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生姜醇提取物对人肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

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中国药房 2010年第39期21卷 3656-3658页

作者：张霖吴庆琛张诚重庆医科大学附属第一医院胸心外科重庆市400016

目的:研究生姜醇提取物对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用浓度为10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,以未经生姜醇提取物处理的A549细胞为对照。MTT比色法检测A549细胞增殖能力;光镜观察细胞的生长情况、形态... 详细信息

目的:研究生姜醇提取物对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用浓度为10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,以未经生姜醇提取物处理的A549细胞为对照。MTT比色法检测A549细胞增殖能力;光镜观察细胞的生长情况、形态学改变;原位末端TdT酶标记技术(TUNNEL)检测细胞凋亡的情况。结果:MTT比色法结果表明,10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物抑制率分别为14.87%、24.72%、38.21%,与对照组(0.04%)比较抑制率显著增加(P细胞生长正常,凋亡细胞少见,而生姜醇提取物处理的A549细胞生长疏散,凋亡细胞的比例增加,程度随生姜醇提取物浓度增高而加重,尤以40μmol·L-1作用24h最显著;TUNNEL检测的10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物下的A549细胞凋亡细胞指数分别为(9.36±0.82)%、(13.74±1.15)%、(19.17±1.40)%,与对照组(4.81±0.36%)比较均有显著差异(P人肺腺癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,即随剂量的增加而抑制率增加。

关键词：生姜醇提取物人肺腺癌细胞细胞增殖细胞凋亡

H3N2亚型禽流感病毒及猪流感病毒感染人肺腺癌细胞后增殖的差异性变化

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动物医学进展 2017年第4期38卷 35-40页

作者：崔梦一梁佳黄晓量劳婷婷王伊玲王晋高灵茜樊晓晖广西医科大学微生物学教研室广西南宁530021

人肺腺癌细胞A549被H3N2亚型禽流感病毒和猪流感病毒感染后,探讨不同毒株跨种属感染人呼吸道组织的可能性和趋势性。通过观察病毒感染A549细胞后的细胞病变(CPE)、血凝试验(HA)和50%组织细胞感染量(TCID50)来比较不同毒株感染细胞后的... 详细信息

人肺腺癌细胞A549被H3N2亚型禽流感病毒和猪流感病毒感染后,探讨不同毒株跨种属感染人呼吸道组织的可能性和趋势性。通过观察病毒感染A549细胞后的细胞病变(CPE)、血凝试验(HA)和50%组织细胞感染量(TCID50)来比较不同毒株感染细胞后的复制差异和毒力改变,发现同一亚型不同来源的流感病毒对A549细胞感染和复制能力有较大差异,哺乳动物来源的病毒更有感染人呼吸道细胞的趋势,SW/GX/NS2783/2010有潜在的感染人细胞的能力。感染过程中的细胞因子变化和病毒基因组组成特点是进一步研究的方向,应重点关注具有跨种属感染趋势的流感病毒及其特殊分子决定簇的组成和特点。

关键词： H3N2亚型流感病毒猪流感病毒禽流感病毒人肺腺癌细胞

乏氧对人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞和p53表达的影响

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中华放射医学与防护杂志 2004年第5期24卷 451-452页

作者：袁响林于世英夏曙胡健莉胡国清许三鹏华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心武汉430030

据报道,细胞周期阻滞与放射敏感性有着十分密切的关系,乏氧可诱导细胞周期阻滞,并可导致肿瘤细胞出现G0/G1阻滞,并认为乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)是乏氧诱导细胞周期G0/G1阻滞的必需元件,但作用机理... 详细信息

据报道,细胞周期阻滞与放射敏感性有着十分密切的关系,乏氧可诱导细胞周期阻滞,并可导致肿瘤细胞出现G0/G1阻滞,并认为乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)是乏氧诱导细胞周期G0/G1阻滞的必需元件,但作用机理及对细胞周期阻滞的影响程度目前尚不清楚[1-3].p53作为抑癌基因,是影响细胞周期调控机理的重要基因[4].因此,笔者采用人肺腺癌A549细胞系分别进行12和24 h乏氧,然后测定HIF-1α、p53及细胞周期,研究HIF-1α在乏氧条件下对细胞周期的调控作用及其与p53的关系,为以HIF-1α及p53为靶点治疗G0/G1阻滞提供实验依据。

关键词：乏氧细胞周期阻滞 p53表达人肺腺癌细胞 A549细胞诱导因子-1 影响基因 HIF-1α 细胞周期调控

RNAi技术对人肺腺癌细胞A549内源Survivin基因表达的影响

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山东医药 2009年第31期49卷 25-27页

作者：董俊红王振明孙洪亮王平潍坊医学院山东潍坊261042 潍坊市人民医院

目的为Survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法的临床应用提供依据。方法应用RNA干扰技术(RNAi)将靶向Survivin的基因片段插入载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,MIT法检测转染前后A549细胞增殖情况,RT-PCR及Western blot法分析转染前后Surv... 详细信息

目的为Survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法的临床应用提供依据。方法应用RNA干扰技术(RNAi)将靶向Survivin的基因片段插入载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,MIT法检测转染前后A549细胞增殖情况,RT-PCR及Western blot法分析转染前后Survivin mRNA和蛋白表达情况。结果成功构建重组质粒pGene-sil1.1-Survivin。转染重组质粒后Survivin mRNA和蛋白的表达明显降低,抑制率分别为65%和71%,细胞增殖受抑。结论RNAi技术构建的重组质粒可明显抑制A549细胞内源Survivin的表达和mRNA转录,其在肿瘤基因沉寂疗法中可能起重要作用。

关键词： RNA干扰 Survivin基因人肺腺癌细胞

9-顺维A酸对人肺腺癌细胞PG株的细胞周期影响和诱导凋亡作用

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中华结核和呼吸杂志 2003年第1期26卷 53-54页

作者：游庆军沈振亚金小寅王丰于雪艳胡国强苏州大学附属第四医院心胸外科 214062 苏州大学附属第一医院心胸外科山东大学医学院生化教研室山东大学附属齐鲁医院胸外科

已证实维A酸类化合物能调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动[1,2],最近的研究表明维A酸类化合物通过与核维A酸受体(RARs)及核维A酸类X受体(RXRs)结合发挥其生物学效应,在已知的维A酸类化合物中,9-顺维A酸(9-cis RA)唯一能与这两类核受... 详细信息

已证实维A酸类化合物能调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动[1,2],最近的研究表明维A酸类化合物通过与核维A酸受体(RARs)及核维A酸类X受体(RXRs)结合发挥其生物学效应,在已知的维A酸类化合物中,9-顺维A酸(9-cis RA)唯一能与这两类核受体结合 ,因为其生物学活性强于其他维A酸类化合物而倍受瞩目[1-3].本研究旨在观察9 -cis RA对肺癌细胞株PG细胞周期影响和诱导凋亡作用与全反式维A酸(ATRA)的比较,并初步探讨其作用机制,为9-cis RA临床治疗肺癌提供实验依据.

关键词： 9-顺维A酸人肺腺癌细胞 PG株细胞周期诱导凋亡肺癌

尼古丁对人肺腺癌细胞和人大细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

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环境与健康杂志 2016年第7期33卷 573-576页

作者：王军许雅鑫陈显久山西医科大学汾阳学院校长办公室山西吕梁032200 太原市疾病预防控制中心山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的观察不同浓度尼古丁对人肺腺癌(NCI-H1975)细胞和人大细胞肺癌(NCI-H460)细胞增殖和凋亡的影响。方法分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000... 详细信息

目的观察不同浓度尼古丁对人肺腺癌(NCI-H1975)细胞和人大细胞肺癌(NCI-H460)细胞增殖和凋亡的影响。方法分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h;或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞活性。分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为40μmol/L顺伯的低血清培养基24 h,诱导细胞发生凋亡;将诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h,或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h。采用Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡率。结果与对照组相比,各浓度尼古丁分别染毒NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞72 h后的细胞存活率均增加,差异有统计学意义(P细胞、NCIH460细胞暴露72 h后的细胞存活率呈明显的先上升后下降趋势。与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞存活率均较高,差异有统计学意义(P细胞、NCI-H460细胞的细胞存活率呈明显的上升趋势。40μmol/L顺铂作用于NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24 h后,其细胞凋亡率显著升高,与空白组相比,差异有统计学意义(P细胞、NCI-H460细胞72 h后,其细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P细胞、NCI-H460细胞暴露72 h后的细胞凋亡率呈明显的下降的趋势。与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用于顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P细胞、NCIH460细胞的凋亡率呈明显的下降趋势。结论尼古丁可促进NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞增殖并抑制细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡尼古丁增殖人肺腺癌细胞人大细胞肺癌细胞

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E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响

E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响

作者：刘艳伟山西医科大学

学位级别：硕士

目的：肺癌是我国常见的恶性肿瘤之一，近年来，其发病率不断增高。在我国沿海城市肺癌发病率在男性肿瘤中已占首位。E1A基因约占腺病毒5型基因组最左端1.77kb，可转录产生12S和13S两种mRNA，经不同拼接分别翻译243和289个氨基酸的两种... 详细信息

目的：肺癌是我国常见的恶性肿瘤之一，近年来，其发病率不断增高。在我国沿海城市肺癌发病率在男性肿瘤中已占首位。E1A基因约占腺病毒5型基因组最左端1.77kb，可转录产生12S和13S两种mRNA，经不同拼接分别翻译243和289个氨基酸的两种蛋白质。E1A蛋白是多功能转录因子，它能从正、负两种途径调控多种基因的转录。目前，E1A基因抗肿瘤作用的研究，对非小细胞肺癌作为对象研究的较少。本研究旨在探讨E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响，为人肺腺癌E1A基因治疗的可行性提供理论和实验依据，为基因治疗的临床应用奠定基础。方法：应用分子克隆技术，构建真核细胞高表达E1A基因的重组质粒pcDNA3-E1A，并对所构建的重组质粒，进行内切酶图谱鉴定和序列分析。脂质体介导将E1A基因转入人肺腺癌细胞系Anip973，经G418筛选获得稳定表达E1A基因的转染细胞Anip973—E1A。通过体内、外实验，观察了其生长速度、倍增时间、软琼脂集落形成能力、对裸鼠的致癌性及肿瘤转移能力等的改变。结果：构建真核细胞高表达E1A基因的重组质粒pcDNA3—E1A，酶切结果与预计相等，DNA序列分析结果与Gene Bank比较，核酸序列无重排及其它变化。PCR.RT—PCR和免疫细胞化学染色方法证明E1A基因已整合到转染细胞Anip973—E1A中，并稳定表达。体外实验显示，Anip973—E1A细胞生长速度减慢，倍增时间延长，为Anip973—vector细胞的1.36倍，软琼脂集落形成能力显著降低。体内实验显示，Anip973—E1A细胞组裸鼠出瘤时间晚，肿瘤体积小，其中有2只裸鼠至实验结束未触及肿瘤（2／6），抑瘤率为60.1％。第21天处死裸鼠计数肺转移灶，Anip973，Anip973—vector和Anip973—E1A细胞组肺转移灶数目分别为16.1士3.2，15.4士3.8和7.3士2.31，转移抑制率为 52.6%，免疫细胞化学染色显示:EIA基因的稳定表达可抑制HER 一2/neu基因的表达。结论:以上结果初步证明，EIA基因的稳定表达明显抑制人肺腺癌细胞的恶性表型，降低其对裸鼠的致瘤性，减少肺转移灶形成，说明EIA基因在肺癌基因治疗中有重要意义，为其临床应用提供了理论和实验依据。

关键词： E1A基因人肺腺癌细胞基因治疗增殖转移

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的差异性调控作用

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低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的差异性...

作者：贺承健南华大学

学位级别：硕士

目的：研究低氧是否可在人肺腺癌细胞SPCA-1诱导HIF-2α的基因表达，低氧对HIF-2α的调控作用，低氧对HIF-2α和HIF-1α的调控差异及其原因。方法：体外培养人肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间，采用RT-PC姘口we... 详细信息

目的：研究低氧是否可在人肺腺癌细胞SPCA-1诱导HIF-2α的基因表达，低氧对HIF-2α的调控作用，低氧对HIF-2α和HIF-1α的调控差异及其原因。方法：体外培养人肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间，采用RT-PC姘口westem blot检测低氧对HIF-2α和HIF-1α基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘筠和粘噻唑菌醇来探讨低氧对HIF-2α和HIF-1α蛋白的表达情况，探讨其表达调控的机理。结果： (1)正常氧条件下，SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中，HIF-1α表达量几乎不表达，HIF-2a在整细胞提取物中有少量表达，但在细胞核提取物中无明显表达，当SPCA-1细胞经低氧(0．5％O)处理4h后，HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多。 (2)常氧条件下细胞密度越低，HIF-2α和HIF-1α蛋白均显著减少。当氧浓度下降到3％以下时，HIF-2α和HIF-1α蛋白就有显著的增加。 (3)HIF-1α蛋白在低氧411后增加，6h后含量显著降低，12h后降低至对照组0h的水平。HIF-2α蛋白在低氧4h时增加，但在4～12h内无明显差异。HIF-2α和HIF-1αmRNA在低氧4h后无明显变化。但随着低氧时间的延长，低氧可明显改变HIF-1α和HIF-2αmRNA的表达，HIF-1αmRNA水平在低氧状态时从6h到12h时显著降低，而H1F-2αmRNA水平则明显升高。 (4)SPCA-1细胞经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘筠和粘噻唑菌醇处理4h后，HIF-2α和HIF-1α蛋白含量明显降低。结论 1．低氧可在人肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达;2．翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用;3．HIF-2α和HIF-1αmRNA的蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同 4．低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用。

关键词：低氧诱导因子-1α 低氧诱导因子-2α 人肺腺癌细胞低氧基因表达

多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用

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多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用

作者：郑静娴南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在全球恶性肿瘤中居首位,全世界每年肺癌发生超过150万例。其中非小细胞肺癌（NSCLC,non-small cell lung cancer）约占肺癌的80%,30%-40%的NS... 详细信息

研究背景和目的肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在全球恶性肿瘤中居首位,全世界每年肺癌发生超过150万例。其中非小细胞肺癌（NSCLC,non-small cell lung cancer）约占肺癌的80%,30%-40%的NSCLC在诊断时已失去手术根治的机会[1]。化疗是晚期NSCLC的主要治疗手段,含铂两药方案化疗是目前晚期NSCLC一线治疗的标准方案,但无论化疗药物如何组合,经化疗的晚期NSCLC患者中位生存期约为8至10个月左右,一年生存率在30%-40%左右,其疗效似乎已经达平台。近年来,随着肿瘤分子生物学,肿瘤免疫学以及细胞生物学学科的迅猛发展,分子靶向治疗应运而生。分子靶向治疗针对细胞内或表面特定分子,特异性强,不良反应少,是目前肿瘤治疗的一个研究热点。表皮生长因子受体（EGFR）是受体ErbB家族的一员,可促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡,提高肿瘤细胞的运动、黏着和侵袭能力,从而增加肿瘤向周边及远处侵袭转移的机会,有研究表明EGFR的高表达与肺癌的发生发展关系密切[2]。吉非替尼是2003年首个获美国食品和药物管理局（FDA）批准用于既往化疗失败的晚期NSCLC治疗的口服EGFR酪氨酸激酶抑制剂（Gefitinib,ZD1839,Iressa,易瑞沙）。两项随机、Ⅱ期临床试验IDEAL1＆2研究显示,对于化疗后复发的晚期NSCLC,吉非替尼可作为二线或三线治疗,不良反应轻,耐受性好,可长期使用[3,4]。IPASS[5]研究将吉非替尼作为一线治疗与一线化疗进行对比,结果显示,吉非替尼一线治疗无进展生存（PFS）显著优于TP联合化疗,最终OS数据无显著差异（18.8个月vs.17.4个月）。随后的三期临床试验NEJGSG002和WJTOG3405研究表明对于EGFR基因突变的晚期NSCLC,吉非替尼PFS优于化疗,有延长总生存的趋势[6,7]。吉非替尼于2011年被FDA批准应用于EGFR基因突变晚期非小细胞肺癌患者的一线治疗。考虑到化疗药物与EGFR-TKIs作用机制不同,人们寄希望于吉非替尼联合化疗能使晚期NSCLC疗效提高。目前体外研究表明,吉非替尼与传统化疗药物合用（包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、紫杉醇、多西他赛、多柔比星等）可以增强这些化疗药物抑制癌细胞增殖的效果,提示吉非替尼在体外具有协同化疗药物抗癌的作用,并且这一结果在动物试验中得以证实[8]。但多个大型临床研究INTACT1（健择／顺铂联合吉非替尼）[9]、INTACT2（紫杉醇／卡铂联合吉非替尼）[10]和TRIBUTE（紫杉醇／卡铂联合厄罗替尼）[11]、TALENT（吉西他滨／顺铂联合厄罗替尼）[12]均显示EGFR-TKIs与化疗同时作用在有效率及生存期方面并未优于单独化疗,且不能提高无疾病进展时间和疾病控制率。这种实验室研究与临床研究不符的结果,引发了两个问题：（1）EGFR-TKIs与化疗联合使用是否存在“优势人群”。（2）EGFR-TKIs与化疗的联合使用的最佳方式是如何。（3）假设EGFR-TKIs与化疗存在最佳给药方式,那么其细胞学机制是如何。因此,本研究的第一个目的是通过观察多西他赛和吉非替尼不同顺序用药对EGFR野生型和EGFR突变型细胞生长的影响,寻找NSCLC细胞不同EGFR突变状况的最佳给药方式。化疗与EGFR-TKIs二者联合应用增效与否的细胞学机制不明。既往的研究显示,化疗同时应用EGFR-TKIs不增效的发生机制可能与细胞周期有关[13,14],化疗后序贯应用EGFR-TKIs产生协同增效作用可能与EGFR磷酸化有关[15]。近年的研究表明IGF-1R亦可通过细胞内信号蛋白PI3K/AKT影响细胞对化疗及EGFR-TKIs敏感性[16,17]。因此,本研究的第二个目的旨在通过观测多西他赛与吉非替尼不同时序应用对EGFR野生型及突变型肺腺癌细胞的EGFR、IGF-1R表达及磷酸化影响、细胞内信号蛋白ERK、AKT表达及磷酸化影响及细胞周期变化,寻找可能的细胞学机制。方法 1、高分辨率溶解曲线分析技术（Quantitative PCR high-resolution melting,qPCR-HRM）检测A549及PC-9细胞EGFR及Kras基因突变;四甲基偶氮哇盐（MTT）比色法检测两株细胞生长曲线,多西他赛与吉非替尼单药及联合应用对两株细胞的生长作用;Western blotting检测细胞信号蛋白的影响;流式细胞术检测细胞周期变化 2、统计方法统计学处理采用SPSS13.0软件进统计学分析,以均数±标准差（Mean±SD）表示,相关各组间采用One-way ANOVA检验,不同组间比较采用LSD检验,P＜0.05判断为差异具有统计学意义。结果 1、细胞EGFR和K-ras基因状况 A549细

关键词：人肺腺癌细胞多西他赛吉非替尼细胞生长信号蛋白磷酸化细胞周期