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爱康方含药大鼠血清对人肺腺癌A549细胞内Bad、Caspase-9蛋白及mRNA的作用

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中国实用医药 2022年第13期17卷 191-196页

作者：刘文杰李巧玲马科宁夏医科大学 750004

目的探讨爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞内B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)、Caspase-9蛋白(Caspase-9蛋白)及mRNA的表达作用。方法 40只大鼠,采用随机分组法分为空白对照组(NS)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方组(AKF)和爱康方联合环... 详细信息

目的探讨爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞内B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)、Caspase-9蛋白(Caspase-9蛋白)及mRNA的表达作用。方法 40只大鼠,采用随机分组法分为空白对照组(NS)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方组(AKF)和爱康方联合环磷酰胺组(AC),每组10只。以人肺腺癌A549细胞为研究对象,依据前期研究结果选定20%的含药血清为最佳干预浓度,用各组含药血清分别干预细胞48、72 h后收集细胞用于检测。通过蛋白质印迹法(Western blot)测定干预后目的细胞中Bad、Caspase-9蛋白表达,实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)法测定Bad、Caspase-9 mRNA的表达。比较各组不同方法检测的Bad mRNA、Caspase-9 mRNA表达水平及Bad、Caspase-9蛋白表达水平。结果 48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论爱康方能抑制肺癌肿瘤生长,与环磷酰胺合用抑癌效果更佳,可能是通过上调A549细胞中促凋亡蛋白Bad、Caspase-9,诱导肿瘤细胞凋亡而实现的。

关键词：人肺腺癌 A549细胞爱康方 B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子 Caspase-9蛋白

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

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中南大学学报（医学版） 2005年第2期30卷 193-196页

作者：邓征浩周建华曹慧秋沈明文继舫中南大学湘雅医学院病理学教研室长沙410078

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernbl... 详细信息

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P人肺腺癌细胞A549的生长。

关键词：基因转染细胞株A549 RASSF1A基因抑制作用人肺腺癌肺腺癌细胞A549 增殖 blotting Western pcDNA3 真核表达重组体脂质体转染技术四甲基偶氮唑盐流式细胞仪分析 A549细胞系 RT-PCR mRNA表达 P65 生物学行为 B亚单位

人肺腺癌细胞总RNA电穿孔法转染的树突状细胞疫苗的体外抗肿瘤效应研究

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中国输血杂志 2011年第5期24卷 405-410页

作者：金娟王保龙完晓菊叶书来陈家萍应美爱王敏蔡秋妍安徽医科大学附属省立医院输血科安徽合肥230001

目的探讨人肺腺癌细胞A549总RNA电穿孔法转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的特征及其特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采... 详细信息

目的探讨人肺腺癌细胞A549总RNA电穿孔法转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的特征及其特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采集物中诱导DCs产生,同时从人肺腺癌细胞A549中提取总RNA用以转染DCs,并用转染后的DCs与自体T细胞共同培养,诱导成为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)。实验分未转染DCs组,转染PBS的DCs组,转染RNA的DCs组,以流式细胞术(FCM)鉴定DCs、T细胞表型、RT-PCR证明总RNA转染效率,MTT检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平并比较各组差异。结果 1)RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。2)RNA转染组的DCs表面标志物CD40、CD80、CCR-7、CD83、HLA-DR都呈强阳性表达,表达率明显高于PBS转染组DCs和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);3)流式结果显示RNA转染的DCs刺激后的T细胞表面标志物CD8比例明显上升;4)RNA转染组IL-12、IFN-γ分泌水平明显高于PBS转染组和未转染组(P<0.05);5)RNA转染组DCs可以有效刺激T淋巴细胞增殖,并且诱导肿瘤特异性CTLs产生,对A549细胞产生特异性杀伤作用。而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。结论利用电转染法可成功将A549的总RNA转入DCs内并使其表达肿瘤抗原,在体外能诱导肿瘤特异性免疫反应。

关键词：人肺腺癌 A549-RNA 树突状细胞肿瘤免疫电转染

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人肺腺癌多西他赛耐药机制的研究

中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第5期19卷 467-471页

作者：陈龙邦南京军区南京总医院肿瘤内科江苏南京210002

深入研究肺腺癌对多西他赛(docetaxel,DTX)耐药的分子机制,不仅有助于筛选出可用于临床指导DTX个体化用药的分子靶标,也可为耐药的干预策略研究提供研究方向。笔者课题组采用体外逐步提高DTX浓度的方法诱导建立了稳定传代的人肺腺癌SPC... 详细信息

深入研究肺腺癌对多西他赛(docetaxel,DTX)耐药的分子机制,不仅有助于筛选出可用于临床指导DTX个体化用药的分子靶标,也可为耐药的干预策略研究提供研究方向。笔者课题组采用体外逐步提高DTX浓度的方法诱导建立了稳定传代的人肺腺癌SPC-A1耐DTX细胞系SPC-A1/DTX,并从细胞形态、化疗敏感性、增殖、凋亡、细胞周期、药物转运等方面比较了亲本细胞与耐药细胞间的差异。进一步通过基因芯片及miRNA芯片分析,筛选出耐药细胞中差异表达显著的基因(如ING4)以及miRNA(如miR-200b、miR-100),在体内、外模型中进行功能获得性和(或)缺失性研究,证实ING4表达下调、miR-200b/E2F3及miR-100/Plk-1通路的异常参与了肺腺癌细胞DTX耐药表型的形成。

关键词：人肺腺癌多西他赛多药耐药

脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响

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中华结核和呼吸杂志 2005年第5期28卷 333-336页

作者：张立群汪蕙赖百塘岳文涛湛秀萍杨学惠张春燕张同梅北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学实验室 101149

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因... 详细信息

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。

关键词：脆性组胺酸三联体细胞恶性表型人肺腺癌逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) A549细胞 FHIT基因免疫组织化学染色流式细胞仪分析免疫组化方法细胞生长曲线集落形成试验细胞体外增殖 mRNA表达细胞周期蛋白表达脂质体介导

奥美拉唑逆转人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的研究

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肿瘤 2010年第11期30卷 924-928页

作者：杨列军姜达河北医科大学第四医院肿瘤内科石家庄050011

目的:探讨液泡ATPase[vacuolar(H+)-ATPase,V-ATPase]非特异性抑制剂奥美拉唑(omeprazole,OME)逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的耐药性及可能的作用机制。方法:以非细胞毒性浓度4μg/mL的OME预处理A549/DDP细胞24 h,再用2μg/mL顺铂(cisplatin,DDP)处理A549/DDP细胞。MTT法检测细胞的增殖抑制率,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)法间接检测细胞内pH值的变化,FCM法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和PTEN的表达,RT-PCR法检测VATPase、Bcl-2和PTEN mRNA的表达。结果:OME具有逆转A549/DDP细胞耐药性的作用,逆转倍数为1.45(P<0.01);OME预处理后A549/DDP细胞内pH值明显降低,Bcl-2蛋白表达下降,PTEN蛋白表达增加(P<0.01)。V-ATPase在亲本A549及A549/DDP细胞中相对表达量分别为0.88±0.00和0.99±0.00(P<0.01);A549/DDP细胞中V-ATPase在有无OME预处理的情况下的相对表达量分别为1.09±0.00和1.05±0.02,差异无统计学意义。Bcl-2 mRNA相对表达量下降(P<0.01),PTEN mRNA相对表达量增加(P<0.01)。结论:V-ATPase在A549/DDP细胞中高表达,OME能部分逆转A549/DDP耐药性,其作用机制可能与上调PTEN和下调Bcl-2表达有关。

关键词：奥美拉唑人肺腺癌顺铂耐药细胞株耐药性 cell line lung adenocarcinoma human A549/DDP细胞 V-ATPase 表达量 Bcl-2蛋白表达激光扫描共聚焦显微镜 PTEN蛋白表达 confocal microscope 预处理 OME 作用机制检测细胞内

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云芝糖肽对裸鼠人肺腺癌抗癌作用的研究

中国药理学通报 1995年第1期11卷 46-49页

作者：曾淑君沈宝莲文良珍中山医科大学药理教研室

ＰＳＰ（ｐｏｌｙｓａｃｃｈｉｄｅ－ｐｅｐｔｉｄｅ）是一种新型的免疫调节剂，经理化分析表明同日本产的ＰＳＫ（Ｋｒｅｓｔｉｎ）相一致。本研究证明．ＰＳＰ１～２ｇ·ｋｇ－１连续口服给药１５～２０ｄ，对裸鼠人肺腺癌有明显的抑... 详细信息

ＰＳＰ（ｐｏｌｙｓａｃｃｈｉｄｅ－ｐｅｐｔｉｄｅ）是一种新型的免疫调节剂，经理化分析表明同日本产的ＰＳＫ（Ｋｒｅｓｔｉｎ）相一致。本研究证明．ＰＳＰ１～２ｇ·ｋｇ－１连续口服给药１５～２０ｄ，对裸鼠人肺腺癌有明显的抑制作用，抑制率为５０％～７０％。在抑制肿瘤生长的同时，未见有血液系统和体重方面的变化。放射免疫法测定表明ＰＳＰ不会引起血浆ＣＡＭＰ和ＣＧＭＰ水平的改变，提示其抗癌机制可能与环核苷酸系统无关。

关键词：云芝糖肽裸鼠人肺腺癌抗癌作用

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达载体诱导人肺腺癌细胞凋亡的意义

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中华结核和呼吸杂志 2005年第8期28卷 537-540页

作者：周锐龙伟陈平中南大学湘雅二医院呼吸科长沙410011

目的构建天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达载体,观察Caspase3表达载体对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法应用基因重组方法,建立重构型Caspase3基因的真核表达系统pcDNA3.1revCaspase3质粒和野生型pcDNA3.1Caspase3质粒。... 详细信息

目的构建天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达载体,观察Caspase3表达载体对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法应用基因重组方法,建立重构型Caspase3基因的真核表达系统pcDNA3.1revCaspase3质粒和野生型pcDNA3.1Caspase3质粒。将实验细胞分为3组转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组,转染pcDNA3.1Caspase3质粒组,转染pcDNA3.1质粒空白对照组。前2组用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预。应用Caspase3酶活性分析、流式细胞仪及甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞Caspase3酶活性变化及细胞凋亡和增殖情况。结果(1)pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组的A549细胞Caspase3酶活性分别是(11.87±0.92)%、(5.34±0.38)%(t=16.02,P<0.01);用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预后,pcDNA3.1revCaspase3质粒组酶活性为(7.04±0.48)%,仍明显高于野生型pcDNA3.1Caspase3质粒组的(4.51±0.20)%(t=11.86,P<0.01)。(2)流式细胞分析结果显示,pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞凋亡率分别是(20.1±3.5)%、(7.8±2.8)%、(1.4±0.3)%,3组差异有统计学意义(F=44.01,P<0.01)。(3)MTT比色检测显示pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞生存率分别是(35.7±1.1)%、(72.8±2.9)%、(85.4±4.8)%,转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组生存率明显低于其他两组(F=375.07,P<0.01)。结论pcDNA3.1revCaspase3在A549细胞内有较强的自身活化能力,对Caspase3抑制剂抵抗作用较强,可明显诱导A549细胞凋亡并抑制A549细胞生长。

关键词：肺肿瘤 Caspase类 A549细胞凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶半胱氨酸蛋白酶3 癌细胞凋亡表达载体人肺腺癌 Caspase-3抑制剂

化瘀破症胶囊对裸鼠移植性人肺腺癌(LAX-83)的抑瘤增效作用

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中国临床康复 2005年第26期9卷 165-167页

作者：曹勇孟华钟安朴夏清华暨南大学医学院中医系广东省广州市510632

目的:观察化瘀破症胶囊对肺癌的抑制和应用抗肿瘤药物治疗(简称化疗)的影响。方法:实验于1998-10/1999-10在成都中医药大学附属医院药理实验室完成,BALB/Cpi-nu雄性裸鼠160只。①裸鼠40只,腋部皮下接种人肺腺癌LAX-83细胞24h后,随机分成... 详细信息

目的:观察化瘀破症胶囊对肺癌的抑制和应用抗肿瘤药物治疗(简称化疗)的影响。方法:实验于1998-10/1999-10在成都中医药大学附属医院药理实验室完成,BALB/Cpi-nu雄性裸鼠160只。①裸鼠40只,腋部皮下接种人肺腺癌LAX-83细胞24h后,随机分成5组,每组8只,顺铂组按3mg/kg腹腔注射,1次/d,连续4d;荷瘤模型空白对照组灌胃等容积的蒸馏水;化瘀破症胶囊高、中、低剂量组分别按4,2,1g/kg给药,1次/d,连续7d,停药后观察17d,第18天称体质量并处死动物,解剖瘤体称瘤质量。实验重复3批。②裸鼠40只,造模方法同①,造模后随机分成5组,每组8只。顺铂高剂量组按3mg/kg腹腔注射,隔日给药,连续4次;顺铂低剂量组按0.6mg/kg腹腔注射,1次/d,连续4d;顺铂低剂量联合化瘀破症胶囊高剂量组,在腹腔注射顺铂(0.6mg/kg)时,同时给予化瘀破症胶囊(4g/kg)灌胃给药;顺铂低剂量联合化瘀破症胶囊中剂量组,在腹腔注射顺铂(0.6mg/kg)时,同时给予化瘀破症胶囊(2g/kg)灌胃给药,荷瘤模型空白对照组灌服等容积的蒸馏水,1次/d,连续7d,第8天称体质量并处死动物,解剖瘤体称瘤质量,按平均瘤质量计算瘤质量抑制率。肿瘤抑制率(%)=(荷瘤模型空白对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/荷瘤模型空白对照组平均瘤质量×100%。结果:纳入实验小鼠160只,顺铂组有1只荷瘤小鼠出现死亡,进入结果分析159只。①化瘀破症胶囊单独应用时瘤质量抑制率:化瘀破症胶囊高和中剂量组3批分别为38.1%和34.3%,37.4%和35.5%,41.1%和34.1%,与荷瘤模型空白对照组相比,均有显著的抑瘤作用(P0.05);第2批与第3批瘤质量抑制率分别为30.8%和24.8%,均有显著的抑瘤作用(P人肺肺腺癌具有明显的抑瘤和对化疗药物的增效作用。

关键词：中成药小鼠,裸腺癌抑瘤作用人肺腺癌增效作用移植性胶囊化瘀裸鼠