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临床肾脏病杂志 2016年第11期16卷 685-689页

作者：吴赛群王鸳鸳许广志吴小燕武汉大学中南医院肾内科武汉430071

目的通过体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),观察高糖对HK-2脂联素(adiponectin,ADPN)表达水平的影响并探讨其可能机制。方法将培养的HK-2细胞分为4组:①低糖对照组(5.6 mmol/L葡萄糖);②PD98059(职K1/2信号传导通路的抑制剂)组(5.6 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059);③高糖组(30 mmol/L葡萄糖);④高糖+PD98059组(30 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059)。各组分别培养48 h后荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activator receptor,PPAR-γ)及脂联素mRNA的表达,免疫印迹(Western blotting)法检测各组脂联素蛋白的表达水平。结果 HK-2细胞表达脂联素;PD98059组与低糖对照组相比,PPAR-γmRNA及脂联素的mRNA和蛋白表达的差异均无统计学意义(均P>0.05);与低糖对照组相比,高糖组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(均P细胞脂联素mRNA和蛋白的表达;高糖作用于HK-2细胞可能是通过激活ERK1/2信号传导通路降低PPAR-γ的表达,从而影响其脂联素的表达。

关键词：脂联素人肾小管上皮细胞高浓度葡萄糖 ERK1/2通路过氧化物酶体增殖物激活受体γ

姜黄素对TGF-β_1诱导人肾小管上皮细胞转分化及分泌细胞外基质成分的影响

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中国中西医结合肾病杂志 2008年第12期9卷 1040-1043,I0009页

作者：杨丽霞李彧王谦李健李亚东刘铜华牛建昭北京中医药大学北京100029

目的:通过研究姜黄素(curcumin,Cur)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及分泌细胞外基质(ECM)成分的影响,探讨姜黄素在防治肾小管-间质纤维化方面可能的作用机制。方法:应用不同浓度Cur处理经TGF-β1诱导活... 详细信息

目的:通过研究姜黄素(curcumin,Cur)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及分泌细胞外基质(ECM)成分的影响,探讨姜黄素在防治肾小管-间质纤维化方面可能的作用机制。方法:应用不同浓度Cur处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,通过显微镜观察细胞形态改变,免疫组化技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的分泌。结果:(1)正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强;(2)不同浓度Cur组与单纯TGF-β1刺激组相比α-SMA的表达有所减弱,而E-cadherin的表达增强;(3)不同浓度Cur抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与单纯TGF-β1刺激组相比有统计学差异(P人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ和FN的合成,在一定程度上具有防治肾小管-间质纤维化的作用。

关键词：姜黄素人肾小管上皮细胞转分化细胞外基质成分