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肾上腺髓质素对高氧肺损伤的保护作用研究

中国当代儿科杂志 2021年第12期23卷 1282-1288页

作者：张敏成利花殷晓桐罗好蔡成上海交通大学附属儿童医院/上海市儿童医院新生儿科上海200062

目的通过观察不同实验条件下肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对人肺微血管内皮细胞中降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)、受体活性修饰蛋白2(receptor activity-modifying proteins,RAMP2)、细胞外信号调节激酶(extracellular regulatedkinase,ERK)与蛋白激酶B(protein kinaseB,PKB)表达的影响,从而探讨ADM在高氧肺损伤过程中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞随机分为空气组及高氧组(各组n=3),高氧组细胞置于3 L/min 92%O_(2)+5%CO_(2)高纯混合气中培养;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和Western blot法分别检测ADM、CRLR、RAMP2、ERK1/2和PKB的mRNA及其蛋白表达水平。另取细胞分为未干扰组和干扰组(n=3),向干扰组细胞转染ADM siRNA后,检测ADM、ERK1/2、PKB的mRNA及其蛋白表达水平。结果与空气组相比,高氧组ADM、CRLR、RAMP2、ERK1/2、PKB的mRNA及其蛋白表达量均显著增高(P肺损伤的保护过程。

关键词：高氧肺损伤肾上腺髓质素细胞外信号调节激酶蛋白激酶B 人肺微血管内皮细胞

miR-29a通过调控PTEN表达对脂多糖诱导人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用研究

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中国生物工程杂志 2021年第5期41卷 8-16页

作者：陈玉琼谭文华刘海峰陈根湖南省郴州市第一人民医院郴州423000 南华大学药物药理研究所衡阳421001

目的:探讨miR-29a在脂多糖(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)损伤中的作用及机制。方法:构建LPS损伤HPMVECs模型。RT-qPCR检测miR-29a表达变化;试剂盒测乳酸脱氢酶(LDH)释放量;MTT和流式细胞术分别检测细胞存活率及凋亡率;Western b... 详细信息

目的:探讨miR-29a在脂多糖(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)损伤中的作用及机制。方法:构建LPS损伤HPMVECs模型。RT-qPCR检测miR-29a表达变化;试剂盒测乳酸脱氢酶(LDH)释放量;MTT和流式细胞术分别检测细胞存活率及凋亡率;Western blot测蛋白质表达水平;Microcosm、starBase、Pictar、TargetScan软件预测miR-29a的可能靶基因,双萤光素酶实验验证miR-29a和PTEN的靶向关系。结果:使用LPS处理HPMVECs,显著降低细胞中miR-29a的表达和细胞存活率,诱导LDH释放量和HPMVECs凋亡率增加,上调细胞中PTEN、Bim蛋白表达,下调p-Akt/Akt、p-FOXO3a/FOXO3a表达(P 0.05)。结论:过表达miR-29a可能通过抑制PTEN蛋白的表达水平、激活Akt/FOXO3a/Bim信号通路对LPS致HUVECs的损伤发挥保护作用。

关键词： MiR-29a 脂多糖人肺微血管内皮细胞 PTEN

内皮抑制素减轻脂多糖诱导的急性肺损伤的实验研究

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内皮抑制素减轻脂多糖诱导的急性肺损伤的实验研究

作者：岳渊佳木斯大学

学位级别：硕士

目的:本研究拟通过体内和体外实验探讨内皮抑制素(ES)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法:体内实验采用肺组织递送LPS建立小鼠ALI模型,C57BL/6小鼠随机分为9组:对照组,LPS组,ES干预组A(ES 2.5mg/kg-6h),ES干预组B(... 详细信息

目的:本研究拟通过体内和体外实验探讨内皮抑制素(ES)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法:体内实验采用肺组织递送LPS建立小鼠ALI模型,C57BL/6小鼠随机分为9组:对照组,LPS组,ES干预组A(ES 2.5mg/kg-6h),ES干预组B(ES 2.5mg/kg-12h),ES干预组C(ES 5mg/kg-6h),ES干预组D(ES 5mg/kg-12h),ES干预组E(ES 10mg/kg-6h),ES干预组F(ES 10mg/kg-12h)和阳性对照组,观察各组小鼠肺组织形态学改变;肺组织HE染色后进行病理学检查及肺损伤评分;测定肺系数值;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法检测血清VEGF水平;CBA法检测血清与BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;荧光酶法检测肺组织中MPO活性;Western Blot检测肺组织中Rho A、ROCK1、Caspase-3及NF-κB p65的蛋白表达。体外实验采用LPS诱导人肺微血管内皮细胞系(HPMEC)建立细胞炎症模型,分为4组:空白对照组,LPS组,ES干预组和ES单独作用组,采用CCK8法测定细胞活力;ELISA法检测HPMEC细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF的含量;Western Blot检测HPMEC中Rho A、ROCK1及NF-κB p65的蛋白表达;示踪法检测单层HPMEC细胞通透性。结果:体内实验中(1)ES对ALI小鼠肺损伤评分的影响:与对照组相比,LPS组肺损伤评分显著升高(P肺损伤评分显著降低(P肺损伤评分显著降低(P肺损伤评分显著降低(P肺系数的影响:与对照组相比,LPS组肺系数显著增大(P肺系数显著降低(P肺系数显著降低(P肺组织细胞凋亡的影响:与对照组相比,LPS组肺组织凋亡细胞数显著增多(P肺组织凋亡细胞均显著减少(P0.05);与LPS组相比,ES干预组D、F的Caspase-3蛋白表达显著减少(P细胞因子的影响:血清检测结果显示,与对照组相比,LPS组IL-6、TNF-α和IL-1β三种细胞因子的水平显著升高(P细胞因子水平均显著下降(P0.05);(6)ES对ALI小鼠肺组织MPO活性的影响:与对照组相比,LPS组肺组织MPO活性显著增加(P肺组织MPO活性显著下降(P0.05);(7)ES对ALI小鼠肺组织Rho A、ROCK1及NF-κB p65蛋白表达的影响:与对照组相比,LPS组肺组织Rho A、ROCK1及NF-κB p65蛋白表达显著增加(P肺组织Rho A、ROCK1、NF-κB p65蛋白表达显著减少(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与ES干预组A相比,ES干预组E的Rho A、ROCK1蛋白表达显著减少(P<0.05);与ES干预组B相比,ES干预组F的ROCK1、NF-κB p65的蛋白表达显著减少(P<0.05)。体外试

关键词：内皮抑制素脂多糖急性肺损伤人肺微血管内皮细胞 RhoA/ROCK信号通路

氧糖剥夺/复氧所致细胞焦亡在肺微血管内皮细胞损伤中的作用

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中国病理生理杂志 2021年第2期37卷 334-338页

作者：肖宗懿王小燕易寒宋娟安雨轩王寿勇重庆医科大学附属儿童医院麻醉科国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的:探讨氧糖剥夺/复氧(OGD/R)是否导致人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)焦亡及其在细胞损伤中的作用。方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环中HPMVECs缺血/再灌注过程。将细胞分为对照(control)组(正常培养)、OGD/R组(OGD 8 h... 详细信息

目的:探讨氧糖剥夺/复氧(OGD/R)是否导致人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)焦亡及其在细胞损伤中的作用。方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环中HPMVECs缺血/再灌注过程。将细胞分为对照(control)组(正常培养)、OGD/R组(OGD 8 h+恢复12 h)及VX-765(caspase-1抑制剂)组(在OGD/R之前4 h给予50μmol/L VX-765处理,其余培养条件同OGD/R组)。采用RT-qPCR和Western blot法检测caspase-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)及IL-18水平;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测上清液中LDH的水平。结果:与control组比较,OGD/R组caspase-1、NLRP3和ASC的mRNA和蛋白表达均升高(P细胞焦亡可缓解OGD/R对HPMVECs的损伤。

关键词：氧糖剥夺细胞焦亡人肺微血管内皮细胞

热联合内毒素上调ANGPTs/Tie-2表达诱发肺微血管内皮细胞糖萼降解并导致细胞活性功能异常的研究

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热联合内毒素上调ANGPTs/Tie-2表达诱发肺微血管内皮细胞糖萼降解...

作者：陈加弟暨南大学

学位级别：硕士

目的:观察重症中暑后人肺微血管内皮细胞糖萼结构功能变化、以及该变化与血管内皮功能活性改变的关系。方法:通过热打击联合内毒素制备人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMEC)中暑模型:选取细胞浓度... 详细信息

目的:观察重症中暑后人肺微血管内皮细胞糖萼结构功能变化、以及该变化与血管内皮功能活性改变的关系。方法:通过热打击联合内毒素制备人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMEC)中暑模型:选取细胞浓度为1x10/ml的HPMEC,分4组,每组8孔,经过常规培养72小时后,分别进行如下预处理:(1)空白对照组(Control组,CON组):常规条件下进行细胞培养,不接受热联合脂多糖(Lipopolysaccharid,LPS)打击;(2)中暑组(Heat Stroke组,HS组):造模前不实施任何预处理;(3)乙酰肝素酶组(Heparanase组,HPSE组):造模前1小时加入含0.2 U/ml HPSE培养液37℃孵育30分钟;(4)普通肝素组(Unfractionated Heparin组,UFH组):造模前12小时加入含10U/ml普通肝素培养液孵育12小时。除CON组外其余各组HPMEC先接受43℃热打击30分钟,随后移至5%CO、37℃孵育箱内,继之以500 ng/ml浓度的LPS刺激12小时。1.内皮糖萼的结构功能、活性变化检测:糖萼含量:通过免疫荧光染色和流式细胞术检测各组HPMEC表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfate proteoglycan,HSPG)的表达水平变化;糖萼崩解产物水平:酶联免疫吸附分析(Enzyme-Linked Immune Sorbent Assay,ELISA)测定多配体蛋白聚糖Syndecans-1和硫酸乙酰肝素(heparansulfate,HS)水平(本研究所选取ELISA的目标蛋白基本都是以外分泌为主或者是通过外分泌发挥作用的)。2.HPMEC超微结构、功能及细胞活性检测:电镜观察HPMEC超显微结构改变;HPMEC炎症指标变化及细胞活性检测:ELISA测定:TNF-α、IL-6、v WF及ET-1水平;使用Western Blot方法测定细胞间连接蛋白Occludin表达水平以及粘附蛋白:E-选择素、血管内皮粘附分子-1(Vascular Cell Adhesion Molecule-1,VCAM-1)水平;使用DCFH-DA探针标记活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS),荧光显微镜避光分析内皮细胞中ROS浓度;使用Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡比例。3.血管生成素(angiopoietins,ANGPTs)/内皮细胞酪氨酸激酶型受体-2(Tyrosine kinase Receptor-2,Tie-2)ANGPTs/Tie-2通路相关蛋白和受体的检测:ELISA检测ANGPT-1与ANGPT-2浓度、同时Western Blot检测Tie-2受体表达水平。结果:1.重症中暑导致HPMEC的HSPG含量显著降低,相比于HS组,HPSE组的HSPG减少更严重,而UFH对HSPG减少具有一定抑制作用;中暑细胞Syndecans-1和HS水平出现明显升高,相比于HS组,二者在HPSE组的升高水平更为显著,而UFH组则相对减少。2.通过透射电镜观察,中暑可导致HPMEC出现严重损伤,热打击的三组中HPSE组受损最严重,HS组次之,UFH组则受损较轻;中暑可造成HPMEC凋亡增加,造模的三组中HPSE组的凋亡比例最高,而UFH组的凋亡比例最低;重症中暑可导致HPMEC产生和释放大量的TNF-α、IL-6、v WF及ET-1,其中HPSE组最甚,而UFH对上述蛋白的过度分泌具有抑制作用;重症中暑诱发HPMEC E-选择素和VCAM-1的表达水平明显升高,而HPSE组比HS组升高更为明显,UFH组则低于HS组水平,而Occludin蛋白水平的变化与各组间差异则刚好相反;与此同时,中暑打击下HPMEC细胞中的ROS明显增加,相比于HS组,HPSE组水平最高,而UFH组最低。3.重症中暑可使HPMEC产生大量的ANGPT-1和ANGPT-2,其中ANGPT-2的升高幅度更为明显,在各组ANGPT-2/ANGPT-1比值对比中,呈现HPSE组(29)HS组(29)UFH组(29)CON组的结果,同时造模细胞Tie-2表达也明显升高,HPSE预处理促进Tie-2升高,而UFH预处理缓解这一改变。结论:重症中暑诱发人肺微血管内皮细胞糖萼降解并导致细胞发生氧化损伤和凋亡,进而造成其抑制炎症反应和维持血管通透性的功能障碍,而ANGPTs/Tie-2通路蛋白的表达异常可能是上述现象的重要分子机制。

关键词：重症中暑人肺微血管内皮细胞糖萼血管生成素/内皮细胞酪氨酸激酶型受体-2

低氧联合TNF-α通过激活STAT3而非ERK1/2途径介导人肺微血管内皮细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第7期32卷 896-900,905页

作者：吉圣珺温业良赖其廷李敏菁张培芳佛山市第一人民医院呼吸内科广东佛山528000

目的探讨低氧联合肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)凋亡的信号通路。方法低氧6、12、24 h及(10、20、50、100)ng/m L TNF-α分别处理HPMVEC,使用MTT比色法检测各组的细胞活性;选用最佳的低氧时间及TNF-α剂量联合... 详细信息

目的探讨低氧联合肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)凋亡的信号通路。方法低氧6、12、24 h及(10、20、50、100)ng/m L TNF-α分别处理HPMVEC,使用MTT比色法检测各组的细胞活性;选用最佳的低氧时间及TNF-α剂量联合刺激HPMVEC,流式细胞术检测caspase-3的活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)检测各组细胞的凋亡情况,采用Western blot法检测各组细胞中磷酸化信号转导子与转录因子3(p STAT3)及磷酸化胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)的水平。结果 MTT法显示,低氧24 h组的相对细胞活性最低,100 ng/m L TNF-α处理组的相对细胞活性明显降低且对细胞活性的抑制呈现剂量依赖性;选用低氧24 h及100 ng/mL TNF-α作为联合处理组,与空白对照组及单独处理组相比,联合处理组的caspase-3活性及细胞凋亡率均升高。Western blot结果显示,与空白对照组相比,联合处理组的p STAT3表达明显升高,而p ERK1/2的变化无统计学意义。而STAT3通路阻断剂S3I-201可使联合处理组的细胞凋亡率下降。结论低氧状态联合TNF-α通过激活STAT3而非ERK1/2介导HPMVEC凋亡。

关键词：低氧肿瘤坏死因子仅(TNF-α) 信号转导子与转录激活子3(STAT3) 胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 人肺微血管内皮细胞细胞凋亡

半夏多糖对脂多糖诱导人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

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中国药理学与毒理学杂志 2018年第6期32卷 455-461页

作者：罗超祝春燕潘雨萍吴伟斌绍兴文理学院元培学院浙江绍兴312000 绍兴文理学院附属医院综合康复科浙江绍兴312000 肇庆医学高等专科学校广东肇庆526020

目的探讨3种半夏(姜半夏、清半夏和法半夏)多糖(PSPR)对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(h PMEC)炎症损伤的保护作用。方法以水提醇沉法提取PSPR;体外培养的h PMEC同时加入LPS 1 mg·L^(-1)+PSPR 100和400 mg·L^(-1)孵育24 h。CC... 详细信息

目的探讨3种半夏(姜半夏、清半夏和法半夏)多糖(PSPR)对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(h PMEC)炎症损伤的保护作用。方法以水提醇沉法提取PSPR;体外培养的h PMEC同时加入LPS 1 mg·L^(-1)+PSPR 100和400 mg·L^(-1)孵育24 h。CCK-8法测定细胞存活率,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL^(-1)β),IL-6和IL-8释放,用Western蛋白质印迹法检测细胞IL-8和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,实时定量PCR技术分析IL-8和ICAM-1 m RNA水平。结果与溶剂对照组相比,LPS 1 mg·L^(-1)损伤组细胞存活率显著降低(P细胞存活率下降(P细胞趋化作用。

关键词：多糖半夏急性肺损伤人肺微血管内皮细胞

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山姜素对肺微血管内皮细胞损伤保护机制

中国中西医结合杂志 2017年第4期37卷 476-479页

作者：王振冉李扬唐博广西桂林医学院附属医院胃肠外科广西541001 广西桂林医学院附属医院肿瘤内科广西541001 广西桂林医学院附属医院肝胆外科广西541001

目的研究山姜素对急性人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)损伤的保护机制。方法应用不同浓度的LPS(0.01、0.1、1.0、10 mg/L)作用于HPMECs,确定造模最佳浓度。应用山姜素(40、80、160、320 mg/L)干预HPMECs损伤模型,另选择正常HPMECs为对照组,每组3个重复样本,观察各组HPMECs存活率,检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、TNF-α、水通道蛋白-1(APQ-1)蛋白及mRNA表达。结果与对照组比较,模型组ICAM-1及TNF-α蛋白表达升高,AQP-1蛋白及mRNA表达降低(P细胞存活率升高,ICAM-1及TNF-α蛋白表达降低,AQP-1蛋白及mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论山姜素通过下调ICAM-1、TNF-α蛋白表达并上调APQ-1蛋白及mRNA表达,从而对急性HPMECs损伤起保护作用。

关键词：山姜素水通道蛋白人肺微血管内皮细胞损伤

腺苷A_(2B)受体激活减轻脓毒症诱导的急性肺损伤及肺微血管内皮炎症损伤

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中国临床新医学 2024年第2期17卷 138-144页

作者：王慧霞安友仲北京大学人民医院重症医学科北京100044

目的分析腺苷A_(2B)受体(A_(2B) R)激活对脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)的影响并探讨其在肺微血管内皮炎症损伤中的调控作用。方法(1)将24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、ALI模型组(ALI组)、A_(2B) R激动剂BAY60-6583干预组(ALI+BAY... 详细信息

目的分析腺苷A_(2B)受体(A_(2B) R)激活对脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)的影响并探讨其在肺微血管内皮炎症损伤中的调控作用。方法(1)将24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、ALI模型组(ALI组)、A_(2B) R激动剂BAY60-6583干预组(ALI+BAY组)和A_(2B) R抑制剂PSB1115干预组(ALI+PSB组),每组6只。制模后24 h处死大鼠取肺组织,光镜下行肺损伤评分(Smith评分),计算肺湿/干质量比值(W/D)。Evans Blue染色法测定肺水清除率(AFC)。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。(2)采用TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞(HPMECs)损伤模型,设立对照组、TNF-α组、BAY组、PSB组、BAY+TNF-α组和PSB+TNF-α组,各组细胞培养24 h后采用异硫氰酸荧光素(FITC)-白蛋白(albumin)法检测HPMECs单层通透性,Werstern blot法检测IL-1β、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮钙黏连蛋白(VE-cadherin)、促血管生成素(ANGPT)的表达水平。结果与sham组比较,ALI组的Smith评分、肺W/D及肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平均显著升高,AFC显著降低;与ALI组比较,ALI+BAY组的Smith评分、肺W/D及肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低,AFC显著升高;而ALI+PSB组结果相反。TNF-α诱导HPMECs损伤模型中,与对照组比较,TNF-α组IL-1β、ICAM-1表达水平及HPMECs单层通透性升高,VE-cadherin、ANGPT表达水平降低。与TNF-α组比较,BAY+TNF-α组IL-1β、ICAM-1表达水平及HPMECs单层通透性降低,VE-cadherin、ANGPT表达水平升高,而PSB1115预处理可逆转上述现象。上述各组之间差异有统计学意义(均P肺微血管内皮炎症、降低通透性、促进血管生成等途径起保护作用。

关键词：腺苷A_(2B)受体脓毒症急性肺损伤人肺微血管内皮细胞炎症